稳定性高的前白蛋白检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R2试剂包含如下组分：缓冲液、氯化钠、防腐剂、PA抗体、稳定剂。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：1、本发明R2试剂中加入了一种特殊的稳定剂氯化胆碱，这个稳定剂可以通过改变PA抗体的构型，来达到稳定试剂的效果，同时该稳定剂虽然改变了抗体的构型，但是不影响该抗体的效价；2、试验表明，应用本发明所述试剂盒检测准确度高，精密度好，而且本发明试剂盒稳定性佳，保存时间长。本发明所述试剂盒适用范围广，便于推广使用，可应用于各级医院、卫生预防部门和医学生物科研单位测定人血清或血浆样本中的前白蛋白的含量。
【专利说明】
稳定性高的前白蛋白检测试剂盒
技术领域
[0001] 本发明涉及一种稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领 域。
【背景技术】
[0002] 前白蛋白，又称转甲状腺素蛋白，简称PA，由肝细胞合成，在电泳分离时常显示在 白蛋白的前方，其半衰期约12小时。临床上测定前白蛋白在血浆中的浓度对于了解蛋白质 的营养不良、肝功能不全、比之白蛋白和转铁蛋白具有更高的敏感性，了解前白蛋白是什么 意思，要知道前白蛋白偏高的主要原因是由血液浓缩造成。另外还有一种可能是肝脏的代 谢能力强也是引起前白蛋白偏高的原因。了解前白蛋白是什么意思，要知道肝脏疾病中的 肝癌、肝硬化、慢性活动性肝炎、阻塞性黄疸等都可以表现为前白蛋白偏低。一般情况下，前 白蛋白、转氨酶、胆红素均增高，多属急性肝脏疾病，尤其在肝癌患者和阻塞性黄疸患者中， 如果前白蛋白持续降低，说明病情持续恶化。
[0003] PA除了作为组织修补的材料外，还可视为一种运载蛋白，它结合T4和T3,而对T3亲 和力更大，PA与视黄醇结合蛋白形成复合物，具有运载维生素A的作用。除了作为一种灵敏 的营养蛋白质指标，PA在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化或肾炎时其血浓度下降。具体来讲，前 白蛋白的含量与病症的关联如下：
[0004] 1)肝脏疾病时前白蛋白更敏感，有人认为有30%白蛋白正常的肝病患者的前白蛋 白减少，坏死后肝硬化几乎是零。肝硬化肝细胞坏死较轻，前白蛋白变化不大，预后较好，当 病情改善时，如白蛋白亦迅速升尚；
[0005] 2)亚急性肝坏死前白蛋白一直在低值，故前白蛋白可用作判断肝病预后指标。肝 癌以及阻塞性黄疸患者均可降低，其降低程度与病情有密切关系；
[0006] 3)结合转氨酶、胆红素检测对不同类型肝脏疾病和非肝脏疾病有鉴别意义，如前 白蛋白、转氨酶、胆红素均增高，多属急性肝脏疾病，如前白蛋白不增高，仅转氨酶、胆红素 增高则应考虑非肝脏本身疾病；
[0007] 4)肾病综合征前白蛋白不仅不减少，而且在饮食充分时还可以升高。营养不良负 氮平衡时前白蛋白减少。
[0008] 目前市场上的前白蛋白检测试剂盒稳定性较差，降低了在临床上的使用价值。
【发明内容】
[0009] 针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种稳定性高的前白蛋白检测试剂 盒。本发明通过在R2试剂中加入了一种特殊的稳定剂来达到稳定试剂的效果，研发出了一 种稳定性尚的如白蛋白检测试剂盒。
[0010] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0011] 本发明提供一种稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其包括R1试剂和R2试剂，其中， 所述R2试剂包含按浓度计的如下组分： 缓冲液 100 ~200mmol/:L; 氯化钠 7~9g/L;
[0012] 防腐剂 0,3 ~ PA 抗体 80-150ml; 稳定剂 40~60g/L。
[0013] 作为优选方案，所述稳定剂为环糊精、氯化胆碱或甘露醇。
[0014] 作为优选方案，所述稳定剂为氯化胆碱。
[0015]作为优选方案，所述R1试剂包含按浓度或重量百分数计的如下组分： 缓冲液 100 ~200mmol/L; 聚乙二醇 4.00~6.00%; 防腐剂 0.3~0.8g/L;
[0016] 氯化钠 7-9g/L; 乙二胺四乙酸二钠 1.5~2.0g/L; 表面活性剂 0.8~1.2g/L。
[0017]作为优选方案，所述缓冲液的PH值为7.0~7.4。
[0018]作为优选方案，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷、丙磺酸或4-轻乙基哌嗪乙磺酸。
[0019] 作为优选方案，所述缓冲液为丙磺酸。
[0020] 作为优选方案，所述防腐剂为Proclin 300。
[0021] 作为优选方案，所述表面活性剂为吐温80、吐温20或曲拉通X-100。
