一种测定盐酸氨基葡萄糖中氯甲烷、氯乙烷的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的方法，它包括如下步骤：气相色谱仪的色谱柱为DB?5毛细管，载气为氮气，检测器为ECD，进样方式为顶空进样。吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各1ml置顶空瓶中，密封，孵化，取上部气体100μl注入气相色谱仪，记录色谱图。氯甲烷的线性范围为0.1010?0.6059μg/ml，氯乙烷的线性范围为0.1290?0.7742μg/ml。本发明应用气相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的残留，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，通过检测盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的残留量，能够更好控制盐酸氨基葡萄糖的质量。
【专利说明】
一种测定盐酸氨基葡萄糖中氯甲烷、氯乙烷的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及分析技术领域，具体涉及一种气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖中氯甲 烷、氯乙烷的方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸氨基葡萄糖可阻断骨关节炎的病理过程，通过刺激粘多糖的生化合成及增加 量骨骼钙质的摄取，提高骨与软骨组织的代谢功能与营养，亦能改善及增强滑膜液的粘稠 度，增加滑膜液合成，提供关节润滑功能，本品可阻断骨关节炎的病理过程，防治疾病进展， 改善关节活动功能，缓解关节疼痛，抑制及消退关节变性形成。
[0003] 盐酸氨基葡萄糖生产、提取、纯化过程中会使用甲醇、乙醇作为溶剂，由于盐酸和 甲醇、乙醇会产生亲核取代反应生成氯甲烷、氯乙烷。氯甲烷、氯乙烷属于卤代烷烃，具有基 因毒性，为此需要对其残留量进行控制，实现氯甲烷、氯乙烷的分离检测，对其质量控制方 面具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是建立一种测定盐酸氨基葡萄糖原料中氯甲烷、氯乙烷的方法，可 以更好的控制盐酸氨基葡萄糖原料药中残留的氯甲烷、氯乙烷，可以更好的对盐酸氨基葡 萄糖原料药中可能存在的基因毒杂质进行检测。
[0005] 本发明的技术方案是，气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的 方法，它包括如下步骤： 对照溶液制备:取氯甲烷和氯乙烷适量，精密称定，用DMS0溶解制成每lml中各约含0.6 y g氯甲烷、0.6y g氯乙烷作为对照溶液； 供试品溶液制备:本品适量，加DMS0溶解液制成每lml含盐酸氨基葡萄糖20mg的溶液， 作为供试品溶液； 空白溶液的制备:DMS0; 色谱柱为:DB-5石英毛细管柱； 色谱条件:柱温初始为40°C，保持12分钟，以每分钟升温50°C的速率升至250°C，保持10 分钟；再以每分钟升温50 °C的速率升至40 °C，保持5分钟;进样温度：200 °C ;检测器:E⑶;检 测器温度:250°C ;载气:N2;流速:0.8ml/min 顶空条件:加热炉温度:45 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间40min，进样量100y 1。
[0006] 进样:取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各lml，分别置10ml顶空瓶中，密封，放入 顶空加热装置，顶空进样记录色谱图； 计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于 0.99,对照品溶液峰形对称，理论塔板数以氯甲烷计2000以上;供试品溶液色谱图中如有氯 甲烷、氯乙烷色谱峰，应与对照溶液中氯甲烷、氯乙烷色谱峰保留时间一致，空白溶液色谱 图，无与氯甲烷、氯乙烷对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰； 每克盐酸氨基葡萄糖原料中对氯甲烷、氯乙烷分别不得过30ug，氯甲烷的浓度范围为 0 ? 10HM) ? 6059μg/ml，氯乙烷的浓度范围为0 ? 1290~0 ? 7742μg/ml。
[0007]
【附图说明】：图1检测器条件摸索色谱图； 图2进样方式摸索色谱图； 图3选色谱柱的选择对比图； 图4空白干扰的排除色谱图； 图5色谱柱的确立色谱图； 图6色谱柱的筛选色谱图； 图7氯甲烷的线性回归图； 图8氯乙烷的线性回归图； 图9检测器温度变化测试结果对比图； 图10起始柱温变化测试结果对比图； 图11保温温度变化测试结果对比图； 图12进样量变化测试结果对比图； 图13流速变化测试结果对比图； 图14保温时间变化测试结果对比图； 图15分流比变化测试结果对比图。
