一种大青叶中靛玉红的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种大青叶中靛玉红的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将大青叶粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液稀释、离心、过滤后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析；其中，液相色谱法的分析条件为：a)仪器：液相色谱仪；b)色谱柱规格：碳18液相色谱柱4.6mm*250mm5μm；c)柱温：35℃；d)流速：1mL/min；e)流动相：甲醇和0.1wt％醋酸溶液的混合物，其中甲醇和0.1wt％醋酸溶液的体积比为60:40；f)检测波长：290nm。本发明提供了一种大青叶中靛玉红的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。
【专利说明】
一种大青叶中1$玉红的测定方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及实验室检测领域，特别是一种大青叶中靛玉红的测定方法。
【背景技术】
[0002] 2015年药典记录了大青叶中靛玉红的提取和测定方法:取本品细粉0.25g，精密称 定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，浸泡15小时，加热回流提取至提取液无色。回收溶剂至 干，残渣加甲醇使溶解并转移至l〇〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0003] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇一水（75 : 25)为流动相；检测波长为 289nm。理论板数按靛玉红峰计算应不低于4000。
[0004] 此外，在中国文献《大青叶中靛玉红的提取工艺研究》公开了一种大青叶中靛玉红 的提取方法，其采用超声提取，得到了较好的提取效果。但是其操作时间长，且用甲醇和氯 仿作为稀释溶剂，氯仿作为控制药品，需要严格控制其使用量。
[0005] 为了克服药典和现有技术中的缺陷，需要寻找一种可靠的提取分析方法来对大青 叶中靛玉红进行提取和测定。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种中靛玉红的测定方法，该方法操作简单，检测精度比药 典要高。
[0007 ]本发明提供的技术方案为:一种大青叶中靛玉红的测定方法，包括以下步骤：
[0008] 步骤1:将大青叶粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0009] 步骤2:将萃取液稀释、离心、过滤后，得到上清液；
[0010] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0011] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[0012] a)仪器:液相色谱仪
[0013] b)色谱柱规格:碳18液相色谱柱4 ? 6mm*250_5iim
[0014] (3)柱温：35°〇
[0015] d)流速：lmL/min
[0016] e)流动相：甲醇和0. lwt%醋酸溶液的混合物，其中甲醇和0. lwt%醋酸溶液的体 积比为60:40
[0017] f)检测波长：290nm。
[0018] 在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，所述的步骤1具体为：
[0019] S11:将大青叶粉碎后，过筛；
[0020] S12:称取SI 1中获得的1重量份大青叶粉，与0.5重量份硅藻土混合均匀待用；
[0021] S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达 到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0022] 萃取条件为：萃取溶剂为正己烷和乙酸乙酯的混合物，正己烷和乙酸乙酯的体积 比为1:1;萃取温度80°C ;静态萃取时间7min;冲洗体积60% ;静态循环次数3次。
[0023]在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
[0024]在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
[0025]在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
[0026] 在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，步骤2具体为:将萃取液用己烷和乙酸乙 酯的混合物稀释后在1500r/min的条件下离心并过滤，保留滤液，其中，正己烷和乙酸乙酯 的体积比为1:1。
[0027] 在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，液相色谱分析所用的仪器为ThermoU-3000双三元液相液相色谱仪。
[0028]在上述的大青叶中靛玉红的测定方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为 ASE350快速溶剂萃取仪。
[0029] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0030] 本发明的检测方法操作简单，精度比药典方法的精度更高，重复性好。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0032] 实施例1:
[0033]将大青叶样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约lg，精密称定，与0.5g硅藻土混合均匀， 待用，移入到预先放好过滤膜的ASE?10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池 口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用正己 烷和乙酸乙酯(体积比1:1)的混合溶液稀释至刻度，在15000r/min下离心5min，取上清液， 进入LC测定。
[0034]萃取条件(见表1)为：
[0035]表 1
[0037] 分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0038] a)仪器：Thermo 双三元液相（U-3000)
[0039] b)色谱柱:0DS_C18，4.6mm*250mm5iim，即碳18色谱仪，直径4.6mm，长度250mm，粒径 5微米
[0040]
[0041] d)流速：lmL/min
[0042] e)流动相：甲醇和0. lwt %醋酸溶液的混合物，其中甲醇和0. lwt %醋酸溶液的体 积比为60:40;本发明中的体积比均为20°C情况下的各组分的体积比。
[0043] f)检测波长：290nm
[0044]实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0045]取相同批号的样品（批号：20140603)lg，共6份，精密称定，按ASE提取方法提取供 试品溶液，进样量为如1，以实施例1的色谱条件平行试验，测得样品中靛玉红的含量见表1， RSD为1.6%，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表1。
[0046]表 1
[0048] 实施例1的萃取方法的精确度测试
[0049] 米用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对大青叶进彳丁萃取，大青叶为4批， 批号分别为 20140603,20150204,20150809,157701;
[0050] 实施例1的ASE萃取方法对同一批次的大青叶采用相同型号规格但是不同的机器 进行平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
[0051]具体测试结果见下表2;
[0054]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将大青叶粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步骤2:将萃取液稀释、离心、过滤后，得到上清液； 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:液相色谱仪 b) 色谱柱规格:碳18液相色谱柱4.6mm*250mm5ym 幻柱温:351€ d) 流速：lmL/min e) 流动相：甲醇和O. Iwt %醋酸溶液的混合物，其中甲醇和O . Iwt %醋酸溶液的体积比 为60:40 f) 检测波长：290nm〇2. 根据权利要求1所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，所述的步骤1具体 为： Sl 1:将大青叶粉碎后，过筛； S12:称取SI 1中获得的1重量份大青叶粉，与0.5重量份硅藻土混合均匀待用； S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃 取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为：萃取溶剂为正己烷和乙酸乙酯的混合物，正己烷和乙酸乙酯的体积比为 1:1;萃取温度80°C ;静态萃取时间7min;冲洗体积60% ;静态循环次数3次。3. 根据权利要求2所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，所述的萃取池的体 积为l〇ml。4. 根据权利要求2所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的 压力为1500psi。5. 根据权利要求2所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的 吹扫时间为60s。6. 根据权利要求1所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，步骤2具体为:将萃 取液用己烷和乙酸乙酯的混合物稀释后在1500r/min的条件下离心并过滤，保留滤液，其 中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为1:1。7. 根据权利要求1所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，液相色谱分析所用 的仪器为ThermoU-3000双三元液相液相色谱仪。8. 根据权利要求1所述的大青叶中靛玉红的测定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法 所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/06GK105929058SQ201610254548
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】陈学松, 王丽丽, 韦涛, 梁美艳, 黄新惠
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所