胶体金免疫检测盘的制作方法
【技术领域】
[0001]本专利涉及一种新型胶体金免疫检测盘，该技术是将胶体金免疫层析技术和微处理技术结合起来，利用各自的优点实现快速检测。
【背景技术】
[0002]近年来，医生对更快速、更廉价、能提供更可靠结果的技术的需求，推动了POCT市场的不断发展。POCT，即时检验(point-of-care testing)，是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。
[0003]免疫层析技术是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术，其最大特点是具有高度选择性。待测物、抗体和标记物是免疫分析中的三个基本要素。它往往以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上涌动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的抗体发生高特异性和高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，通过可目测的标记物(胶体金)而达到直观的实验现象，而游离的标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。胶体金免疫层析技术灵敏度高，特异性强，同时兼具直观检测和定量检测的特性，是实现POCT的优良手段之一。
[0004]传统的胶体金免疫检测试剂一般由样品垫、金垫、NC膜、吸水纸构成，所需要的样本量一般在80yL以上，样本量相对较高，对于血液样本的检测而言，并不能直接取指血检测，往往需要有采血过程，这就严重限制了胶体金免疫层析技术在POCT上的应用。传统胶体金免疫检测试剂每次检测只能检测I至3项，并不能完成一个系列的检测，使得检测成本增加。
[0005]目前市场上并没有将样本处理以及系列检测整合在一起的产品，胶体金免疫检测盘将解决这个问题，在保证胶体金免疫检测特异性和灵敏度的情况下，集合样本处理和多项同时检测，节省检测时间，简化检测步骤，节约检测成本。
【发明内容】
[0006]本实用新型的目的是设计开发出一种胶体金免疫检测盘，不需要对样本进行前期处理，取指血即可同时检测多个项目，简化检测过程，使得检测更简单、省时、高效。
[0007]本实用新型提供的胶体金免疫检测盘包括样本室、液流通道、金室、引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、阀门以及上盖组成，检测盘采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，检测盘的样本室由三部分构成，上层为样本处理层，内壁有促凝剂，中间可活动部分为样本运输结构，将处理好的样本运至下层，中心有支撑结构，中间可活动部分比上层凸出一层的高度，顶部设有加样口，可活动部分可按压下沉至下层，下层通过液流通道与金室连通，金室内壁有标记了抗体或抗原的胶体金干粉，金室通过液流通道和阀门与引流垫连通，引流垫压住硝酸纤维素膜T线端，吸水纸压住硝酸纤维素膜C线端，硝酸纤维素膜上包被与标记抗体或抗原相匹配的抗体或抗原，引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸通过胶带使其背面相连，检测盘及上盖设有固定点，检测盘上盖边缘在每个吸水纸上方贴有检测项目名称，一个检测盘可以有多个项目检测通道，各通道呈点对称排布，通道数量根据实际需求选择。
[0008]本实用新型提供的胶体金免疫检测盘，由于样本室、液流通道和金室体积小、比表面积大，所以每项检测所需要的样本量小，仅需要一滴液体样本即可。
[0009]本实用新型的有益效果:
[0010]1.检测样本量小。每一项检测仅需要一滴液体样本，血液样本的检测取指血即可完成检测，减轻被检人痛苦；
[0011]2.检测效率高。一次点样可同时检测多个项目，节省检验时间；
[0012]3.检验操作简单。血液样本的前处理过程在检测盘上进行，无需进行静脉取血操作，简化操作步骤；
[0013]4.检验时间短。无需进行血清血浆制备，全血样本可以直接用，缩短检验时间；
[0014]5.灵敏度高、特异型好。本实用新型应用免疫层析技术，同时检测盘的比表面积大，保证了检测的高灵敏度、高特异性。
【附图说明】
[0015]图1为本实用新型检测盘单项检测结构俯视图
[0016]图2为本实用新型检测盘剖面图
[0017]图3为本实用新型检测盘示意图
[0018]图4(1)为本实用新型检测阳性结果示意图
[0019]图4(2)为本实用新型检测阴性结果示意图
[0020]图4(3)、图4(4)为本实用新型检测无效示意图。
【具体实施方式】
[0021 ]下面通过具体实施例对胶体金免疫检测盘进行详细说明。
[0022]1.胶体金免疫检测盘结构介绍
[0023]检测盘采用聚氨酯材料，具有抗蛋白吸附的特性。
[0024]图1所示样本室I由三部分构成，图2所示样本室上层9为样本处理层，内壁有促凝剂，图2所示中间可活动部分10为样本运输结构，将处理好的样本运至下层，中心有支撑结构，中间可活动部分比上层凸出一层的高度，顶部设有图1所示加样口 8，可活动部分可按压下沉至图2所示样本室下层11，下层通过图1所示液流通道2与图1所示金室3连通。
[0025]图1所示液流通道2宽度为2.5_，图1所示金室3直径为3_，图2所示样本室下层11以及检测盘的其余部分厚度均为1_。
[0026]图1所示阀门4的作用原理是通过缩小液流通道的宽度增加液流本身的表面张力，使液流在没有外力的作用下不能通过阀门，当施加的外力即离心力达到一定值之后液流方可通过阀门，经试验测得在转速达到SOOrpm液流即可通过阀门，阀门处液流通道宽1.5mm。
