一种半定量检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供了一种半定量检测试剂盒，包括胶体金免疫层析试纸条(1)、盒体(2)、盖栓(3)和比色卡环(4)；所述的比色卡环(4)环绕于盒体(2)外表面，并能够以盒体(2)的中轴线为轴心相对于盒体(2)转动；表面所述的盒体(2)包括结果观察窗口(23)、盒体(2)顶壁开设的孔(21)、盒体(2)底壁开设的开口处(22)；所述的试纸条(1)置于盒体内，其中一端与盖栓(3)连接，另一端位于所述的开口处(22)附近；所述的试纸条(1)由开口处(22)伸出和返回盒体(2)；所述的盖栓(3)由孔(21)伸出和返回盒体(2)；所述的试剂盒包括盖栓(3)受力时向所述的孔(21)运动的限位机构(5)。
【专利说明】
一种半定量检测试剂盒
技术领域
[0001]本实用新型涉及胶体金免疫检测领域，具体而言，涉及一种半定量检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]胰岛素样生长因子结合蛋白-1主要的生物学意义是运输和调节胰岛素样生长因子-1与受体结合。近年来研究发现，胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊娠后母体和胎儿生长发育等有密切关系。
[0003]临产前的胎膜破裂称为胎膜早破，是一种常见的产科并发症，其发生率约占分娩总数的2%?25%。如不能及时诊断和处理，可危及母儿生命。近年来研究发现，检测宫颈阴道液中的生化标志物可诊断胎膜早破，有研究表明，胰岛素样生长因子结合蛋白-1作为诊断胎膜早破的指标，有较高的敏感性和特异性，是一项有效的检查方法。
[0004]同时，胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊娠期糖尿病发生风险呈负相关。
[0005]因此胰岛素样生长因子结合蛋白-1的浓度需要严格控制。
[0006]目前采用的胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒只能对羊水中胰岛素样生长因子结合蛋白-1进行定性检测，而没有针对胰岛素样生长因子结合蛋白-1在羊水中含量的定量检测试剂盒。
[0007]而现有的利用胶体金免疫层析法进行半定量检测的试剂盒，比色卡固定，不便于与检测结果的显色强度对照，并且加样时需从加样孔加样后再进行检测，实验流程复杂，需专业人员的操作，若出现操作失误，将损失样品并污染实验仪器。
【实用新型内容】
[0008]有鉴于此，本实用新型提供了一种半定量检测试剂盒，所述的试剂盒包括胶体金免疫层析试纸条、盒体、盖栓和比色卡环;所述的比色卡环环绕于盒体外表面，并能够以盒体的中轴线为轴心相对于盒体转动；；所述的盒体包括结果观察窗口、盒体顶壁开设的孔、盒体底壁开设的开口处;所述的试纸条置于盒体内，其中一端与盖栓连接，另一端位于所述的开口处附近;所述的试纸条由开口处伸出和返回盒体;所述的盖栓由孔伸出和返回盒体；所述的试剂盒包括盖栓受力时向所述的孔运动的限位机构。
[0009]优选地，所述的盖栓包括栓体和栓帽;所述的限位机构是可移除的环状部件;所述的可移除的环状部件卡扣在栓帽和所述的盒体的顶壁之间。
[0010]优选地，所述的可移除的环状部件为一侧带有开口的卡环。
[0011]优选地，所述的可移除的环状部件为连接在所述的栓帽上可撕除的拉环。
[0012]优选地，所述的盒体的开口处设有与其相配套并可移除的封口盖。
[0013]优选地，所述的胶体金免疫层析的试纸条包括依次连接的加样垫、结合物垫、包被膜、吸水垫;所述的结合物垫上含有胶体金抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜沿背离结合物垫方向依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体。
[0014]优选地，所述的加样垫具有搭接在所述的结合物垫上的加样搭接部，所述的结合物垫具有搭接在所述包被膜上的结合物搭接部，所述的吸水垫具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
[0015]优选地，所述的加样搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。
[0016]优选地，所述的结合物垫是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫。
[0017]优选地，所述的包被膜是由硝酸纤维素膜制成的包被膜。
[0018]与现有技术相比，采用本实用新型提供的半定量检测试剂盒通过将胶体金层析试纸条直接插入样品中采样，利用胶体金免疫层析法对待测物进行快速的检测。不需现有技术中利用移液枪或胶体滴管取样的过程，缩短了实验流程所需的时间。避免了取样过程中因操作失误，样品滴至实验台或其他实验用品、仪器之上，造成污染。也避免了因样品损失，而需重复取样的情况。
