一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法
【专利摘要】本发明属于中药制剂质量控制技术领域，具体涉及一种加味逍遥丸含量测定方法。其技术方案是一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，包括步骤：A.制备对照品溶液；B.制备供试品溶液；C.用高效液相色谱仪(包括DAD检测器)进行检测，色谱条件：色谱柱为Plastisil ODS C18、乙腈—磷酸水为流动相、流速为0.8mL/min～1.2mL/min、柱温为35℃～39℃、检测波长为200nm～400nm、进样量5?20μL；D.计算各成分的含量。本发明同时测定加味逍遥丸中栀子苷，甘草苷，丹皮酚，芍药苷，甘草酸，阿魏酸6种成分的含量，操作简单，灵敏度高、重现性好，检测结果准确可靠。
【专利说明】
一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药制剂质量控制技术领域，具体涉及一种加味逍遥丸含量测定方 法。
【背景技术】
[0002] 加味逍遥丸主要由柴胡、当归、白芍、栀子，白术，茯苓，甘草，牡丹皮，薄荷九种药 材组成，为中药成方制剂，具有疏肝清热、健脾养血之功效，临床上主要用于肝郁血虚、肝脾 不和、两胁胀痛、头晕目眩、倦怠食少、月经不调、脐腹胀痛等。其中阿魏酸是当归主要化学 成分;芍药苷为白芍的主要化学成分;甘草酸、甘草苷为甘草的主要化学成分;丹皮酚是牡 丹皮的主要特征成分;栀子苷是栀子的主要化学成分。
[0003] 目前中国药典中关于加味逍遥丸的质量标准中的含量测定项中仅用芍药苷一种 成分的含量来控制该药物的质量，难以真正体现和保证加味逍遥丸的内在质量。
[0004] 现有文献中，也仅有记载：高效液相色谱法同时测定加味逍遥丸中栀子苷和芍药 苷的含量;高效液相色谱法测定加味逍遥丸中丹皮酚的含量;高效液相色谱法测定加味逍 遥丸中芍药苷与甘草苷的含量。
[0005] 通过1-2种化学成分显然无法全面评价和控制加味逍遥丸质量。但能简单、准确测 定加味逍遥丸的多成份含量还是一个技术难题。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是:为了克服现有技术中的不足，本发明提供一种加味逍遥丸的多 成分含量测定方法，同时测定加味逍遥丸中栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏 酸6种主要成分的含量。
[0007] 本发明的技术方案是:一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是执行以 下步骤：
[0008] A.制备对照品溶液:分别称取一定量的栀子苷，甘草苷，丹皮酚，芍药苷，甘草酸， 阿魏酸对照品，用溶剂将其溶解，得到一定浓度的对照品储备液;分别精密量一定量所述对 照品储备液加无水甲醇稀释，得对照品溶液；
[0009] B.制备供试品溶液:将待测加味逍遥丸溶解于溶剂中，滤过，得到一定浓度的供试 品溶液；
[0010] C.用高效液相色谱仪进行检测，其中所述高效液相色谱仪包括DAD检测器，色谱条 件:色谱柱为Plastisil ODS Ci8、乙腈一磷酸水为流动相、流速为0.8mL/min~1.2mL/min、 柱温为35 °C~39 °C、检测波长为200nm~400nm、进样量5-20yL;
[0011] D.计算所述供试品溶液中6种成分的含量：以外标法计算所述供试品溶液中所述 栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸6种成分的含量。
[0012]进一步的，所述溶剂为无水甲醇。
[0013]进一步的，所述检测器为二极管阵列检测器，DAD参比波长为380nm所述检测波长 为230nm、238nm、254nm、274nm、328nm，对应的待测成分为:230nm为芍药苷，238nm为栀子苷、 254nm为甘草酸，274nm为丹皮酸与甘草苷，328nm为阿魏酸。
[0014]进一步的，所述流动相为乙腈一 0.1~0.2%磷酸水；
[0015] 进一步的，所述流动相为乙腈一0.2%磷酸水;所述流速为1 .OmL/min;所述柱温37 °C ;所述进样量10yL
[0016] 进一步的，所述高效液相色谱仪进行检测时用梯度洗脱，梯度洗脱顺序：
[0017] 〇~l〇min，乙腈浓度由5%增至8%;
[0018] 10~15min，乙腈浓度由8%增至10%;
[0019] 15~20min，乙腈浓度由10%增至13%;
[0020] 20~25min，乙腈浓度由13%增至16%;
[0021] 25~28min，乙腈浓度由16%增至20%;
[0022] 28~36min，乙腈浓度由20增至22%;