[0008] 以下通过实施例形式再对本发明的内容作进一步详细说明，但不应就此理解为本 发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普 通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。
[0009] 实施例1试验方法筛选:检测器的条件摸索 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTracel300、Trermoscientif ic 色谱工作站； 试剂:氯甲烷、氯乙烷、DMS0; 色谱柱:DB-624石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? 00ym〇
[0010] 色谱条件： 柱温初始为40°C，保持7分钟，以每分钟升温50°C的速率升至250°C，保持25分钟;进样 温度:200°C ;检测器:FID;检测器温度:250°C ;载气:N2;流速:0.8ml/min分流：16ml/min。
[0011] 顶空条件:加热炉温度:45 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间40min，进样量100y 1。 [0012]供试溶液的制备： 0.01N氯甲烷溶液，取1. OMo 1 /L氯甲烷吸lml至100ml，即得;0.02N氯乙烷储备溶液，取 2 ? 0Mo 1/L氯乙烷吸lml至100ml，即得;空白溶液，DMS0;样品10%，样品100mg加lml DMS0。 [0013] 结果见图1。
[0014]结论:在该色谱条件下使用FID检测器检测，氯甲烷的出峰时间为6.867min，氯乙 烷的出峰时间为8.248min，DMS0出峰时间为llmin左右，色谱图中有DMS0色谱峰，以及其他 未知溶剂峰出现，这些色谱峰的出现会干扰氯甲烷，氯乙烷的检测。
[0015]实施例2试验方法筛选:进样方式的摸索 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTrace 1300、Trermoscientif ic 色谱工作站； 色谱柱:DB-624石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? 00ym; 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持10分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至220 °C，保持25分钟;进样 方式:液体进样;流速:0.8ml/min;进样量:ly 1;进样温度:200°C ;检测器:E⑶;检测器温度： 250°C ;载气:N2;分流比：1:20。
[0016] 对照品储备液的配制：精密量取5mg/ml的氯甲烷甲醇溶液0.5ml，于25ml量瓶中， 加甲醇定容至刻度，作为对照品储备液。
[0017] 对照溶液的配制:精密量取对照品储备液5ml，于10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度， 制成每lml中约含0.05mg氯甲烷溶液，作为对照溶液。
[0018]供试溶液的配制：精密称取本品100mg，到2ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每 lml中约含50mg的样品，作为供试品溶液。
[0019] 加样回收样品溶液配制：精密称取样品100mg，到2ml量瓶中，加入100y 1对照品储 备液，加甲醇定容至刻度，作为回收率100%的样品溶液。
[0020]取对照溶液、供试溶液、加样回收样品溶液分别吸取lyl进样，记录色谱图。
[0021] 在7.8min处有溶剂峰，氯甲烷在5.8min处出峰。
[0022] 结论:在该方法条件下，采用液体进样对氯甲烷的回收率试验的测定有干扰，导致 氯甲烷响应值没有顶空气体进样高。结果见图2。
[0023] 实施例3试验方法筛选:程序升温的条件摸索 仪器与试剂： 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTracel300、Trermoscientif ic 色谱工作站 色谱柱:DB-624石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? 00ym， 色谱条件： 柱温初始为40°C，保持7分钟，以每分钟升温50°C的速率升至250°C，保持25分钟;进样 温度:200°C ;检测器:ECD;检测器温度:250°C ;载气:N2;流速:0.8ml/min分流：16ml/min。 [0024] 顶空条件:加热炉温度:45°C ;取样针温度:55°C，保温时间40min，进样量100yl 0.0 IN氯甲烷溶液，0.02N氯乙烷储备溶液，DMS0，2%样品，取20mg样品至lml加DMS0溶 解。