[0019]进一步的，由于试剂盒包含了以盒体中轴线为轴心，能够相对于盒体转动的比色卡环，检测结果能够更方便与比色卡环上的色带进行对比，判断显色强度。由于本实用新型提供的半定量检测试剂盒减少了取样过程，缩短了实验流程，样品在更短的时间内即可进行显色结果的对比，便于获得更为准确的检测结果。
[0020]更进一步的，由于试剂盒内的试纸条可相对于试剂盒的盒体上下运动，试纸条可伸出和返回盒体，避免了试纸条的污染及损坏，完善了试剂盒对于试纸条的保护功能。
[0021]由此可以看出，与现有检测装置相比，以上改进获得了:节约实验流程所需时间，避免了实验过程中可能出现的污染和重复取样，检测过程更为简便、快速、准确。
【附图说明】
[0022]图1是本实用新型提供的试剂盒结构示意图；
[0023]图2是本实用新型提供的试纸条的结构示意图；
[0024]图3是本实用新型提供的试纸条判定结果为阳性时示意图；
[0025]图4是本实用新型提供的试纸条判定结果为阴性时示意图；
[0026]图5是本实用新型提供的试纸条判定结果为无效时示意图。
[0027]其中，试纸条I，盒体2，盖栓3，比色卡环4，限位机构5，封口盖6，加样垫11，结合物垫12，包被膜13，吸水垫14，检测线T，质控线C，孔21，开口处22，结果观察口 23，栓体31，栓帽32ο
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例的方式对本实用新型的权利要求做进一步的详细说明，但并不构成对本实用新型的任何限制，任何人在本实用新型权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本实用新型的权利要求范围之内。
[0029]为了便于理解本实用新型，下面合实施例来进一步说明本实用新型的技术方案。
[0030]参阅图1至图2，图1为本实用新型提供的半定量检测试剂盒的盒体2的示意图，图2为试纸条I的示意图。
[0031]本实验新型提供了一种半定量检测试剂盒，所述的试剂盒包括胶体金免疫层析试纸条1、盒体2、盖栓3和比色卡环4;所述的比色卡环4环绕于盒体2外表面，并能够以盒体2的中轴线为轴心相对于盒体2转动;所述的盒体2包括结果观察窗口 23、盒体2顶壁开设的孔21、盒体2底壁开设的开口处22;所述的试纸条I置于盒体内，其中一端与盖栓3连接，另一端位于所述的开口处22附近;所述的试纸条I由开口处22伸出和返回盒体2;所述的盖栓3由孔21伸出和返回盒体2;所述的试剂盒包括盖栓3受力时向所述的孔21运动的限位机构5。
[0032]上述，比色卡环4能够以盒体2的中轴线为轴心转动，便于对比检测结果，因此得出的检测结果更为准确。
[0033]盒体2两端均设有开口，分别是开设于盒体2顶壁的孔21及开设于盒体底壁的开口处22;盒体两端的开口便于试纸条I及盖栓3伸出和返回盒体2;
[0034]试纸条I一端与盖栓3连接，盖栓3沿着试纸条I的方向由盒体顶壁的孔21伸出和返回盒体2;试纸条I的另一端在盒体2底壁开口处22附近，当盖栓3受到沿着试纸条I方向的力，盖栓3由孔21返回盒体2内，同时试纸条I沿着受力方向由开口处22伸出盒体2;
[0035]可以理解的是，当盒体2的开口处22露出试纸条I，即可取样。检测时，伸出盒体2的试纸条I插入样品中，利用胶体金免疫层析法，样品将沿着试纸条I向盖栓3的方向移动，并最终获得检测结果，即可以由结果观察窗口 23观察到胶体金显色的情况，将显色情况与比色卡环4进行对比，判断检测结果的显色强度。
[0036]需要理解的是，为避免取样前，试纸条I伸出盒体2，被污染或折损，造成检测结果不准确，所以设置了限位机构5。限位机构5能够限制盖栓3受力时向盒体2的孔22方向运动；从而限制了与之相连的试纸条I伸出盒体2。
[0037]在本实用新型实施例中，所述的盖栓3包括栓体31和栓帽(32);所述的限位机构5是可移除的环状部件;所述的可移除的环状部件卡扣在栓帽和所述的盒体的顶壁之间。
[0038]上述，限位机构5是卡扣在栓帽32和所述的盒体2的顶壁之间的环状部件。即，检测前，环状部件能够限制栓帽32受力时向盒体2的孔22方向运动;从而限制了试纸条I伸出盒体2。检测时，移除环状部件后，栓帽32受力时向盒体2的孔22方向运动;试纸条I伸出盒体2，进行米样。
[0039]本实用新型实施例中，所述的可移除的环状部件为一侧带有开口的卡环。
[0040]参见图1为卡环的示意图，环状部件是一端开口的卡环，由该开口处移除卡环时，卡环受力发生弹性形变至开口处可通过盖栓3的栓体31即可。
[0041]本实用新型其他实施例中，所述的可移除的环状部件为连接在所述的栓帽32上可撕除的拉环。
[0042]上述，拉环的形式有多种，满足可撕除及限位的功能即可。拉环可通过连接柱与盒体2连接，由一端的拉环扣从盒体2上撕除后，栓体31可相对于盒体2向下运动，从而露出加样垫11。