[0023] 36~4〇1^11，乙腈浓度为22%;
[0024] 40~43min，乙腈浓度由22 %增至27 % ;
[0025] 43~51min，乙腈浓度由27%增至40% ;
[0026] 51~60min，乙腈浓度由40%增至50%;
[0027] 60~70min，乙臆浓度由50%增至75% ;
[0028] 70~75min，乙腈浓度由75%增至90%;
[0029] 75~8〇1^11，乙腈浓度为90%。
[0030] 进一步的，步骤B所述供试品溶液的制备方法为：
[0031] 取0.5~1.5g待测加味逍遥丸，精密称定，精密加入无水甲醇25~75mL，称定重量， 超声处理20~40min，放冷，以无水甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，经0.22~ 0.45mi微孔滤膜滤过，得到所述供试品溶液。
[0032] 进一步的，步骤B所述供试品溶液的制备方法为：
[0033]称取过40目筛的待测加味逍遥丸粉末约l.Og，精密称定，置100mL磨口具塞锥形瓶 中，精密加入无水甲醇50mL，密塞，称定重量，以功率200W、频率80kHz超声处理30min，冷却， 再称定重量，以无水甲醇补足减失的重量，摇匀，以12000r/min转速进行离心，取上清液，经 0.45mi微孔滤膜滤过，得到所述供试品溶液。
[0034] 进一步的，步骤A所述对照品溶液的制备方法为：
[0035] 分别称取栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸对照品适量，加无水甲 醇溶解并定容，制成质量浓度分别为栀子苷0.6 mg/mL、甘草苷0.75mg/mL、丹皮酸0.8mg/ mL、苟药苷1.2mg/mL，甘草酸0.8mg/mL、阿魏酸0.25mg/mL的混合对照品储备液，分别精密吸 取2、4、6、8、12mL储备液置于25mL容量瓶中，流动相定容，制得系列浓度的混合对照品溶液。 [0036]本发明的有益效果主要有:本发明采用高效液相色谱法(HPLC)在同一色谱条件下 同时测定加味逍遥丸中栀子苷，甘草苷，丹皮酚，芍药苷，甘草酸，阿魏酸6种成分的含量，采 用梯度洗脱，在80min内完成一次色谱分析，平均加样回收率99.13%~100.25%，RSD值均〈 2.0 %。该方法操作简单、灵敏度高、重现性好、检测结果准确可靠，为加味逍遥丸的质量评 价提供了一种行之有效的检测方法，可用于加味逍遥丸的质量控制、质量评价，为质量评价 和质量标准的提高提供了技术支撑。
【附图说明】
[0037] 图1各检测波长下各待测成分的紫外光谱图:A-栀子苷紫外图谱;B-甘草苷紫外图 谱;C-丹皮酚紫外图谱;D-芍药苷紫外图谱;E-甘草酸紫外图谱;F-阿魏酸紫外图谱。
【具体实施方式】
[0038] 为了更直观更清楚地描述本发明技术方案，以及帮助理解本发明对现有技术的贡 献之处，以下结合附图和实施例对本发明进行详细地说明。
[0039] 实施例1
[0040] 本实施例为一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，所选用的仪器与材料如下：
[0041] 1260型高效液相色谱仪（包括DAD检测器、四元低压梯度栗、在线真空脱气机）， ChemStation工作站(美国Agilent公司），AUW220D型分析天平(十万分之一，日本岛津精密 仪器分析公司），KQ-250DE型超声波清洗器(江苏昆山超声波仪器有限公司）
[0042] 栀子苷(批号:MUST-15022411，纯度 98.13%);阿魏酸(批号:]\11^1'-14102214，纯度 99.36%);甘草苷（批号:]\11]51'-14100910，纯度99.83%) ;芍药苷（批号:]\11]51'-15060112，纯 度99.42% );甘草酸（批号：MUST-14091708,纯度98.69% );丹皮酚（批号：MUST-15020401， 纯度99.30%);上述对照品均购于成都曼斯特生物科技有限公司；乙腈(批号：20150833,色 谱纯）、甲醇(批号：20150322，色谱纯）由山东禹王实业有限公司提供;水为市售娃哈哈纯净 水，其它试剂均为分析纯；
[0043] 加味逍遥丸（批号：20150644,20150811,20150810，规格：6g/袋）由北京同仁堂制 药股份有限公司提供;加味逍遥丸(批号= 1106208,1105122,1105803，规格:6g/袋）由天津 天士力(辽宁)制药有限责任公司提供。
[0044] 具体执行步骤以下：
