伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的检测方法，包括以下步骤：(1)伊血安颗粒加入甲醇超声提取制得供试品溶液；(2)供试品溶液经高效液相色谱仪检测，色谱条件：梯度洗脱，紫外检测波长：0～20min为256nm，20～30min为279nm。本方法对测定条件中的色谱柱、检测波长、色谱流动相、柱温以及样品前处理方法均进行了优化，从而保证本方法的重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品质量的有效控制。
【专利说明】
伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物检测领域，特别是一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量 测定方法。
【背景技术】
[0002] 伊血安颗粒是一种治疗妇科血症的中成药，主要成份为滇桂艾纳香、益母草、延胡 索、甘草等，具有活血止血、行气止痛等功效。临床上用于产后恶露不绝，人工流产后子宫出 血不净，中医辩证属血瘀证者。
[0003] 其中君药滇桂艾纳香为瑶族民间草药，来源于菊科植物滇桂艾纳香[Blumea riparia(BL)DC.]的干燥全草，具有活血化瘀、敛血止血等功能;滇桂艾纳香是被现代人发 掘利用的，所以在古籍文献中都未见有记载，其主要产于云南东南部、广西西南部及广东西 南部。目前，国内对滇桂艾纳香化学成分的研究报道很少。有研究证实滇桂艾纳香中活性成 分原儿茶酸能增大冠脉流量、抑制血小板聚集，具有止咳化痰、抗菌等作用；原儿茶醛具有 扩张冠状动脉、降低心肌耗氧量、抗氧化、抗炎等作用。国家食品药品监督管理局标准 YBZ00292008中，伊血安颗粒的含量测定方法采用恒速的流动相只测定原儿茶酸的含量，供 试品溶液是采用水饱和正丁醇溶液提取制备;该法对主要有效成分原儿茶酸存在较大的阴 性干扰，测定不准确，不能有效控制成品中原儿茶酸的含量。
[0004] 公布号为CN 104215708 A的专利申请公开了用于治疗妇科血症的中药复方颗粒 的含量检测方法，采用同一色谱条件下同时测定原儿茶酸和原儿茶醛的含量，供试品溶液 经甲醇回流提取，在酸性条件用乙醚萃取制得。如此有效消除了阴性干扰，又能提高原儿茶 酸和原儿茶醛的提取率，但该法样品前处理过程较为复杂，且梯度洗脱的时间较长，原儿茶 酸在恒定的紫外波长条件下也不能获得较大的吸收峰。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，本方法的 重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品质量的有效控制，。
[0006] 为实现上述目的，本发明的技术方案为：
[0007] -种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于包括以下步 骤：
[0008] (1)供试品溶液的准备:取伊血安颗粒，加入体积分数为60~100%甲醇水溶液，超 声提取30~60min，放冷，采用相同体积分数的甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤 液，离心，取上清液，得供试品溶液；
[0009] (2)取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，然后计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸 和原儿茶醛的含量。
[0010] 以上所述的步骤(2)中，在计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量之 前还包括标准曲线的绘制：
[0011] A.对照品溶液的准备:称取原儿茶酸对照品和原儿茶醛对照品，加甲醇溶解并定 容，摇匀，制得原儿茶酸对照品溶液和原儿茶醛对照品溶液；
[0012] B.取步骤A制得的对照品溶液，与甲醇混合配制成不同浓度的对照品溶液的标准 工作溶液，取不同浓度的对照品溶液的标准工作溶液，按照与供试品溶液相同的检测条件 在高效液相色谱仪中进行检测，得到原儿茶酸和原儿茶醛的标准曲线和线形回归方程。
[0013] 优选的，所述步骤(2)中，高效色相色谱仪的检测条件为:色谱柱以十八烷基键合 硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇与0.1%的色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱 温20~35°C，流速为0.8~1.2mL ? min-1;所述梯度洗脱的程序设为时间梯度0min-9min4 19min420min-30min，对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相BO. 1 %冰 乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度8 - 流动相B的体积百分 数梯度92%491%490%486%-85%;紫外检测波长：0~2〇111111为25611111，20~3〇111111为 279nm〇