[0043]本实用新型实施例中，所述的盒体2的开口处22设有与其相配套并可移除的封口盖6 0
[0044]上述，封口盖6可为PVC封口盖，套于盒体开口处21，需要取样时，即可盒体2上移除，也可以是铝膜等其他材质的封口盖。完善了试纸盒盒体2保护试纸条I不被污染的功能。
[0045]本实用新型实施例中，所述的胶体金免疫层析的试纸条I包括依次连接的加样垫U、结合物垫12、包被膜13、吸水垫14;所述的结合物垫12上含有胶体金抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜13沿背离结合物垫12方向依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体。
[0046]上述，可以将液体状态的样品(如血液，血浆及其他体液样品稀释液等)加样到加样垫11上，该液态状态的样品可以通过吸水作用，沿着加样垫11向与之连接的结合物垫12移动，接触到结合物垫12后再沿着结合物垫12向与之连接的包被膜13移动，接触到包被膜13之后再沿着包被膜13向与之搭接的吸水垫14移动。
[0047]样品添加到加样垫11上后，样品通过不同方向的毛细作用被分流，分流后依次移动到各个试纸条I的结合物垫12和包被膜13上。当样品移动到结合物垫12时，样品中的待检测抗体，如人抗体，可与结合物垫12上包被的胶体金标记的特异性抗体相结合，而后含有从结物合垫12上结合或混合的物质的样品继续移动到包被膜13上，并与包被膜13上包被的特异性抗体相结合并且被截留，从而使得样品中的待测物得以被检测。应该理解的是特异性抗体经包被液包被于包被膜13上，即检测线T;质控线C通常为包被液包被的羊抗鼠多克隆抗体或羊抗兔多克隆抗体。检测线T与质控线C之间应留有适当间距，而设置为相互平行的区域，更便于区分两者。
[0048]本实用新型实施例中，所述的加样垫11具有搭接在所述的结合物垫12上的加样搭接部，所述的结合物垫12具有搭接在所述包被膜13上的结合物搭接部，所述的吸水垫14具有搭接在包被膜13上的吸水搭接部。
[0049]上述，“搭接”是指，相邻的两个组件的首尾部分重叠，并且在重叠处形成可以允许液体样品移动的连接结构。例如，可以在相邻的两个组件的首尾部分通过按压操作形成较为紧密的重叠结构，使得样品能够从上游组件的尾部通过该重叠结构移动至下游组件上。上游组件可以重叠在下游组件的上方，也可以重叠在下方。在检测时，可以将液体状态的样品(如血液，血浆以及其他体液稀释液等)加样到加样垫11上，该液态状态的样品可以通过吸水作用，沿着加样垫11向与之搭接的结合物垫12移动，接触到结合物垫12后再沿着结合物垫12向与之搭接的包被膜13移动，接触到包被膜13之后再沿着包被膜13向与之搭接的吸水垫14移动。
[0050]本实用新型实施例中，所述的加样搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。
[0051 ]上述，由加样垫11向吸水垫14方向的移动通常称为层析作用，由此可知，进一步的，所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距，可以使得结合物垫上胶体金标记后特异性抗体能够与样品中的待测抗原留有充分的结合时间，如待测样品中存在所要检测的特异性抗原，则可以在含有胶体金标记后特异性抗体的结合物垫处形成抗原一抗体一胶体金复合物;所述的结合物搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距，预留充分的结合时间以便上述抗原一抗体一胶体金复合物于包被膜上形成抗体一抗原一抗体一胶体金复合物，即发生双抗夹心的特异性结合。
[0052]本实用新型实施例中，所述的结合物垫12是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫12。
[0053]上述，结合物垫12可由聚酯纤维素膜制成，聚酯纤维素膜与胶体金的亲和力优于其他材料制成的结合物垫，防止胶体金发生聚集或形成沉淀。
[0054]加样垫11可以是由聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的加样垫，优选玻璃纤维样品垫;玻璃纤维相对于其他材料脱水性好、不黏连样品。
[0055]本实用新型实施例中。所述的包被膜13是由硝酸纤维素膜制成的包被膜13。
[0056]上述，包被膜13优选硝酸纤维素膜制成的包被膜，硝酸纤维素膜的蛋白固定能力优于其他材料制成的包被膜，能够更好的固化包被在其上的蛋白质。
[0057]此外本申请还提供了该半定量检测试剂盒的检测方法:
[0058]I)移除半定量检测试剂盒的限位机构5，试纸条I伸出盒体2 ；
[0059]2)样品通过吸水垫14的吸水作用，沿着加样垫11向与之搭接的结合物垫12移动，