[0025] 取上述溶液分别进样，记录色谱图。
[0026]结论:在该色谱条件下氯甲烷的出峰时间为9.240min，进样浓度大色谱峰拖尾。 [0027] 氯乙烷的出峰时间为11.170min，进样浓度大色谱峰拖尾，且氯乙烷峰出现在程序 升温以后，色谱基线不平。DMS0在7.253min处有色谱峰出现。
[0028] 10%的样品在6.578分钟有峰出现。由于平衡时间短，初始基线不平。
[0029] 实施例4试验方法筛选:色谱柱的选择条件摸索 仪器：气相色谱仪(Trermoscientif icTrace 1300 )Trermoscient if ic 色谱工作站 色谱柱:DB-624石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? OOym 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持10分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至220 °C，保持25分钟;进样 方式:顶空进样;载气流速:0.8ml/min;进样量：100y 1;进样温度:200°C ;检测器:E⑶;检测 器温度:250°C ;载气:N2;分流比：1:20;顶空加热炉温度:45 °C ;保温时间：30min。
[0030] 结果见图3,在7.2min、9.3min处有空气峰，氯甲烷在9.3min处出峰。
[0031]结论:在该方法条件下，采用DB-624石英毛细管柱氯甲烷峰和空气峰有干扰。
[0032]实施例5试验方法筛选:色谱柱的选择条件摸索 仪器：气相色谱仪(Trermoscientif icTracel300)Trermoscientif ic 色谱工作站 色谱柱:DB-WAX石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? OOym 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持10分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至220 °C，保持25分钟;进样 方式:顶空进样;载气流速:0.8ml/min;进样量：100y 1;进样温度:200°C ;检测器:E⑶;检测 器温度:250°C ;载气:N2;分流比：1:20;顶空加热炉温度:45 °C ;保温时间：30min。
[0033] 对照品储备液的配制：精密量取5mg/ml的氯甲烷甲醇溶液0.5ml，于25ml量瓶中， 加甲醇定容至刻度，作为对照品储备液。
[0034] 对照溶液的配制:精密量取对照品储备液5ml，于10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度， 制成每lml中约含0.05mg氯甲烷溶液，作为对照溶液。
[0035] 供试溶液的配制:精密称取本品100mg，到顶空瓶中，加入2ml的甲醇，制成每lml中 约含50mg的样品，作为供试品溶液。
[0036]加样回收样品溶液配制：精密称取本品100mg，到顶空瓶中，加入2ml的对照溶液， 作为回收率1 〇〇%的样品溶液。
[0037] 取对照溶液、供试溶液、加样回收样品溶液分别进样，记录色谱图。
[0038] 在7.07min、9.14min处有溶剂峰，氯甲烷在8.80min处出峰。
[0039]结论:在该方法条件下，采用DB-WAX石英毛细管柱氯甲烷峰和空气峰分离度达不 到要求。
[0040]实施例6试验方法筛选:空白干扰的排除 仪器与试剂： 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTrace 1300、Trermoscientif ic 色谱工作站 色谱柱:DB-624石英毛细管柱，30m X 0.530mm X 3.00ym，USD592144H 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持12分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至250 °C，保持10分钟;在以 每分钟升温50°C的速率降至40°C，保持5分钟进样温度：200°C ;检测器:E⑶;检测器温度： 250°C ;载气:N2;流速:0.8ml/min分流：16ml/min。
[00411 顶空条件:加热炉温度:45 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间40min，进样量100y 1。
[0042]取空瓶充了氮气的样品瓶，含有0.01m〇l/L氢氧化钠水溶液顶空瓶的分别进样，记 录色谱图，结果见图4。
[0043] 结论:在该色谱条件下空瓶的出峰时间为7.102min，在9.133处有小峰出现。