[0014]优选的，所述步骤（1)中，称取5g伊血安颗粒，加入15mL体积分数为60~100%甲醇 水溶液进行超声提取;更优选的，所述步骤(1)中，甲醇水溶液的体积分数为80 %。
[0015] 优选的，所述步骤(1)中，超声提取的时间为45min。
[0016] 优选的，所述步骤(2)中，流速为lmL ? mirT1。
[0017]优选的，所述步骤(2)中，柱温为25°C。
[0018] 优选的，所述步骤(2)中，色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱，采用的保护柱为 Phenomenex Cis柱。
[0019]优选的，所述步骤(2)中，色谱柱的理论塔板数按原儿茶酸和原儿茶醛峰计不低于 5000 〇
[0020]本发明中，所述甲醇水溶液的体积分数是指含甲醇的体积分数。
[0021]以上所述的高效液相色谱测定伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛含量的方法，具 有以下优点：
[0022] (1)采用甲醇为提取溶剂对伊血安颗粒进行超声提取，可使伊血安颗粒的有效物 质完全溶解于提取溶剂，且在提取的过程简单快捷，易于操作；
[0023] (2)以甲醇和0.1%冰乙酸组成的梯度洗脱液作为流动相，能对供试品中不同极性 的物质进行有效地分离，且缩短了分析时间，减少了流动相的消耗；
[0024] (3)根据原儿茶酸和原儿茶醛的最大吸收波长不同，在检测过程中转换紫外检测 波长，可实现在同时测定原儿茶酸和原儿茶醛含量时，原儿茶酸和原儿茶醛均能获得较好 的吸收峰；
[0025] (4)本方法对测定条件中的色谱柱、检测波长、色谱流动相、柱温以及样品前处理 方法均进行了优化，从而保证本方法的重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品 质量的有效控制，确保临床使用疗效，为伊血安颗粒的疗效稳定确切提供了可靠保障。
【附图说明】
[0026] 图1是实施例1中采用Welchrom C18柱(4.6mmX250mm，5wii)得到的色谱图；
[0027] 图2是实施例1中采用Hypersil C18柱(4.6mmX250mm，5iim)得到的色谱图；
[0028] 图3是实施例1 中米用Phenomenex Gemini C18柱（4.6mmX250mm，5iim)得到的色谱 图；
[0029] 图4是实施例1中采用乙腈-水为流动相得到的色谱图；
[0030] 图5是实施例1中采用乙腈-0.1 %冰乙酸为流动相得到的色谱图；
[0031 ]图6是实施例1中采用甲醇-水为流动相得到的色谱图；；
[0032]图7是实施例1中采用甲醇-0.1%冰乙酸为流动相得到的色谱图；
[0033]图8是实施例1中流速为0.8mL ? min-1得到的色谱图；
[0034]图9是实施例1中流速为l.OmL ? min-1得到的色谱图；
[0035]图10是实施例1中流速为1.2mL ? min-1得到的色谱图；
[0036]图11是实施例1中柱温为20°C得到的色谱图；
[0037]图12是实施例1中柱温为25°C得到的色谱图；
[0038]图13是实施例1中柱温为30°C得到的色谱图；
[0039] 图14是实施例1中柱温为35°C得到的色谱图；
[0040] 图15是实施例1中波长为256nm得到的色谱图；
[0041] 图16是实施例1中波长为279nm得到的色谱图；
[0042] 图17是实施例1中波长为256nm(0~20min)-279nm(20~30min)得到的色谱图；
[0043] 图18是实施例2中以甲醇为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；
[0044] 图19是实施例2中以乙醇为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；
[0045] 图20是实施例2中以水为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；
[0046] 图21是实施例2中提取第一次时提取液检测得到的色谱图；
[0047] 图22是实施例2中提取第二次时提取液检测得到的色谱图；
[0048] 图23是实施例3中原儿茶酸的标准工作曲线；
[0049] 图24是实施例3中原儿茶醛的标准工作曲线；
[0050] 图25是实施例4中原儿茶酸和原儿茶醛对照品溶液的色谱图；