[0060]若样品液中含有待测物，待测物可与结合物垫3上胶体金抗待测物单克隆抗体交联物结合形成抗原一抗体一胶体金复合物，含有所述复合物的样品液继续移动至包被膜13上，并与包被膜13上检测线T处包被的抗待测物单克隆抗体结合，形成抗待测物克隆抗体一待测物一抗待测物抗体一胶体金复合物，检测线T出现红色条带，质控线C处也出现红色条带，检测结果为阳性；
[0061]若样品液中不存在待测物，检测线T则无红色条带出现，只有质控线C处出现红色条带，检测结果为阴性；
[0062]若检测线T和质控线C均未出现红色条带，则代表操作有误或检测结果无效，需重复试验。
[0063]结果判断:加样10分钟后，观察结果窗口23，参阅图3，当质控线C和检测线T都有红色条带出现时说明样品中含有能够与检测蛋白特异性结合的抗体，待测物为阳性；
[0064]参阅图4，当只有质控线C有红色条带而检测线T无红色条带时，说明样品中待测物为阴性。
[0065]参阅图5当质控线C和检测线T均未出现红色条带，则代表操作有误或检测结果无效，需重复试验。
[0066]将检测结果与比色卡进行对比，判断显色情况。
[0067]此外，本申请还提供了半定量检测试剂盒中胶体金免疫层析试纸条I的制备方法:试纸条I包括从左到右依次连接的加样垫11、结合物垫12、包被膜13和吸水垫14;所述的检测试纸的结合物垫12上含有胶体金抗待测物单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜13上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗待测物单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体；
[0068]其中:
[0069]I)加样垫11的制备方法是:将加样垫11裁成20mm X 300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，I小时之后取出，于室温干燥16-18小时。
[0070]加样垫11的缓冲液配方如下:2%854、1%?￥?、0.5%丁￥6611溶解于0.01的？85(PH7.4)缓冲液中。
[0071]2)结合物垫12的制备方法:
[0072]①胶体金溶液的配制:将浓度为lmg/ml氯金酸溶液950ml加热煮沸5?10分钟，加入浓度为100mg/ml的柠檬酸三钠溶液50ml，混匀，继续加热5?10分钟，直至溶液变透明玫瑰红色为止。加纯化水补足体积至1000ml。
[0073]②抗待测物抗体金标液的配制:取上述胶体金溶液300ml，加入0.1M K2CO3置于室温搅拌，调节溶液的pH值至8.0;取抗待测物单克隆抗体6mg，加入浓度为0.015M体积为20mlPBS缓冲溶液中混匀后加入搅拌中的胶体金溶液中；将上述混合溶液室温下搅拌2小时;搅拌结束后加入3 %聚乙二醇20000溶液160ml，混匀；室温下以13000转/分钟，离心30分钟分离上述溶液;离心结束后弃去上清液，取沉淀，将该沉淀溶解于10ml的金标抗体保存液中。
[0074]③将上述抗待测物单克隆抗体金标液用金标抗体保存液稀释后，铺于结合物垫12上，置于温度为37 °C的干燥间内干燥4?6小时；干燥后的金标结合物垫12同干燥剂一同放入密封袋，置玻璃干燥器中保存备用。
[0075]3)包被膜13的制备方法:
[0076]①包被
[0077]包被液的制备:取硼酸12g，氢氧化钠2g溶于纯化水并定容至1000ml。
[0078]检测线T:在包被膜13上划线，在膜的一端用记号笔做好质控线C和检测线T的标记，质控线C和检测线T的距离为0.5cm，检测线T与包被膜13下缘的距离为lcm，用上述包被液将抗待测物单克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为IyL/cm，速度100mm/s。
[0079]质控线C:上述包被液将羊抗鼠多克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为IyL/cm，速度 I OOmm/ s。
[0080]②干燥
[0081]置于37°C干燥间内4?6小时;干燥完毕后将包被膜13与干燥剂一同放入密封袋置于玻璃干燥器中保存备用。
[0082]另外，胶体金免疫层析法试纸条I的组装方法如下:
[0083]①利用裁切机裁切加样垫11、结合物垫12和吸水垫14，裁切后的加样垫11宽度为10mm，长度为58mm;裁切后的结合物12垫宽度为7mm，长度为58mm;裁切后的吸水垫14宽度为10mm，长度为58mm。
[0084]②将宽度为1mm的吸水垫14贴装于PVC底基I上，并且使其下端与包被膜13叠压2mm，然后撕去结合物垫12下端保护膜，将宽度7mm的结合物垫12与包被膜13叠压2mm，进一步在结合物垫12下方粘贴宽度1mm的加样垫11;粘贴时需要将吸水纸、结合物垫3、加样垫11均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡。