[0044]充了氮气的样品瓶7.11 Omin出峰的峰面积明显变小时间为，在9.433min仍然还有 小峰出现。判断7. llOmin处色谱峰为空气中的氧气干扰。
[0045] 含有0.01mol/L氢氧化钠水溶液9.4min出峰，减小判断9.4min处为二氧化碳。
[0046]实施例7试验方法筛选:色谱柱的确立 仪器与试剂： 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTrace 1300、Trermoscientif ic 色谱工作站 色谱柱:DB-5 石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? 00ym，USE381032H 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持12分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至250 °C，保持10分钟;在以 每分钟升温50°C的速率降至40°C，保持5分钟进样温度：200°C ;检测器:E⑶;检测器温度： 250°C ;载气:N2;流速:0 ? 8ml/min分流：16ml/min 顶空条件:加热炉温度:45 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间40min，进样量100y 1。
[0047] 取DMS0、含有0.0001M〇1/L氯甲烷和0.0001M〇1/L氯乙烷溶液的对照溶液分别放入 顶空瓶分别进样记录色谱图，结果见图5。
[0048] 结论:空白溶剂的出峰时间为6.850min，和7.822min。
[0049] 对照溶液中空气的出峰时间为6.850min，和7.818min，氯甲烷和氯乙烷的出峰时 间为8.543min，和11.080min，空气对氯甲烷和氯乙烷的检测没有干扰。
[0050]实施例8试验方法筛选:色谱柱的筛选 仪器：气相色谱仪 Trermoscientif icTracel300、Trermoscientif ic 色谱工作站 色谱柱:DB-5石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? 00ym 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持10分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至220 °C，保持25分钟;进样 方式:顶空进样;载气流速:0.8ml/min;进样量：100y 1;进样温度:200°C ;检测器:E⑶;检测 器温度:250°C ;载气:N2;分流比：1:20;顶空加热炉温度:45 °C ;保温时间：30min。
[0051 ] 结果见图6,在7.1min、8.5min处有空气峰，氯甲烷在8.7min处出峰。
[0052]结论:在该方法条件下，采用DB-5石英毛细管柱氯甲烷峰和空气峰能够分离。
[0053]实施例9方法的专属性 仪器：气相色谱仪(Trermoscientif icTrace 1300 )Trermoscient if ic 色谱工作站 色谱柱:DB-5石英毛细管柱，30m X 0 ? 530mm X 3 ? OOym 色谱条件： 柱温初始为40 °C，保持10分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至220 °C，保持25分钟;进样 方式:顶空进样;载气流速:0.8ml/min;进样量：100y 1;进样温度:200°C ;检测器:E⑶;检测 器温度:250°C ;载气:N2;分流比：1:20。
[0054]取DMSOlml放入顶空加热炉加热后进样，作为空白，记录色谱图。结果表明溶剂 DMS0对氯甲烷、氯乙烷测定无干扰。各组分的定性:分别取含氯甲烷1.5μg/ml、氯乙烷1.8y g/ml的DMS0溶液，各取lml密封放入顶空加热炉加热后进样，记录色谱图。各溶剂峰保留时 间见表1。
[0055]表1各溶剂的保留时间
以系统适用性项下测试结果评价，取标准溶液的色谱图，各残留溶剂出峰顺序依次为 空气、氯甲烷、氯乙烷其保留时间和相对保留时间比(RRT)数据见表2。
[0056]表2标准溶液中各溶剂的保留时间
结论:该方法因为相邻组分间分离度均大于1.5,相邻峰均能完全分离，专属性良好。 [0057]实施例10进样精密度检测 色谱条件同实施例9,取标准溶液lml顶空加热炉加热后进样，记录色谱图至35min，以 上各溶剂完全出峰，出峰顺序依次为氯甲烷、氯乙烷。标准溶液连续进样5次，计算每次进样 各溶剂的峰面积，求得相对标准偏差(应不大于10. 〇 % )。
[0058] 表3精密度试验
结论:试验表明本色谱系统精密度良好。数据见表3。
