一种测定水中阿维菌素残留的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法，它是将样品经0.22μm的滤膜过滤后，用含有70μL三氯甲烷的1.0mL丙酮萃取，氮气吹干，再用50.0μL甲醇溶解，取20μL进行色谱分析，采用甲醇∶水（80∶20）作为流动相，245 nm紫外检测器检测阿维菌素残留。结果表明：在10~500μg/mL之间线性良好，相关系数=0.999。添加浓度为0.1，1.0，5.0μg/mL时，阿维菌素的平均回收率分别为92.51%、95.03%、82.84%，按信噪比10倍计算，检出限为0.1μg/mL。说明采用本发明的方法净化水中阿维菌素快速、环保。
【专利说明】
一种测定水中阿维菌素残留的方法
技术领域
[0001] 本发明属于仪器检测技术领域，涉及作为农药，兽药的杀虫剂残留检测的方法，更 具体的说是一种阿维菌素水中残留的检测方法。
【背景技术】
[0002] 阿维菌素(Abamectin，ABA)是由日本北里大学和美国默克公司首先开发的一类十 六元大环内酯类化合物，对螨类和昆虫具有胃毒和触杀作用，是一种高效、广谱的抗生素类 杀虫、杀螨剂，在农作物和家畜中应用广泛。然而，阿维菌素的急性经口毒性很高，对大鼠 的致死中量值为10.6~11.3 mg/ kg，对哺乳动物的繁殖能力具有潜在的毒性。我国农业 部规定：牛肉组织中阿维菌素的最高残留限量(MRL)为50~100 yg/ kg，羊肉组织中阿维菌 素的MRL为25~50 yg/kg。阿维菌素作为农药使用时，可能会被雨水冲刷入水中；作为兽药使 用时，动物粪便中的药物也可以被雨水冲刷入水中，造成水污染。水中阿维菌素会造成地下 水或者农作物用水的污染。因此，监测水中阿维菌素残留对保障人类健康和保护环境至关 重要。
[0003] 近年来，对阿维菌素在农作物及畜产品中残留的分析方法研究众多，但国内关于 液相色谱微萃取提取、净化水中阿维菌素的前处理方法未见报道。以往阿维菌素残留的提 取及净化方法有机试剂使用多，不仅对分析者身体健康有害，还易造成污染，试验将分散液 相微萃取净化与高效液相色谱-紫(HPLC-UV)检测方法相结合，建立了一种测定水中阿维菌 素残留的方法。此方法有机试剂使用少，快速、环保。
【发明内容】
[0004] 本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法，其特征在于按如下的步骤进 行： (1) 标准溶液的配制： 1) 储备液:取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌 素溶液； 2) 工作液:用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50，100, 200, 500 yg/mL浓度 的标准溶液； (2) 方法： 1) 色谱条件:Eclipse plus Ci8色谱柱3.5 _，4.6 mmX 100 mm，流动相为甲醇：水的 体积比为80:20,流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 °C，进样量为20此，定 量方法采用外标法； 2) 线性试验:分别取10，50，100，200，500 yg/mL浓度的标准工作液20此，进行HPLC分 析，每个浓度进样3次，以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均 值为纵坐标作标准曲线，进行线性相关性统计分析。
[0005] 3)水样品前处理： 水样经0.22 ym的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用 50此甲醇溶解，涡旋30 s，取20此进行色谱分析； 取6个空白水样，前处理后进行HPLC测定，按10倍信噪比（S/ N =10)进行计算，本方 法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL。
[0006] 本发明所述测定水中阿维菌素残留的方法，其中的水样品包括河水、自来水、井 水、湖水。
[0007] 本发明更加详细的步骤如下： 1材料 1.1仪器 高效液相色谱仪，配手动进样器和紫外检测器(型号为Agilent-1260)，由安捷伦科技 有限公司生产;Eclipse plus Cis色谱柱(3.5 wn，4.6 mmXlOO mm)，由安捷伦科技有限公 司生产;微型旋涡混合仪(型号为WH-2)，由上海沪西分析仪器厂生产；超纯水制作系统（型 号为UL UPURE)，由四川优普超纯科技有限公司生产。 1.2试剂 阿维菌素标准品，由美国Sigma-Alorich公司生产；甲醇(色谱纯），由天津康巢生物医 药有限公司生产;丙酮(分析纯）、三氯甲烷(分析纯），由利安隆博华医药化学有限公司（天 津)生产 河水，取自天津市海河;湖水，取自天津市水上公园；自来水，取自天津农学院兽医学实 验室;井水，取自天津市宝坻区郝各庄镇。所有水样在分析前先过0.22 ym滤膜，除去颗粒 物。
[0008] 1.3标准溶液的配制 储备液:取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌素 溶液。
[0009] 工作液：用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50, 100, 200, 500 iig/mL浓 度的标准溶液。
[0010] 2 方法 2.1色谱条件 Eclipse plus Cis色谱柱(3.5 ym，4.6 mmXlOO mm)，流动相为甲醇:水(80:20)，流速 为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 °C，进样量为20此，定量方法采用外标法。
[0011] 2.2线性试验 分别取10,50，100,200,500邱/11^浓度的标准工作液20此，进行冊^：分析。每个浓度 进样3次。以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均值为纵坐标 作标准曲线，进行线性相关性统计分析。
[0012] 2.3样品前处理 水样经0.22 ym的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含 有70.0 iiL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液。氮气吹干，再用 50此甲醇溶解，涡旋30 s，取20此进行色谱分析。
[0013] 2.4添加回收率试验 样品处理同2.3所述，水中阿维菌素的添加浓度分别为0.1，1.0,5.0邱/!^，同一天内 重复测定5次，计算日内变异系数;连续测定3 d，计算日间变异系数。
[0014] 3结果与分析 3.1线性试验 在10~500 yg/mL浓度范围内线性良好，线性方程为7= 1 667.0;r+ 127.0,线性回归 系数（?2) =0.999。标准曲线见图1。