[0085]③取出粘贴好的检测试纸置于切板机上，切成宽度为2mm，然后在铝箔袋中放入一包Ig的干燥剂和裁切好的检测试纸，在封口机上将铝箔袋热合封口。
[0086]本实验新型实施例中，检测装置还可含有未图示的滴管、干燥剂、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
[0087]本申请中提供的检测装置使用胶体金免疫层析法，利用位于吸水垫5上的标签识另IJ贴6和盒体7开设的标签观察窗口8相配合，提高了临床检测的效率，同时避免了由于标识不明，造成的检测装置的浪费。
[0088]本实验新型实施例中，检测装置还可含有未图示的滴管、干燥剂、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
【主权项】
1.一种半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒包括胶体金免疫层析试纸条(I)、盒体(2)、盖栓(3)和比色卡环(4);所述的比色卡环(4)环绕于盒体(2)外表面，并能够以盒体(2)的中轴线为轴心相对于盒体(2)转动；表面所述的盒体(2)包括结果观察窗口(23)、盒体(2)顶壁开设的孔(21)、盒体(2)底壁开设的开口处(22);所述的试纸条(I)置于盒体内，其中一端与盖栓(3)连接，另一端位于所述的开口处(22)附近;所述的试纸条(I)由开口处(22)伸出和返回盒体(2);所述的盖栓(3)由孔(21)伸出和返回盒体(2);所述的试剂盒包括盖栓(3)受力时向所述的孔(21)运动的限位机构(5)。2.如权利要求1所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的盖栓(3)包括栓体(31)和栓帽(32);所述的限位机构(5)是可移除的环状部件;所述的可移除的环状部件卡扣在栓帽(32)和所述的盒体(2)的顶壁之间。3.如权利要求2所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的可移除的环状部件为一侧带有开口的卡环。4.如权利要求2所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的可移除的环状部件为连接在所述的栓帽(32)上可撕除的拉环。5.如权利要求1所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的盒体(2)的开口处(22)设有与其相配套并可移除的封口盖(6)。6.如权利要求1所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的胶体金免疫层析的试纸条(I)包括依次连接的加样垫(11)、结合物垫(12)、包被膜(13)、吸水垫(14);所述的结合物垫(12)上含有胶体金抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜(13)沿背离结合物垫(12)方向依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗胰岛素样生长因子结合蛋白I单克隆抗体，所述的质控线(C)包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体。7.如权利要求6所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的加样垫(11)具有搭接在所述的结合物垫(12)上的加样搭接部，所述的结合物垫(12)具有搭接在所述包被膜(13)上的结合物搭接部，所述的吸水垫(14)具有搭接在包被膜(13)上的吸水搭接部。8.如权利要求6所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的加样搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。9.如权利要求6所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的结合物垫(12)是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫(12)。10.如权利要求6所述的半定量检测试剂盒，其特征在于:所述的包被膜(13)是由硝酸纤维素膜制成的包被膜(13)。
【文档编号】G01N33/577GK205426928SQ201620268093
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年3月31日
【发明人】张兆鸿
【申请人】珠海华澳生物科技有限公司