[0051]图26是实施例4中供试品溶液的色谱图；
[0052]图27是实施例4中阴性对照溶液的色谱图；
[0053] 1-原儿茶酸吸收峰，2-原儿茶醛吸收峰。
【具体实施方式】
[0054]以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于以下实 施例：
[0055]实施例1:色谱仪条件的优化
[0056]供试品溶液的准备方法:取伊血安颗粒5g，置具塞锥形瓶，加入体积分数为80 %甲 醇水溶液15mL，超声提取45min，放冷，采用体积分数为80%甲醇水溶液补足减失的重量，过 滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液。
[0057] 1-1色谱柱的选择
[0058] 高效液相色谱仪的其他测定条件相同，考察了Welchrom C18柱(4.6mmX 250mm，5ii m)、Hypersil C18柱（4.6mmX250mm，5iim)和Phenomenex Gemini C18柱（4.6mmX250mm，5ii m)三种色谱柱，所得到的色谱图分为如图1、图2、图3所示，由图3可以看出，Phenomenex Gemini C18柱(4.6mmX250mm，5ym)分离度最好，峰形对称和尖锐，保留时间适中。
[0059] 1-2流动相的选择
[0060]高效液相色谱仪的其他测定条件相同，考察了乙腈-水、乙腈-0.1%冰乙酸、甲醇-水、甲醇-0.1%冰乙酸为流动相进行梯度洗脱，所得到的色谱图分别如图4、图5、图6、图7所 示，经比较可以看出，以甲醇-0.1%冰乙酸系统为流动相的色谱图吸收峰分离较好。
[0061 ] 1-3流速的选择
[0062]高效液相色谱仪的其他测定条件相同，考察了0.8mL ? mirT^l .OmL ? mirT1、 不同流速，所得到的色谱图分别如图8、图9、图10所示，经比较可以看出，色谱 图的吸收峰均可较好地被分离，但以流速为1 .OmL ? mirT1的色谱图吸收峰分离最好，保留时 间适中。
[0063] 1-4柱温的选择
[0064]高效液相色谱仪的其他测定条件相同，考察了柱温20°(：、25°(：、30°(：、35°(：，所得到 的色谱图分别如图11、图12、图13、图14所示，经比较可以看出，色谱图的吸收峰均可较好地 被分离，但以柱温25 °C时出现的色谱峰对称性最好，且出峰时间适宜，分离度最好。
[0065] 1-5检测波长的选择
[0066]高效液相色谱仪的其他测定条件相同，考察了波长256nm、279nm、256nm(0~ 20min)-279nm(20~30min)，所得到的色谱图分别如图15、图16、图17所示，1为原儿茶酸的 吸收峰，2为原儿茶醛的吸收峰，经比较可以看出，256nm(0~20min)-279nm(20~30min)可 使原儿茶酸和原儿茶醛均能获得较好的吸收峰。
[0067]实施例2:样品前处理方法的优化
[0068] 高效液相色谱仪的色谱条件为:色谱柱采用Phenomenex Gemini C18柱(4.6mmX 250mm，5iim)，保护柱采用Phenomenex C18(4X3.0mm)，梯度洗脱，流动相为甲醇与0? 1%的 色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱温25°C，流速为1.OmL ? mirT1;所述梯度洗脱的程序设 为时间梯度0min49min4l9min420min430min，对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动 相A甲醇和流动相B0.1 %冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度8 %-9% -10% -14% - 15%，流动相8的体积百分数梯度92%491%490%486%-85%;紫外检测波长：0~ 20min为256nm，20~30min为279nm。
[0069] 2-1提取溶剂的选择
[0070]选用甲醇、乙醇和水三种提取溶剂，采用相同的提取方法对伊血安颗粒进行提取， 获得的提取液通过高效液相色谱仪进行检测，所得到的色谱图分别如图18、图19、图20所 示，经比较可以看出，用甲醇提取峰形好，基线平稳。
[0071] 2-2提取溶剂浓度的选择
[0072] 提取溶剂按照体积分数进行配比，选用60 %甲醇水溶液、80 %甲醇水溶液和100 % 甲醇三种提取溶剂，采用相同的提取方法对伊血安颗粒进行提取，获得的提取液通过高效 液相色谱仪进行检测，根据色谱图计算峰面积，结果见表1。
[0073]表1提取溶剂浓度考察表
[0074]
[0075]
[0076] 由表1可见，以80%甲醇水溶液为提取溶剂时，样品有效物质完全溶解。
[0077] 2-3提取溶剂用量的选择