[0059]实施例11线性关系考察 色谱条件同实施例9,精密量取氯甲烷、氯乙烷，用DMS0,制备成含氯甲烷浓度分别为 0.1010、0.2020、0.3029、0.4039、0.5049、0.6059此/1111;氯乙烷浓度分别为0.1290、0.2581、 0.3871、0.5162、0.6452、0.7742μg/ml的对照品溶液。各精密量取lml顶空加热炉加热后注 入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，结果见表4、表5。以峰面积值(A)对浓度(C)进行线 性回归，得一直线，见图7、图8。
[0060]表4氯甲烷线性回归数据
表5氯乙烷线性回归数据
氯甲烷的回归方程 y=〇 ? 1015x+0 ? 0031，r=0 ? 9960 氯乙烷的回归方程 y=〇 ? 1158x+0 ? 0053，r=0 ? 9977 结论：以上结果表明，氯甲烷在0. l〇l(M).6059μg/ml范围内，氯乙烷在0.1290~0.7742y g/ml范围内进样浓度与峰面积值有良好的线性关系。
[00611实施例12检测限与定量限 色谱条件同实施例9,将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较， 以S/N~3时相应的浓度为检测限浓度，得到氯甲烷的检测限浓度为0.0101iig/ml，氯乙烷的 检测限浓度为0.0043μg/ml。
[0062]将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，以S/N~10时相 应的浓度为定量限浓度，得到氯甲烷的定量限浓度为〇.〇549μg/ml，氯乙烷的定量限浓度为 0.0129iig/ml 〇
[0063] 结论:氯甲烷定量限浓度为0.0549μg/ml，氯乙烷定量限浓度为0.0129μg/ml。
[0064] 实施例13重复性试验 按正文方法，对同一批盐酸氨基葡萄糖样品(批号20150909)5份进行测定，求得相对标 准偏差，结果见表6。
[0065] 表6重现性试验
结论:试验结果表明该法重现性良好。
[0066]实施例14重复性试验回收率试验 色谱条件同实施例9，分别按氯甲烷、氯乙烷80%、100%、120%的量，加入盐酸氨基葡萄糖 同一批样品（批号20150909)于量瓶中，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件 测定。按下式计算回收率，结果见表7、表8。
[0067]表7氯甲烷回收率试验
表8氯乙烷回收率试验
结论:试验表明该法的准确度良好。
[0068] 实施例15耐用性检测器温度变化 色谱条件同实施例9,将检测器温度变化为:检测器温度变化1:240°C、顶空检测器温度 变化2:260°C、原始顶空检测器温度为:250°C，测试结果见图9，表9。
[0069] 表9检测器温度变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见检测器温度在240°C~ 260°C允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0070] 实施例16耐用性起始柱温变化 色谱条件同实施例9，将起始柱温变化为:起始柱温变化1:35 °C、起始柱温变化2:45 °C、 原始起始柱温:40 C，测试结果见图10、表10。
[0071] 表10起始柱温变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见色谱柱起始温度在35°C ~45 °C允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0072]实施例17耐用性保温温度变化 色谱条件同实施例9，将顶空加热器保温温度变化为:保温温度变化1:43 °C、保温温度 变化2:47°C、原始保温器温度为:45°C，测试结果见图11、表11。
[0073] 表11保温温度变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见保温温度在43 °C~45°C 允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0074]实施例18耐用性样量变化 色谱条件同实施例9，将进样量变化为:进样量变化1:200iU、进样量变化2:300iU、原始 进样量为:l〇〇yl，测试结果见图12、表12。
[0075] 表12进样量变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见进样量在lOOyl~300iil 允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0076]实施例19耐用性流速变化 色谱条件同实施例9，将流速变化为:流速变化1:0.7ml/min、流速变化2:0.9ml/min、原 始流速为:〇.8ml/min，测试结果见图13、表13。
[0077] 表13流速变化测试结果对比表