[0022] 作为优选方案，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20。
[0023] 与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
[0024] 1、本发明R2试剂中加入了一种特殊的稳定剂氯化胆碱，这个稳定剂可以通过改变 PA抗体的构型，来达到稳定试剂的效果，同时该稳定剂虽然改变了抗体的构型，但是不影响 该抗体的效价；
[0025] 2、试验表明，应用本发明所述试剂盒检测准确度高，精密度好，而且本发明试剂盒 稳定性佳，保存时间长；
[0026] 3、本发明的试剂盒适用范围广，便于推广使用，可应用于各级医院、卫生预防部门 和医学生物科研单位测定人血清或血浆样本中的前白蛋白的含量。
【附图说明】
[0027]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得更明显：
[0028] 图1为PA参考标准的标准曲线；
[0029] 图2为本发明与康华生物试剂盒的稳定性验证检测的实验结果；
[0030] 图3为分别采用本发明试剂和现有技术中的PA试剂对人血清按各自参数同时进行 测定，对测定值进行相关分析的示意图。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明 的保护范围。
[0032] 实施例1
[0033]测定试剂盒组成如下：
[0034] 1)试剂R1的组成为： 丙磺酸（MOPS)缓冲液 100nimo!/L (PH=7.0); 聚乙二醇 4.00%;
[0035] Proclin 300 0.3g/L； 氯化钠 7g/L; 乙二胺四乙酸二钠 1,5 g/L;
[0036] 吐温 20 0;8：g/Lt
[0037] 2)试剂R2的组成为： 丙磺酸（MOPS)缓冲液 100nimoi,''L (PH=7 0); 氯化钠
[0038] Proclin 300 0.3g/L； PA抗体 80mh 氯化胆碱 40g/L。
[0039] 各种成分可以室温下依次添加，或者同时添加，或者是分别单独包装并于检测之 前再即时配制。试剂检测比例为3:1。
[0040] 本实施例描述的PA检测试剂盒，适用于各种类型的全自动生化仪，以日立7080全 自动生化仪为例，其操作如表1。分析方法:两点终点法，即试剂R1、R2的用量分别为225ul和 75ul，样本量6ul;225ul试剂R1加入6ul样本于37°C孵育3~5min，读取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，读取吸光度A1，计算A A=A1-A0;检测主波长为340nm。
[0041]采用本试剂及上述测定方法，采用日立7080生化分析仪测得的PA标准品的曲线 (如图1所不），其中X轴表不PA含量(mg/L) ;Y轴表不吸光度。
[0042]表 1
[0044] 实施例2
[0045] 测定试剂盒组成如下：
[0046] 1)试剂R1的组成为： 丙磺酸（MOPS)缓冲液 150mm〇l/L (:PH=7:.2):; 聚乙二醇 5.00%: Prod in 300 0.5g/L ：
[0047] 氯化钠 8_g/L; 乙二胺四乙酸二钠 1.8g/L; 吐温 20 l.Og/L。
[0048] 2)试剂R2的组成为： 丙磺酸（MQPS)缓冲液 150_i〇l/L (PH=7,2); 氯化钠 8g/L;
[0049] Proclin 300 0.5g/L； PA 抗体 llOnll; 氯化胆碱 50g/L。
[0050] 各种成分可以室温下依次添加，或者同时添加，或者是分别单独包装并于检测之 前再即时配制。试剂检测比例为3:1。
[0051] 本实施例描述的PA检测试剂盒，适用于各种类型的全自动生化仪，以日立7080全 自动生化仪为例，其操作如表1。分析方法:两点终点法，即试剂R1、R2的用量分别为225ul和 75ul，样本量6ul;225ul试剂R1加入6ul样本于37°C孵育3~5min，读取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，读取吸光度A1，计算A A=A1-A0;检测主波长为340nm。
[0052] 实施例3
[0053] 测定试剂盒组成如下：
[0054] 1)试剂R1的组成为： 丙磺酸（MOPS)缓冲液 200mmol L (PH=7.4) t 聚乙二醇 6.00%; Proclin 300 0.Jg/L;
[0055] 氯化钠 9g/L; 乙二胺四乙酸二钠 2g/L; 吐温 20 1.2g/L；
[0056] 2)试剂R2的组成为：
[0057] 丙磺酸（MOPS)缓冲液 200mmol/L (丨)1-丨=7.4); 氯化钠 9g/L; Proclin 300 0.8g'L:
[0058] PA 抗体 150ml; 氯化胆碱 60g/L,,
[0059] 各种成分可以室温下依次添加，或者同时添加，或者是分别单独包装并于检测之 前再即时配制。试剂检测比例为3:1。