[0015] 3.2液相微萃取条件的分析 采用分散液相微萃取法对水中阿维菌素进行前处理净化，分别采用四氯化碳、三氯甲 烷、二氯甲烷作为萃取剂发现，只有采用三氯甲烷作为萃取试剂回收率最高。
[0016] 以三氯甲烷作为萃取剂，分别采用丙酮、甲醇、乙醇、乙腈作为分散剂发现，三氯甲 烷和甲醇、乙醇不能形成乳浊液，丙酮和乙腈作为分散剂时相比较，丙酮的萃取效果最好， 回收率最高。
[0017] 确定丙酮与三氯甲烷作为萃取剂和分散剂后，对丙酮和三氯甲烷的比例进行了多 次试验，首先确定1 mL丙酮的萃取效果最好，分别采用含有50 yL、70 yL、100 yL、200 yL三 氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂对标准溶液进行萃取，试验结果表明：含有50此三氯甲烷的 1 mL丙酮对阿维菌素的萃取效果不好，回收率低;含有70 yL、100 yL、200 yL三氯甲烷的1 mL丙酮对阿维菌素的萃取效果良好，而且更高含量三氯甲烷的丙酮溶液进行萃取，效果也 不增加，因此确定采用含有70 yL三氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂，效果良好，经济环保。
[0018] 分别米用3 000 r/min离心5 min、3 000 r/min离心 10 min，静置5 min、10 min、 15 min以促进萃取过程，结果表明，静置5 min萃取效率低，3 000 r/min离心5 min、3 000 r/min离心10 min，静置10 min、15 min的萃取效率相同，本方法采用静置10 min。
[0019] 3.3方法的灵敏度 取6个空白水样，经2.3处理后进行HPLC测定，按10倍信噪比（S/ N =10)进行计算， 本方法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL，空白样品色谱见图2,0.1 yg/mL阿维菌素 类药物添加样品色谱见图3。在阿维菌素的保留时间位置均无杂峰干扰。
[0020] 3.4方法的检出限、回收率和精密度 阿维菌素从低到高3个浓度的样品添加回收率和日内变异系数见表1。平均回收率范围 为82.84%~95.03%，日内变异系数范围为3.78%~7.04%，日间变异系数范围为3.29%~4.29%， 回收率较高，重复性较好。
[0021] 3.5方法的可行性 为验证方法的可行性，将本方法应用于4种不同水样，即河水、自来水、井水、湖水中对 目标待测物进行测定，均未测出阿维菌素的残留，结果见表1。
[0022]表1添加回收率及精密度测定
【附图说明】： 图1为阿维菌素标准曲线； 图2为空白样品色谱结果； 图3为纯水中添加0.1 yg/mL阿维菌素的色谱结果。
[0023]
【具体实施方式】
[0024] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段 均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的 范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本 发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也 属于本发明的保护范围。
[0025] 实施例1 (1) 自来水样品前处理： 水样经0.22 ym的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用 50此甲醇溶解，涡旋30 s，取20此进行色谱分析； (2) 色谱方法： 色谱条件:Eclipse plus Ci8色谱柱3.5 wii，4.6 mmX 100 mm，流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 °C，进样量为20此，定量 方法米用外标法； 实施例2 (1) 农作物用水样品前处理： 水样经0.22 ym的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用 50此甲醇溶解，涡旋30 s，取20此进行色谱分析； (2) 色谱方法： 色谱条件:￡(：]^86口1118&8色谱柱3.5 11111，4.6 1]1111\10〇1111]1，流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 °C，进样量为20此，定量 方法米用外标法； 实施例3 比较试验 结论：
(1)有机试剂用量小，环境友好;最大的特点就是有机试剂用量少，而且方法和方法不 同。
[0026] (2)前处理操作简单。
【主权项】
1. 一种测定水中阿维菌素残留的方法，其特征在于按如下的步骤进行： (1) 标准溶液的配制： 1) 储备液:取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌 素溶液； 2) 工作液：用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50，100, 200, 500 yg/mL浓度 的标准溶液； (2) 方法： 1) 色谱条件:Eclipse plus Cis色谱柱3.5 μηι，4.6 mmX 100 mm，流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 °C，进样量为20 yL，定量 方法米用外标法； 2) 线性试验：分别取10，50，100，200，500 yg/mL浓度的标准工作液20 yL，进行HPLC分 析，每个浓度进样3次，以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均 值为纵坐标作标准曲线，进行线性相关性统计分析； 3) 水样品前处理： 水样经0.22 μπι的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含 有70.0 yL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 yL三氯 甲烷的I mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用 50此甲醇溶解，涡旋30 s，取20 yL进行色谱分析； 取6个空白水样，前处理后进行HPLC测定，按10倍信噪比，S/ N =10进行计算，其中对 阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL。2. 权利要求1所述测定水中阿维菌素残留的方法，其中的水样品包括河水、自来水、井 水、农作物水、湖水。
【文档编号】G01N30/06GK105911184SQ201610246880
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月20日
【发明人】张伟, 张鑫, 张欣达, 张超, 金天明
【申请人】天津农学院