结论：按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见流速在〇 . 7ml/min~ 0.9ml/min允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0078]实施例20耐用性保温时间变化 色谱条件同实施例9,将保温时间变化为:保温时间变化1:10分钟、保温时间变化2:20 分钟、原始保温时间:40分钟，测试结果见图14、表14。
[0079] 表14保温时间变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见保温时间时在10分钟~ 40分钟允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0080] 实施例21耐用性分流比变化 色谱条件同实施例9，将分流比变化为:分流比变化1:1:15、分流比变化2:1:25、原始分 流比为：1:20,测试结果见图15、表15。
[0081] 表15分流比变化测试结果对比表
结论:按上述色谱条件下测定，均能达到所需的分离效果，可见分流比在250°C 1:15~ 1:25允许范围内变化对残留溶剂分离没有影响。
[0082] 实施例22盐酸氨基葡萄糖中氯甲烷和氯乙烷含量测试 色谱条件同实施例9分别称取批号为20150912、20150916、20150918、20150920、 20150922、20150924、20150926批号的盐酸氨基葡萄糖样品，进样测试结果见表16。
[0083]表16进样测试结果
备注:试剂氯甲烷为梯希爱化成LOT: 2RYZE-M0、氯乙烷为梯希爱化成LOT: MZYGG-CE、 DMS0为ScharlauLOT:14398313)。
【主权项】
1. 气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的方法，其特征在于，它包括 如下步骤： 对照溶液制备:取氯甲烷和氯乙烷适量，精密称定，用DMSO溶解制成每1ml中各约含0.6 yg氯甲烷、0.6yg氯乙烷作为对照溶液； 供试品溶液制备：本品适量，加 DMSO溶解液制成每1ml含盐酸氨基葡萄糖20mg的溶液， 作为供试品溶液； 空白溶液的制备:DMS0; 色谱柱为:DB-5石英毛细管柱； 色谱条件:柱温初始为35~45 °C，保持12分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至250 °C，保 持10分钟；再以每分钟升温50°C的速率升至40°C，保持5分钟；进样温度：200°C ;检测器： ECD;检测器温度:240~260°C ;载气:N2;流速:0 · 7~0 · 9ml/min; 顶空条件：加热炉温度：43~47 °C ;取样针温度：55 °C，保温时间10~40min，进样量100~ 300μ1； 进样:取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各lml，分别置IOml顶空瓶中，密封，放入顶空 加热装置，顶空进样记录色谱图； 计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99， 对照品溶液峰形对称，理论塔板数以氯甲烷计2000以上;供试品溶液色谱图中如有氯甲烷、 氯乙烷色谱峰，应与对照溶液中氯甲烷、氯乙烷色谱峰保留时间一致，空白溶液色谱图，无 与氯甲烷、氯乙烷对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰； 每克盐酸氨基葡萄糖原料中对氯甲烷、氯乙烷分别不得过30ug，氯甲烷的浓度范围为 0 · IOl(M) · 6059μg/ml，氯乙烷的浓度范围为0 · 1290~0 · 7742μg/ml。2. 权利要求1所述气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的方法，其特 征在于，它包括如下步骤： 对照溶液制备:取氯甲烷和氯乙烷适量，精密称定，用DMSO溶解制成每1ml中各约含0.6 yg氯甲烷、0.6yg氯乙烷作为对照溶液； 供试品溶液制备：本品适量，加 DMSO溶解液制成每1ml含盐酸氨基葡萄糖20mg的溶液， 作为供试品溶液； 空白溶液的制备:DMS0; 色谱柱为:DB-5石英毛细管柱； 色谱条件:柱温初始为40 °C，保持12分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至250 °C，保持10 分钟；再以每分钟升温50 °C的速率升至40 °C，保持5分钟;进样温度：200 °C ;检测器:E⑶;检 测器温度:250°C ;载气:N2;流速:0.8ml/min; 顶空条件:加热炉温度:45 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间40min，进样量100μ 1; 