[0045] A.制备对照品溶液:分别称取栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸对 照品适量，加无水甲醇溶解并定容，制成质量浓度分别为栀子苷0.6mg/mL、甘草苷0.75mg/ mL、丹皮酸0 ? 8mg/mL、苟药苷1 ? 2mg/mL，甘草酸0 ? 8mg/mL、阿魏酸0 ? 2 5mg/mL的混合对照品储 备液，分别精密吸取2、4、6、8、12mL储备液置于25mL容量瓶中，流动相定容，制得系列浓度的 混合对照品溶液。
[0046] B.制备供试品溶液:称取过40目筛的待测加味逍遥丸粉末约1.0g，精密称定，置 100mL磨口具塞锥形瓶中，精密加入无水甲醇50mL，密塞，称定重量，以功率200W、频率80kHz 超声处理30min，冷却，再称定重量，以无水甲醇补足减失的重量，摇匀，以12000r/min转速 进行离心，取上清液，经0.45mi微孔滤膜滤过，得到所述供试品溶液。
[0047] C.用高效液相色谱仪进行检测。色谱条件:色谱柱为Plastisil ODS C18、流动相为 乙腈一 0.2%磷酸水;流速为1.0mL/min;柱温37°C;进样量10此;检测器为二极管阵列检测 器，DAD参比波长为380nm所述检测波长为23〇11111、23811111、25411111、27411111、32811111，对应的待测成 分为：230nm为苟药苷，238nm为栀子苷、254nm为甘草酸，274nm为丹皮酸与甘草苷，328nm为 阿魏酸;检测时用梯度洗脱，梯度洗脱顺序：
[0048] 0~lOmin，乙腈浓度由5%增至8%;
[0049] 10~15min，乙腈浓度由8%增至10%;
[0050] 15~20min，乙腈浓度由10%增至13%;
[0051 ] 20~25min，乙腈浓度由13%增至16%;
[0052] 25~28min，乙腈浓度由16%增至20%;
[0053] 28~36min，乙臆浓度由20增至22% ;
[0054] 36~40min，乙腈浓度为22 % ;
[0055] 40~43min，乙腈浓度由22%增至27% ;
[0056] 43~51min，乙腈浓度由27%增至40% ;
[0057] 51~60min，乙腈浓度由40 %增至50 % ;
[0058] 60~70min，乙臆浓度由50%增至75% ;
[0059] 70~75min，乙腈浓度由75%增至90% ;
[0060] 75~8〇1^11，乙腈浓度为90%。
[0061 ] 色谱图如图1所示。
[0062] D.计算所述供试品溶液中6种成分的含量：以外标法计算所述供试品溶液中所述 栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸6种成分的含量。计算结果如1所示。
[0063] 表1不同批次加味逍遥丸中6种待测组分的含量测定结果(i:±?，n = 3)
[0064]
[0066] 实施例2
[0067] 进行稳定性试验，取同一批(批号为:20150811)供试品溶液，于室温放置0,2,4,6， 8，12h，精密吸取10此，按实施例1所述色谱条件进样分析，计算各色谱峰面积的RSD值，结果 栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸各组分峰面积的RSD值均小于1.5%，表明 供试品溶液在12h内稳定性良好。
[0068] 实施例3
[0069] 进行重复性试验，如实施例1所述一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，取同一 批(批号为= 20150811)供试品溶液，平行制备5份供试品溶液，测定各组分峰面积RSD值，结 果栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸峰面积的RSD值均小于1.4%，表明方法 重复性良好。
[0070] 实施例4
[0071]进行加样回收率试验，精密称取已知含量的加味逍遥丸样品（批号为:20150644)6 份，每份〇.5g，置于圆底烧瓶中，分别加入各对照品适量，按步骤2方法制备供试品溶液，定 容至50mL，按实施例1所述色谱条件进行测定，并分别计算各成分的回收率，结果见表2。
[0072]表2加样回收率试验结果
[0073]