[0027]图1所示引流垫5、硝酸纤维素膜6、吸水纸7背部通过胶代链接为一体，在引流垫和吸水纸部分的检测盘上盖上有固定凸点将三者固定。
[0028]2.标记胶体金的制备
[0029]将0.02%氯金酸溶液搅拌煮沸，加入2%柠檬酸三钠1%体积，使柠檬酸三钠终浓度为0.02%，持续加热搅拌，溶液由蓝色逐渐变为酒红色即可，停止加热，搅拌冷却至室温。
[0030]取上述胶体金溶液，用0.02mol/L NaOH调pH值至7.4±0.1，加入1yg乙型肝炎病毒单克隆抗体a，混勾，摇床摇30 min;每毫升胶体金溶液中加入20 yL的10%BSA，混勾，摇床摇15 min; 8000g离心10 min，弃上清;加入1/100胶体金溶液体积的复溶液制成100倍浓缩液;测540nm处的OD值，用复溶液稀释至50D备用。
[0031]复溶液配置:0.1%BSA, 0.5% Tween_20、0.5% 蔗糖、0.05mol/L 硼酸盐缓冲液(pH8.0)o
[0032]3.硝酸纤维素膜包被
[0033]用l*PBS(pH7.4)将羊抗鼠多克隆抗体稀释到1.5mg/mL，将乙型肝炎病毒单克隆抗体b稀释到1.2mg/mL，用划膜机将稀释好的羊抗鼠抗体和乙型肝炎病毒单克隆抗体b包被于I cm宽硝酸纤维素膜上，分别作为C线(质控线)和T线(检测线)，包被参数为0.12yL/mm。将硝酸纤维素膜置于37°C干燥3小时备用。
[0034]4.促凝剂制备
[0035]将高纯度兔脑粉用I \?8稀释至1011^/1^，备用。
[0036]5.胶体金免疫检测盘组装
[0037]取500yL促凝剂放入图2所示样本室上层9中，取1yL标记胶体金放入图1所示金室3中，将检测盘放入冻干机中冷冻干燥2h。
[0038]图1所示引流垫5为无纺布，将无纺布和吸水纸7裁成30cmX2mm的长条，将引流垫
5、硝酸纤维素膜6、吸水纸7背部用胶带粘连，引流垫压住硝酸纤维素膜T线端，吸水纸压住硝酸纤维素膜C线端，均不覆盖T线、C线，将背部粘连好的引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸裁成2.5mm的条，放入冻干好的检测盘中，放入图1所示位置，扣好图2所示检测盘上盖12，在上盖吸水纸位置贴好图2所示项目名称标签13。
[0039]6.检测
[0040]将取好的指血加入图1所示加样口8，每个检测项目加一滴，晃动检测盘使样本均匀分布，室温静置5min，然后将检测盘按3600rpm离心，离心后按下图1所示样本室I中间的图2所示中间可活动部分10，使样本进入图2所示样本室下层11，然后低速瞬时离心，使样本进入图1所示金室3中，静置3min，然后800rpm离心30s，使样本通过图1所示阀门4，与图1所示引流垫5接触，1min后观察结果。
[0041]7.检测结果分析
[0042]T线不显色，C线显示紫红色，则表明项目名称标签中检测项目结果为阴性，如图4(I );T线显示紫红色，C线显示紫红色，表明项目名称标签中检测项目结果为阳性，如图4
(2);如果C线不显色，无论T线显示紫红色或不显色，均表示结果无效，如图4(3)、如图4(4)。
[0043]上述实施例仅仅是为了清楚表述本实用新型的具体实施，仅表达了本实用新型的一种实施方式，并不能理解为对本实用新型专利范围的限制，因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1.胶体金免疫检测盘包括样本室、液流通道、金室、引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、阀门以及上盖，检测盘采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，检测盘的样本室由三部分构成，上层为样本处理层，内壁有促凝剂，中间可活动部分为样本运输结构，将处理好的样本运至下层，中心有支撑结构，中间可活动部分比上层凸出一层的高度，顶部设有加样口，可活动部分可按压下沉至下层，下层通过液流通道与金室联通，金室内壁有标记了抗体或抗原的胶体金干粉，金室通过液流通道和阀门与引流垫联通，引流垫压住硝酸纤维素膜T线端，吸水纸压住硝酸纤维素膜C线端，硝酸纤维素膜上包被与标记抗体或抗原相匹配的抗体或抗原，引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸通过胶带使其背面相连，检测盘及上盖设有固定点，检测盘上盖边缘在每个吸水纸上方贴有检测项目名称，一个检测盘可以有多个项目检测通道，各通道呈点对称排布。2.根据权利要求1所述的胶体金免疫检测盘，其特征在于所述高分子材料是一种具有抗蛋白吸附特性的材料。
【专利摘要】本实用新型提供的胶体金免疫检测盘包括样本室、液流通道、金室、引流垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、阀门以及上盖组成，检测盘采用的高分子材料具有抗蛋白吸附特性，检测盘的样本室由三部分构成，上层为样本处理层，内壁有促凝剂，中间为可活动部分，顶部设有加样口，可活动部分可按压下沉至下层，下层通过液流通道与金室联通，金室内壁有标记了抗体或抗原的胶体金干粉，金室通过液流通道和阀门与引流垫联通，引流垫压住硝酸纤维素膜T线端，吸水纸压住硝酸纤维素膜C线端，硝酸纤维素膜上包被与标记抗体或抗原相匹配的抗体或抗原，一个检测盘可以有多个项目检测通道，各通道呈点对称排布，通道数量根据实际需求选择。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN205374460
【申请号】CN201521060487
【发明人】司英杰, 刘琳, 李梅, 殷娟娟, 向荣, 王昊, 张贤刚, 张贤强, 朱正宇, 李亚峰
【申请人】德康润生物科技（天津）有限公司
【公开日】2016年7月6日
【申请日】2015年12月18日