一种用于质粒提取的磁流体的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，属于磁性颗粒的制备领域。本发明是为了解决传统磁流体制备成本高，磁性粒子在缓冲溶液中的稳定性差，放置1个月、甚至几天后，其分离和纯化效果降低等问题。本发明提供的磁流体的制备方法包括以下内容：将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，混合搅拌后，逐滴加入羟基乙叉二膦酸，得到黑色溶液A，用外加磁场分离得到黑色固体A；将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡后，分离得到黑色固体B；将黑色固体B干燥、研磨成细粉后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。本发明提供的制备方法操作简单，成本低；制备而成的磁流体，磁响应好，能实现质粒的快速分离和纯化。
【专利说明】一种用于质粒提取的磁流体的制备方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于磁性颗粒的制备领域，具体涉及一种用于质粒提取的磁流体的制备方法。
【背景技术】
[0003]质粒提取是指去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。质粒提取是基因工程中的经常性操作，也是载体构建中不可缺少的一个环节。
[0004]质粒提取基本上是采用两种办法:一是利用酶/弱去污剂部分裂解细菌，在抽提时只让质粒从细菌中释放出来，而不让基因组DNA从细菌中出来，从而将质粒和基因组DNA分开；二是利用NaOH/SDS完全裂解细菌，让质粒和细菌基因组DNA都从细菌中出来，再利用质粒和基因组DNA在变性/复性过程中的不同表现，将质粒与基因组DNA分开。
[0005]方便快捷的质粒提取方法，在基因遗传工程中十分重要。利用磁流体提取质粒具有以下好处:磁性粒子具有超顺磁性，在磁场中有较强的磁性，去掉磁场后磁性很快消失，在磁场中不被永久磁化，故可在外加磁场(如磁铁)作用下，快速、方便地分离和纯化目标质粒，无需离心等繁琐的操作。目前的磁流体制备成本高，磁性粒子在缓冲溶液中的稳定性差，放置I个月、甚至几天后，其纯化效果降低，这些都限制了磁流体在质粒提取操作中的广泛使用。此外，目前的磁流体中含有某些基团，容易混合在提取的质粒中，影响质粒后续的酶切、转化等操作。
【发明内容】
[0006]为解决上述问题，本发明提供一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，制备而成的磁流体磁响应性好，在不同缓冲液中对质粒的吸附和解吸效果佳，能方便迅速地实现质粒的分离或纯化。本发明采用如下技术方案:
一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于包括以下步骤:
a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，然后搅拌混合，得到混合液A；
b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌5?9h，得到黑色溶液A，用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A ；
C、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡5?12h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中分离得到黑色固体B ;
d、将黑色固体B干燥，研磨成200目?500目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。
[0007]优选地，步骤a中所述的硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠的水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2:1:8。
[0008]优选地，步骤a中所述的搅拌混合时间为5?10h ;所述的搅拌混合的同时采用油浴加热，加热温度为3(T50°C。
[0009]优选地，步骤b中所述的用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A包括以下内容:从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2?3次，然后用去离子水清洗固体直到清洗液的PH=6.7?7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A。
[0010]本发明的有益效果如下:
1.本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法中，在高碱性环境下催化制备四氧化三铁-二氧化硅核壳结构的磁性纳米粒子，采用羟基乙叉二膦酸作为分散剂，制得的磁流体在溶液中的分散性好，增大与质粒的接触面积。
[0011]2.本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法中，采用聚醚酰亚胺对磁性粒子进行表面改性，得到表面有氨基修饰的磁性粒子，便于对质粒纯化。
[0012]3.本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法，制备而成的磁流体磁响应性好，长期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，对质粒的吸附效果几乎没有减少；制备而成的磁流体在碘化钠等溶胶液中，能很好地吸附核酸，在去离子水或TE缓冲液中，又能很好地将质粒解吸下来，达到质粒的快速分离和纯化，无需离心操作，操作过程中，质粒损失少，并且不影响质粒后面的酶切、扩增、转化等操作。
【具体实施方式】
[0013]以下实施例是为了更好地说明本发明的具体内容，并不用于限制本发明的保护范围。
[0014]实施例1
一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，包括以下步骤:
a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2:1:8 ;然后在油浴加热条件下搅拌混合，加热温度为3(T40°C，搅拌混合时间为5?7h，得到混合液A;
b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌5?7h，得到黑色溶液A，从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2?3次，除去多余的羟基乙叉二膦酸，然后用去离子水清洗固体，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A ;
c、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡5?8h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中将溶液去除，然后用去离子水清洗黑色固体，利用外加磁场分离得到黑色固体B;
d、将黑色固体B干燥，研磨成200目?300目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。
[0015]制备而成的磁流体磁响应性好，长期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，对质粒的吸附效果几乎没有减少；制备而成的磁流体对质粒的吸附效果好，达到质粒的快速分离和纯化，无需离心操作，操作过程中，质粒损失少，并且不影响质粒后面的酶切、扩增等操作。
[0016]实施例2
一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，包括以下步骤:
a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2:1:8 ;然后在油浴加热条件下搅拌混合，加热温度为4(T50°C，搅拌混合时间为5?10h，得到混合液A;
b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌6、h，得到黑色溶液A，从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2?3次，除去多余的羟基乙叉二膦酸，然后用去离子水清洗固体，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A ;
C、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡8?12h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中将溶液去除，然后用去离子水清洗黑色固体，利用外加磁场分离得到黑色固体B;
d、将黑色固体B干燥，研磨成400目飞00目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。
[0017]制备而成的磁流体磁响应性好，长期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，对质粒的吸附效果几乎没有减少；制备而成的磁流体对质粒的吸附效果好，达到质粒的快速分离和纯化，无需离心操作，操作过程中，质粒损失少，并且不影响质粒后面的酶切、扩增等操作。
[0018]实施例3
一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，包括以下步骤:
a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2:1:8 ;然后在油浴加热条件下搅拌混合，加热温度为35?45°C，搅拌混合时间为6?8h，得到混合液A ;
b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌6?8h，得到黑色溶液A，从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2?3次，除去多余的羟基乙叉二膦酸，然后用去离子水清洗固体，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A ;
C、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡8?10h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中将溶液去除，然后用去离子水清洗黑色固体，利用外加磁场分离得到黑色固体B;
d、将黑色固体B干燥，研磨成300目?400目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。
[0019]制备而成的磁流体磁响应性好，长期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，对质粒的吸附效果几乎没有减少；制备而成的磁流体对质粒的吸附效果好，达到质粒的快速分离和纯化，无需离心操作，操作过程中，质粒损失少，并且不影响质粒后面的酶切、扩增等操作。
【权利要求】
1.一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于包括以下步骤: a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，然后搅拌混合，得到混合液A； b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌5?9h，得到黑色溶液A，用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A ； C、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡5?12h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中分离得到黑色固体B ; d、将黑色固体B干燥，研磨成200目?500目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。
2.根据权利要求1所述的用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于，步骤a中所述的硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠的水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2:1:8。
3.根据权利要求1所述的用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于，步骤a中所述的搅拌混合时间为5?10h ;所述的搅拌混合的同时采用油浴加热，加热温度为3(T50°C。
4.根据权利要求1所述的用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于，步骤b中所述的用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A包括以下内容:从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2?3次，然后用去离子水清洗固体直到清洗液的pH=6.7?7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A。
【文档编号】H01F1/44GK104319055SQ201410656262
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】武守阳 申请人:成都理想财富投资咨询有限公司