[0078] 取伊血安颗粒5g，分别加入体积分数为80%的甲醇水溶液15mL、20mL、25mL溶解伊 血安颗粒，采用相同的提取方法对伊血安颗粒进行提取，获得的提取液通过高效液相色谱 仪进行检测，根据色谱图计算峰面积，结果见表2。
[0079]表2提取溶剂用量考察表
[0080]
[00811 由表2可见，以提取溶剂用量为15mL时，提取出来的指标成分含量最高。^
[0082] 2-4提取时间的考察
[0083]取伊血安颗粒5g，加入体积分数为80 %的甲醇水溶液15mL溶解伊血安颗粒，分别 超声提取3〇1^11、451^11、6〇1^11，获得的提取液通过高效液相色谱仪进行检测，根据色谱图计 算峰面积，结果见表3。
[0084]表3提取时间考察表
[0085]
[0086]由表3可见，原儿茶酸和原儿茶醛的含量相差不大，为提取完全，提取时间以45min 为最佳。
[0087] 2-5提取次数的考察
[0088]取伊血安颗粒5g，加入体积分数为80%的甲醇水溶液15mL溶解伊血安颗粒，超声 提取45min，分别提取第1次、提取第2次，获得的提取液通过高效液相色谱仪进行检测，获得 的色谱图分别见图21、图22,由图22可见，提取1次已基本将原儿茶酸和原儿茶醛提取完全。
[0089] 实施例3伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛含量的测定
[0090] 3-1 供试品溶液的准备：对 10 个批号（120203、120302、120303、120602、120603、 120701、120702、120801、120802、120803)伊血安颗粒进行检测，每个批号取样4个；分别称 取伊血安颗粒5g，置具塞锥形瓶，精密加入80%甲醇水溶液1511^，超声提取45111111，放冷， 80%甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液。
[0091] 3-2对照品溶液的制备
[0092] 精密称取原儿茶酸对照品10.04mg和原儿茶醛对照品2.58mg置25mL容量瓶中，加 入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度为〇.4016mg ? ml/1的原儿茶酸对照品溶液和 0.1032mg ? mL-1的原儿茶醛对照品溶液。
[0093] 3-3标准曲线的制作
[0094] 精密吸取4 ? 1 项下对照品溶液0 ? 2mL、0 ? 4mL、0 ? 6mL、0 ? 8mL、1 ? OmL、1 ? 2mL、1 ? 4mL、 1.6mL分别置于lOmL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，分别吸取上述8个不同浓度的对 照品溶液10yL注入高效液相色谱仪，色谱条件为:色谱柱采用Phenomenex Gemini C18柱 (4 ? 6mmX 250mm，5wii)，保护柱采用Phenomenex C18(4 X 3 ? 0mm)，梯度洗脱，流动相为甲醇与 0.1 %的色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱温25°C，流速为1. OmL ? mirT1;所述梯度洗脱的 程序设为时间梯度0min49min4l9min420min430min，对应的梯度洗脱液按以下体积比 由流动相A甲醇和流动相B0.1%冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度- 14% - 15%，流动相B的体积百分数梯度92% -91 % -90% -86% -85% ;紫外检测波长:0 ~20min为256nm，20~30min为279nm;以原儿茶酸和原儿茶醛峰计，理论塔板数应均不低于 5000 〇
[0095] 以对照品溶液浓度X(yg ? ml/1)为横坐标，其色谱峰峰面积Y为纵坐标，绘制标准工 作曲线，计算回归方程。
[0096] 原儿茶酸的回归方程式为Y = 37.3851X-9.5612，r = 0.99998;结果表明原儿茶酸 对照品进样量在0.0803~0.6426yg之间与峰面积呈良好线性关系，结果见表4，标准工作曲 线见图23。
[0097]表4原儿茶酸标准工作曲线测定结果
[0099] 原儿茶醛的回归方程式为Y = 40.4635X-4.0935，r = 0.99996;结果表明原儿茶醛 对照品进样量在0.0206~0.1651yg之间与峰面积呈良好线性关系，结果见表5,标准工作曲 线见图24。
[0100]表5原儿茶醛标准工作曲线测定结果
[0102] 3-4伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定
