一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供了一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，包括柱体、柱盖帽、滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜，所述柱体上端和柱盖帽配合密封，柱子内部由上到下依次设置有滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜；所述器件将干血斑采集、保存和代谢产物提取纯化整合到一个器件，有效保护了干血斑，简化了分析操作流程，提高了代谢产物的检测灵敏度，缩短了制样分析时间。
【专利说明】
一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件
技术领域
[0001]本实用新型涉及一种医学器材，尤其是一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件。
【背景技术】
[0002]干血斑纸片法(Dried Blood Spot，DBS)检测已经被广泛运用到代谢疾病筛查、新生儿检查和药代动力学(DMPK)研究中。其主要的步骤，如专利CN203965385U所描述，主要包括血液采集、运输、打孔、代谢产物提取和串联质谱分析等步骤:首先采集测试者(或者实验动物)少量全血，滴到滤纸上，挥干形成干血斑。将样品运输到检测机构，由检测机构分析人员，在滤纸血斑处打孔，取下血斑。将血斑转移到离心管或者96-孔板里，加入提取液对血液里的代谢产物进行提取，将提取物进入串联质谱分析。
[0003]虽然干血斑纸片法较传统的取血方法有一些优势，专利CN202330105U和专利CN103278348A也对干血斑法血样采集做了一些改进。但是，目前该方法仍然存在一些局限性:首先，从血液采集、代谢产物提取到串联质谱分析，步骤繁琐，耗时长，特别是对于大量样品的检测，非常容易出错。其次，干血斑在保存和运输过程中，部分代谢产物被空气氧化的问题，没有被很好的解决。最后，也是最重要的一点，血液中磷脂类化合物的含量很高，干血斑检测中小分子代谢产物的串联质谱分析，常常受到磷脂等大分子信号的干扰，出现离子抑制效应(1n suppress1n effect)，降低检测灵敏度。
【实用新型内容】
[0004]本实用新型所要解决的技术问题在于提供一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件。
[0005]为解决上述技术问题，本实用新型的技术方案是:
[0006]—种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，包括柱体、柱盖帽、滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜，所述柱体上端和柱盖帽配合密封，柱子内部由上到下依次设置有滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜。
[0007]所述第一带孔塑料隔膜用于隔离滤纸和树脂填料，所述树脂填料为大分子填料，该既可以用于吸附蛋白质、DNA和磷脂等，也可以吸附水分，防止样品在保存或运输中受潮变质，样品采集和血斑代谢产物提取纯化在一个器件里进行，样品采集完成后，将柱子放入真空保鲜袋，抽真空保存。
[0008]优选的，上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，所述柱体底部为锥形结构。
[0009]优选的，上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，所述柱体的长度为4cm。
[0010]优选的，上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，所述滤纸为直径12mm的圆形滤纸片。
[0011]优选的，上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，所述树脂填料的颗粒直径大于所述第一带孔塑料隔膜和第二带孔塑料隔膜的网孔直径。
[0012]优选的，上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，所述柱盖帽上设有二维标记码。
[0013]本实用新型的有益效果是:
[0014]上述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，设计巧妙，将干血斑采集、保存和代谢产物提取纯化整合到一个器件，有效保护了干血斑，简化了分析操作流程，提高了代谢产物的检测灵敏度，缩短了制样分析时间。
[0015]具体来说，柱体内部分为四层，由上到下依次为滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜，滤纸用于采集血液，取血后，其可装入真空保鲜袋，抽真空后，保存或运输，避免了干血斑在保存和运输过程中受潮、受污染以及血斑上代谢产物受氧化，缩短分析时间，提高检测灵敏度，避免干血斑代谢产物被氧化和检测中磷脂干扰。
[0016]使用过程中，分析测试人员不需要取出滤纸，直接将器件套入离心管中，加入提取溶液，进行代谢产物提取和纯化，通过离心收集下部的提取液，进行串联质谱分析即可。
【附图说明】
[0017]图1是本实用新型所述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件的结构示意图。
[0018]图2是本实用新型所述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件套入离心管中进行代谢产物提取纯化的应用示意图。
[0019]图中，1-柱体2-柱盖帽3-滤纸4-第一带孔塑料隔膜5-树脂填料6_第二带孔塑料隔膜7-离心管
[0020]图3是干血斑中棕榈酰肉碱的串联质谱检测，其中，(A)传统法；(B)本新型器材。[0021 ]图4是干血斑真空保存与正常空气保存部分代谢产物含量变化的对比图。
【具体实施方式】
[0022]为了使本领域的技术人员更好的理解本实用新型的技术方案，下面结合附图及【具体实施方式】对本实用新型所述技术方案作进一步的详细说明。
[0023]实施例1
[0024]如图1所示，一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，包括长度为4cm的柱体1(可插入离心管)、柱盖帽2、直径12_的圆形滤纸3、第一带孔塑料隔膜4、树脂填料5和第二带孔塑料隔膜6，所述柱盖帽上设有二维标记码，方便分析人员进行样品信息录入、存储，所述柱体上端和柱盖帽配合密封，柱体底部为锥形结构，柱子内部由上到下依次设置有滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜，所述树脂填料的颗粒直径大于所述第一带孔塑料隔膜和第二带孔塑料隔膜的网孔直径。
[0025]上述第一带孔塑料隔膜用于隔离滤纸和树脂填料，所述树脂填料为大分子填料，该既可以用于吸附蛋白质、DNA和磷脂等，也可以吸附水分，防止样品在保存或运输中受潮变质，样品采集和血斑代谢产物提取纯化在一个器件里进行，样品采集完成后，将柱子放入真空保鲜袋，抽真空保存，防止血斑样品在保存和运输过程中，受到空气氧化，改变血斑中代谢产物的成分和含量。由于器件的直径尺寸略少于标准的1.7ml离心管尺寸，可以直接套入离心管或者96-孔板进行操作。
[0026]具体操作过程包括:取指尖血时，先用酒精消毒纸对指尖进行消毒处理，取一次性针头，刺破指尖皮肤，用毛细管取血，滴到柱子里的滤纸上，直至滤纸吸附饱和。将滤纸在阴凉处自然风干。风干后，将柱帽盖盖紧，将器件放入真空保险袋中，抽真空后，邮寄或者送到检测中心进行检测。因为滤纸预先切好放入柱子中，又有柱帽保护，避免了血斑在上样、风干和运输中的污染。柱子中的树脂填料还具有一定的吸水功能，能防止样品受潮。此外，抽真空保存，防止血斑上代谢产物长期暴露在空气中，被氧化。
[0027]实施例2
[0028]如图2所示，利用新型器件对干血斑中代谢产物进行提取，测试人员可以直接将带有干血斑的实施例1所述器件置于一个新的1.7ml的离心管7上，在离心管侧壁，贴上提供的二维码标签。打开器件的柱盖帽，在滤纸上加入200微升代谢产物提取溶剂(甲醇-乙腈，50:50)，对干血斑上的代谢产物进行提取。提取后，将新型器件连同离心管置于低速离心机中，离心3分钟，离心转速为SOOrpm。底部离心管中的液体为代谢产物提取液。代谢产物提取完后，将柱帽盖紧柱子，放回真空保鲜袋中，抽真空后保存。
[0029]可见，本实用新型省去了了传统提取法中的的切割滤纸片和标记离心管这2个耗时和容易出错的步骤，直接将新型器件置于一个新的离心管上，提供的二维码条贴到离心管侧壁上，加入代谢产物提取溶剂，即可进行代谢产物的提取和进一步纯化，去除干扰小分子代谢产物检测的大分子磷脂类物质。此外，用过的滤纸片，因为其仍然在柱子里，盖上柱盖，抽真空，可继续保存，便于以后查询。而传统法，滤纸片提取后，因为没有办法在滤纸片上标记信息，不能再继续保存。
[0030]实施例3