[0075]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本 发明基础上，可以对其构思作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均落入本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是执行以下步骤： A. 制备对照品溶液:分别称取一定量的栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏 酸对照品，用溶剂将其溶解，得到一定浓度的对照品储备液;分别精密量一定量所述对照品 储备液加溶剂稀释，得对照品溶液； B. 制备供试品溶液:将待测加味逍遥丸溶解于溶剂中，滤过，得到一定浓度的供试品溶 液； C. 用高效液相色谱仪进行检测，其中所述高效液相色谱仪包括DAD检测器，色谱条件： 色谱柱为Plastisil ODS Ci8、乙腈一磷酸水为流动相、流速为0.8mL/min~1.2mL/min、柱温 为35 °C~39 °C、检测波长为200nm~400nm、进样量5-20yL; D. 计算所述供试品溶液中6种成分的含量：以外标法计算所述供试品溶液中所述栀子 苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸6种成分的含量。2. 如权利要求1 一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是:所述溶剂为无水甲 醇。3. 如权利要求2-种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是:所述检测器为二极 管阵列检测器，DAD参比波长为380nm所述检测波长为230nm、238nm、254nm、274nm、328nmJt 应的待测成分为:230nm为芍药苷，238nm为栀子苷、254nm为甘草酸，274nm为丹皮酚与甘草 苷，328nm为阿魏酸。4. 如权利要求1 一4任意一项所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征 是:所述流动相为乙臆一0.1~0.2%磷酸水。5. 如权利要求1 一4任意一项所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征 是:所述流动相为乙腈一0.2%磷酸水;所述流速为1 .OmL/min;所述柱温37°C ;所述进样量 10yL〇6. 如权利要求1 一4任意一项所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征 是:所述高效液相色谱仪进行检测时用梯度洗脱，梯度洗脱顺序： 0~1〇111；[11，乙腈浓度由5%增至8%; 10~15111；[11，乙腈浓度由8%增至10%; 15~2〇111；[11，乙腈浓度由10%增至13%; 20~25111；[11，乙腈浓度由13%增至16%; 25~28min，乙腈浓度由16 %增至20 %; 28~36min，乙腈浓度由20增至22%; 36~40min，乙腈浓度为22 % ; 40~43min，乙腈浓度由22 %增至27 %; 43~5lmin，乙腈浓度由27 %增至40 % ; 51~6〇111；[11，乙腈浓度由40%增至50%; 60~7〇111；[11，乙腈浓度由50%增至75%; 70~75min，乙腈浓度由75 %增至90 % ; 75~80min，乙腈浓度为90 %。7. 如权利要求1所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是：步骤B所述 供试品溶液的制备方法为： 取0.5~1.5g待测加味逍遥丸，精密称定，精密加入无水甲醇25~75mL，称定重量，超声 处理20~40min，放冷，以无水甲醇补足减失的重量，摇勾，离心，取上清液，经0.22~0.45μηι 微孔滤膜滤过，得到所述供试品溶液。8. 如权利要求1所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是：步骤Β所述 供试品溶液的制备方法为： 称取过40目筛的待测加味逍遥丸粉末约1.0g，精密称定，置100mL磨口具塞锥形瓶中， 精密加入无水甲醇50mL，密塞，称定重量，以功率200W、频率80kHz超声处理30min，冷却，再 称定重量，以无水甲醇补足减失的重量，摇匀，以12000r/min转速进行离心，取上清液，经 0.45μπι微孔滤膜滤过，得到所述供试品溶液。9. 如权利要求1所述的一种加味逍遥丸的多成分含量测定方法，其特征是：步骤Α所述 对照品溶液的制备方法为： 分别称取栀子苷、甘草苷、丹皮酚、芍药苷、甘草酸、阿魏酸对照品适量，加无水甲醇溶 解并定容，制成质量浓度分别为栀子苷〇. 6mg/mL、甘草苷0.75mg/mL、丹皮酸0.8mg/mL、苟药 苷1 · 2mg/mL，甘草酸0 · 8mg/mL、阿魏酸0 · 25mg/mL的混合对照品储备液，分别精密吸取2、4、 6、8、12mL储备液置于25mL容量瓶中，流动相定容，制得系列浓度的混合对照品溶液。
【文档编号】G01N30/88GK106053702SQ201610614520
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月29日
【发明人】陈帅, 王慧竹, 薛健飞, 王肃樊
【申请人】吉林化工学院