[0103] 取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，高效液相色谱仪的色谱条件与步骤3-3相 同，然后根据原儿茶酸和原儿茶醛的标准曲线计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛 的含量。检测结果见表6。
[0104] 表6 10个批号伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛含量的测定结果
[0107] 实施例4本发明含量检测方法的方法学研究
[0108] 4-1对照品溶液的准备
[0109] 精密称取原儿茶酸对照品10.04mg和原儿茶醛对照品2.58mg置25mL容量瓶中，加 入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度为〇.4016mg ? ml/1的原儿茶酸对照品溶液和 0.1032mg ? mL-1的原儿茶醛对照品溶液。
[0110] 4-2供试品溶液的准备
[0111] 称取伊血安颗粒5g，置具塞锥形瓶，精密加入80 %甲醇水溶液15mL，超声提取 45min，放冷，80%甲醇补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液。
[0112] 4-3缺滇桂艾纳香阴性对照溶液
[0113]称取无滇桂艾纳香的伊血安颗粒5g，置具塞锥形瓶，精密加入80 %甲醇15mL，超声 提取45min，放冷，80 %甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得缺 滇桂艾纳香阴性对照溶液。
[0114] 4-4专属性实验
[0115] 精密吸取原儿茶酸和原儿茶醛对照品溶液、伊血安颗粒供试品溶液以及缺滇桂艾 纳香阴性对照溶液各1〇此进样分析，结果见图25、图26、图27。原儿茶酸和原儿茶醛与各自 相邻峰的分离度>1.5。
[0116] 4-5线性关系考察
[0117] 本实验方法与实施例3中的3-3相同，结果表明，原儿茶酸和原儿茶醛对照品的进 样量与峰面积之间呈良好线性关系。
[0118] 4-6精密度考察
[0119] 取同一供试品溶液(批号：120303 )，精密吸取供试品溶液1 OyL，注入高效液相色谱 仪，按实施例3中3-3的色谱条件，连续进样6次，测定供试品中原儿茶酸和原儿茶醛的峰面 积。结果见表7和表8。
[0120] 表7原儿茶酸精密度实验结果(n = 6)
[0122]表8原儿茶醛精密度实验结果(n = 6)
[0125] 由结果可知，测得供试品中原儿茶酸的平均含量为0.1191mg ? g-1，RSD值为 1.76%，原儿茶醛的平均含量为0.0356mg ? g-1，RSD值为2.65%，结果表明，所使用的高效 液相色谱仪的精密度良好。
[0126] 4-7稳定性实验
[0127] 取同一供试品溶液(伊血安颗粒批号：120303)，室温下保存，分别在0、2、4、8、16、 24h精密吸取供试品溶液10yL，注入高效液相色谱仪，按实施例3中3-3的色谱条件测定，考 察其稳定性。结果见表9、表10。
[0128] 表9原儿茶酸稳定性实验结果(n = 6)
[0130]表10原儿茶醛稳定性实验结果(n = 6)
[0133] 由结果可知，测得供试品中原儿茶酸的平均含量为0. 1222mg ? g<，RSD值为 1.05%，原儿茶醛的平均含量为0.0375mg ? g-1，RSD值为2.04%，表明供试品溶液在24h内保 持稳定。
[0134] 4-8重复性实验
[0135] 取同一供试品溶液(伊血安颗粒批号：120303)，精密吸取供试品溶液10此，按实施 例3中3-3的色谱条件测定，结果见表11、表12,测得供试品中原儿茶酸的平均含量为 0.1267mg ? g-l，RSD值为 1.19%，原儿茶醛的平均含量为0.0378mg ? g-l，RSD值为 1.33%， 结果表明用上述方法测定原儿茶酸和原儿茶醛的含量，重复性良好。
[0136] 表11原儿茶酸重复性实验结果(n = 6)
[0138] 表12原儿茶醛重复性实验结果(n = 6)[0139]
[0140] 4-9加样回收率实验
[0141] 取已知含量的供试品（批号：120303)2.5g，精密称定9份，分成3组每组3份，第1组 精密加入14 m L 8 0 %甲醇水溶液，精密加入1 m L的混标溶液A (原儿茶酸对照品浓度为 0.253mg ? mL-\原儿茶醛对照品浓度为0.076mg ? mL-第2组精密加入14mL 80%甲醇，精 密加入lmL的混标溶液B(原儿茶酸对照品浓度为0.317mg ? ml/1、原儿茶醛对照品浓度为 0.094mg ? mL-〇 ;第3组精密加入14mL 80 %甲醇，精密加入lmL的混标溶液C(原儿茶酸对照 品浓度为〇.382mg ? ml/1、原儿茶醛对照品浓度为0.114mg ? ml/1);原儿茶酸和原儿茶醛对 照品的加入量分别为供试品含量的80%、100%和120%。按4-2的供试品准备方法制备，分 别测定含量，计算加样回收率(伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量以〇.1267mg ? g一1 和0.0378mg ? g-1计）。实验结果见表13、表14。