进样:取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各lml，分别置IOml顶空瓶中，密封，放入顶空 加热装置，顶空进样记录色谱图； 计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99， 对照品溶液峰形对称，理论塔板数以氯甲烷计2000以上;供试品溶液色谱图中如有氯甲烷、 氯乙烷色谱峰，应与对照溶液中氯甲烷、氯乙烷色谱峰保留时间一致，空白溶液色谱图，无 与氯甲烷、氯乙烷对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰； 每克盐酸氨基葡萄糖原料中对氯甲烷、氯乙烷分别不得过30ug，氯甲烷的浓度范围为 O · IOl(M) · 6059μg/ml，氯乙烷的浓度范围为O · 1290~0 · 7742μg/ml。3. 权利要求1所述气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的方法，其特 征在于，它包括如下步骤： 对照溶液制备:取氯甲烷和氯乙烷适量，精密称定，用DMSO溶解制成每1ml中各约含0.6 yg氯甲烷、0.6yg氯乙烷作为对照溶液； 供试品溶液制备：本品适量，加 DMSO溶解液制成每1ml含盐酸氨基葡萄糖20mg的溶液， 作为供试品溶液； 空白溶液的制备:DMS0; 色谱柱为:DB-5石英毛细管柱； 色谱条件:柱温初始为35°C，保持12分钟，以每分钟升温50°C的速率升至250°C，保持10 分钟；再以每分钟升温50 °C的速率升至40 °C，保持5分钟;进样温度：200 °C ;检测器:E⑶;检 测器温度:240°C ;载气:N2;流速:0.7ml/min; 顶空条件:加热炉温度:43 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间IOmin，进样量200μ 1; 进样:取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各lml，分别置IOml顶空瓶中，密封，放入顶空 加热装置，顶空进样记录色谱图； 计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99， 对照品溶液峰形对称，理论塔板数以氯甲烷计2000以上;供试品溶液色谱图中如有氯甲烷、 氯乙烷色谱峰，应与对照溶液中氯甲烷、氯乙烷色谱峰保留时间一致，空白溶液色谱图，无 与氯甲烷、氯乙烷对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰； 每克盐酸氨基葡萄糖原料中对氯甲烷、氯乙烷分别不得过30ug，氯甲烷的浓度范围为 0 · IOl(M) · 6059μg/ml，氯乙烷的浓度范围为0 · 1290~0 · 7742μg/ml。4. 权利要求1所述气相色谱测定盐酸氨基葡萄糖原料药中氯甲烷、氯乙烷的方法，其特 征在于，它包括如下步骤： 对照溶液制备:取氯甲烷和氯乙烷适量，精密称定，用DMSO溶解制成每1ml中各约含0.6 yg氯甲烷、0.6yg氯乙烷作为对照溶液； 供试品溶液制备：本品适量，加 DMSO溶解液制成每1ml含盐酸氨基葡萄糖20mg的溶液， 作为供试品溶液； 空白溶液的制备:DMS0; 色谱柱为:DB-5石英毛细管柱； 色谱条件:柱温初始为45 °C，保持12分钟，以每分钟升温50 °C的速率升至250 °C，保持10 分钟；再以每分钟升温50 °C的速率升至40 °C，保持5分钟;进样温度：200 °C ;检测器:E⑶;检 测器温度:260°C ;载气:N2;流速:0.9ml/min; 顶空条件:加热炉温度:47 °C ;取样针温度:55 °C，保温时间20min，进样量300μ 1; 进样:取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各lml，分别置IOml顶空瓶中，密封，放入顶空 加热装置，顶空进样记录色谱图； 计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99， 对照品溶液峰形对称，理论塔板数以氯甲烷计2000以上;供试品溶液色谱图中如有氯甲烷、 氯乙烷色谱峰，应与对照溶液中氯甲烷、氯乙烷色谱峰保留时间一致，空白溶液色谱图，无 与氯甲烷、氯乙烷对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰； 每克盐酸氨基葡萄糖原料中对氯甲烷、氯乙烷分别不得过30ug，氯甲烷的浓度范围为 O · IOl(M) · 6059μg/ml，氯乙烷的浓度范围为O · 1290~0 · 7742μg/ml。
【文档编号】G01N30/02GK105911207SQ201610470508
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月25日
【发明人】王伟, 王崇益, 钟永成
【申请人】江苏正大清江制药有限公司