[0060] 本实施例描述的PA检测试剂盒，适用于各种类型的全自动生化仪，以日立7080全 自动生化仪为例，其操作如表1。分析方法:两点终点法，即试剂R1、R2的用量分别为225ul和 75ul，样本量6ul;225ul试剂R1加入6ul样本于37°C孵育3~5min，读取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，读取吸光度A1，计算A A=A1-A0;检测主波长为340nm。
[00611 实施例4:稳定性实验
[0062]本实验目的是检测试剂稳定性。
[0063]操作步骤:利用日立7080全自动生化分析仪，检测在2~8°C环境下不同时间的实 施例1所述试剂的空白吸光度，比较其吸光度变化。采用纯水作为空白样本在生化分析仪上 检测，根据要求记录检测样本吸光度。如样本空白吸光度则在测试主波长下，记录仪器测试 读数结束时(该项目设置参数的末尾一点）的吸光度。
[0064]表2结果显示，与康华生物试剂相比，本发明试剂半年内空白吸光度变化明显小于 康华生物试剂的空白吸光度，表明本发明所述试剂稳定性优于康华生物试剂。图2为本发明 试剂与康华生物试剂180天的稳定性验证试验空白吸光度的对比图。
[0065] 分别采用本发明试剂和北京九强生物技术股份有限公司的PA试剂，采用日立全自 动生化分析仪对50份人血清(包含正常和异常标本)按各自参数同时进行测定，对测定值进 行相关分析；图3为分析结果，其中X轴表示的是本发明试剂测定的病人血清结果，Y轴表示 的是北京九强生物技术股份有限公司试剂测定的病人血清结果，相关系数R2 = 0.9992,回 归方程为y = l.〇191x-1.1458。
[0066] 表 2
[0069]以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述 特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影 响本发明的实质内容。
【主权项】
1. 一种稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中，所 述R2试剂包含按浓度计的如下组分： 缓冲液 10.0.~20.0mmol/L; 氯化钠 7~9g/L; 防腐剂 0.3~0.8g/L; PA 抗体 8〇~15〇nih 稳定剂 40~60g/L。2. 如权利要求1所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为P-环糊精、氯化胆碱或甘露醇。3. 如权利要求2所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为氯 化胆碱。4. 如权利要求1所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂包含 按浓度或重量百分数计的如下组分： 缓冲液 100 -200mmol/L; 聚乙：醇 4.00-6.00%; 防腐剂 Q.3~0Jg/L;: 氯化钠 7-_9g/L; 乙二胺四乙酸二钠 1.5_-2.0g/L; 表面活性剂 OJ~1.2g/L。.5. 如权利要求1或4所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液 的PH值为7.0~7.4。6. 如权利要求1或4所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液 为三羟甲基氨基甲烷、丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸。7. 如权利要求6所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为丙 磺酸。8. 如权利要求1或4所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂 为Proclin 300。9. 如权利要求1或4所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述表面活 性剂为吐温80、吐温20或曲拉通X-100。10. 如权利要求1或4所述的稳定性高的前白蛋白检测试剂盒，其特征在于，其特征在 于，所述表面活性剂为吐温-20。
【文档编号】G01N33/68GK106053851SQ201610643014
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月8日 公开号201610643014.4, CN 106053851 A, CN 106053851A, CN 201610643014, CN-A-106053851, CN106053851 A, CN106053851A, CN201610643014, CN201610643014.4
【发明人】李伟奇, 林爱兰, 房君江, 张秀文, 林清玉
【申请人】上海睿康生物科技有限公司