[0031 ]干血斑中代谢产物棕榈酰肉碱的串联质谱检测
[0032]取同时采集的，来自与同一个测试者的，2个干血斑，一个通过传统法进行干血斑采集和代谢产物提取，另一个通过本新型器件进行干血斑采集和代谢提取。分别取两种代谢提取物10微升进样，利用串联质谱(FIA-MS/MS)进行分析。如图3所示，传统法所得的棕榈酰肉碱的色谱峰，受到磷脂类物质的离子抑制效应的影响，色谱峰的信噪比(Signal/Nosie，S/N)只有8，峰面积只有8e4(图3A)，而通过本新型器件提取纯化的样品，棕榈酰肉碱出现很清晰的色谱峰，色谱峰信噪比为320，峰面积达到3.2e6，是传统法的400倍。
[0033]由此实例表明，本新型器件的应用，显著提高了干血斑代谢产物检测的灵敏度。
[0034]实施例4
[0035]干血斑真空保存与正常空气保存部分代谢产物含量对比
[0036]取同时采集的，来自与同一个测试者的，2个干血斑，一种通过传统法，在保鲜袋不抽真空，空气中保存，另一种，保险袋抽真空保存。其余保存条件一致。保存一个月后，比较代谢产物的含量差异。如图4表明，牛磺酸、氨基丁酸和维生素D3在空气中保存一个月后，含量较真空保存，有显著性下降，统计学t检验表明，两者存在显著性差异(p〈0.05)。本实例表明，真空保存能够有效防止干血斑上的代谢产物被氧化变质。
[0037]可见，本实用新型所述干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件:(I)简化了分析操作步骤和缩短了分析操作的时间:本器件将血斑取样和代谢产物提取整合到一起，分析人员无需费时从滤纸上扣掉血斑，无需另标记新的离心管，直接在本器件里加入提取溶剂即可进行提取，提取液无需进一步纯化，直接可以利用串联质谱分析。(2)提高了代谢产物检测的灵敏度和准确性:本专利申请方案通过在柱子里添加树脂填料，除去了对小分子代谢产物检测形成干扰的磷脂类化合物和大分子DNA、蛋白等，显著提高了代谢产物的检测灵敏度。(3)防止了样品在存储和运输过程中被氧化:将本新型器件放入真空袋中，抽真空保存，避免了某些代谢产物长期暴露在空气中被氧化，提高了代谢产物的稳定性。(4)降低了测试分析人员在处理大量样品时出错的几率:本新型器件的柱帽上贴有二维标识码，与受试者采集血液时提交的信息表的二维码信息是一致的。分析人员无需重新标记新的离心管，只需要将我们提供的二维码条，贴到底部收集离心管上，即可。通过读码器可以读到被检测者信息，并可将信息通过Excel表在电脑上编辑和备注。另外，由于滤纸是在柱子里面，不需要取出来，而且有二维码信息的柱帽是固定在柱子上的，因此，代谢产物提取后的滤纸，还可以连同柱子器件，一起继续抽真空保存，便于以后核查等需求。这克服了传统方法，提取完后，滤纸无法辨别和再保存的缺点。
[0038]上述参照实施例对该一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本实用新型总体构思下的变化和修改，应属本实用新型的保护范围之内。
【主权项】
1.一种干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:包括柱体、柱盖帽、滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜，所述柱体上端和柱盖帽配合密封，柱子内部由上到下依次设置有滤纸、第一带孔塑料隔膜、树脂填料和第二带孔塑料隔膜。2.根据权利要求1所述的干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:所述柱体底部为锥形结构。3.根据权利要求1所述的干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:所述柱体的长度为4cm。4.根据权利要求1所述的干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:所述滤纸为直径12mm的圆形滤纸片。5.根据权利要求1所述的干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:所述树脂填料的颗粒直径大于所述第一带孔塑料隔膜和第二带孔塑料隔膜的网孔直径。6.根据权利要求1所述的干血斑采样和代谢物提取纯化二合一器件，其特征在于:所述柱盖帽上设有二维标记码。
【文档编号】G01N1/34GK205483752SQ201620160602
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月2日
【发明人】李克峰, 王旭
【申请人】天津桑尼匹克生物科技有限公司