[0142] 表13原儿茶酸加样回收率实验结果
[0144]表14原儿茶醛加样回收率实验结果
[0147]由结果可知，原儿茶酸和原儿茶醛的平均加样回收率分别为99.78% (RSD = 2.47%)和99.47% (RSD = 1.94%)。
【主权项】
1. 一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于包括以下步 骤： (1) 供试品溶液的准备:取伊血安颗粒，加入体积分数为60~100 %甲醇水溶液，超声提 取30~60min，放冷，采用相同体积分数的甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离 心，取上清液，得供试品溶液； (2) 取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，然后计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原 儿茶醛的含量。2. 根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，高效色相色谱仪的检测条件为:色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料， 采用梯度洗脱，流动相为甲醇与〇. 1%的色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱温20~35°C， 流速为0.8~1.2mL · min-S所述梯度洗脱的程序设为时间梯度0min49min4l9min-20min -30min，对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相BO. 1 %冰乙酸组成，流 动相A的体积百分数梯度8 % -9 % - 10 % - 14 % - 15 %，流动相B的体积百分数梯度92 % - 91%-90%-86%-85% ;紫外检测波长：0~20min为256nm，20~30min为279nm。3. 根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤（1)中，称取5g伊血安颗粒，加入15mL体积分数为60~100 %甲醇水溶液进行 超声提取。4. 根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，在计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量之前还包括标 准曲线的绘制： A. 对照品溶液的准备:称取原儿茶酸对照品和原儿茶醛对照品，加甲醇溶解并定容，摇 匀，制得原儿茶酸对照品溶液和原儿茶醛对照品溶液； B. 取步骤A制得的对照品溶液，与甲醇混合配制成不同浓度的对照品溶液的标准工作 溶液，取不同浓度的对照品溶液的标准工作溶液，按照与供试品溶液相同的检测条件在高 效液相色谱仪中进行检测，得到原儿茶酸和原儿茶醛的标准曲线和线形回归方程。5. 根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(1)中，甲醇水溶液的体积分数为80 %。6. 根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤（1)中，超声提取的时间为45min。7. 根据权利要求2所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，流速为lmL · mirT1。8. 根据权利要求2所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，柱温为25°C。9. 根据权利要求2所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱，采用的保护柱为Phenomenex Ci8 柱。10. 根据权利要求2所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征 在于： 所述步骤(2)中，色谱柱的理论塔板数按原儿茶酸和原儿茶醛峰计不低于5000。
【文档编号】G01N30/02GK106053624SQ201610317105
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月12日
【发明人】李修善, 慕丽群, 毛金玲, 农常东
【申请人】广西万寿堂药业有限公司