凝聚胺法血小板血型抗体检测技术和试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本项发明属医学生物技术生物制品领域
【背景技术】
[0002] 本发明在世界上首次将凝聚胺红细胞抗原抗体检测技术与乳胶凝集技术结合，建 立了血小板血型抗体的检测技术方法和制备了试剂盒，主要应用于临床血小板血型配型、 血小板血型抗体筛选,检测及确定实验。
【发明内容】
[0003] 血小板输血前应该进行配型试验，即检测病人（受血者）血清是否存在供者血小 板相应的同种异体血型抗体，阴性结果表明受血者血清中不存在该血小板的抗体，称之供 者受者血小板血型相容，该血小板输入该病人体内是安全的，不会被排斥，不会引起其他免 疫病理反应；阳性结果则表明受者血清中存在该血小板相应抗体，与供者血小板血型不相 容，将会发生排斥反应等，不能将该血小板输给病人。血小板配型的意义即为病人选择血型 相容的供者血小板。但迄今为止，血小板配型试验并没有成为临床血小板输血前的常规险 测项目，其原因是没有能在数分钟内可以完成的快速简单的易于标准化的血小板血型抗体 检测方法。
[0004] 血小板细胞膜同种异体抗原分二类，第一类为血小板和其它细胞共有的抗原；ABH 抗原和HLA-I类抗原；第二类抗原为血小板特异性抗原。血小板同种异体抗原抗体反应引 起的临床综合症主要有：1、胎儿及新生儿同种免疫血小板减少症；2、输血后紫癜；3、血小 板输血无效症；4、免疫血小板减少症等等。对这些病症的检验预防和治疗都需要血小板血 型的检测技术。血型相容的血小板输血是有效地治疗手段。
[0005] 本发明凝聚胺法血小板配型技术，其凝聚胺反应不同于传统的间接抗人球反应， 传统的间接抗人球反应是红细胞抗原抗体在抗人球蛋白的帮助下，经37°C孵育一段时间后 进行，而凝聚胺反应是在凝聚胺溶液的作用下降低红细胞表面电荷而进行的血凝反应。凝 聚胺技术比较传统的利用间接抗人球技术敏感性强，反应快速，结果易于判定，特别足操作 简单，省略了孵育过程，试验在更少时间内完成。本发明是世界上首次将目前凝聚胺试验做 以修改，用于血小板血型配型等血小板抗原抗体反应的试验中，能够彻底解决血小板血型 检测中长期以来始终未能解决的问题。
[0006] 由于血小板血型在临床和输血实践中的重要意义，因此已有不少血小板血型检测 技术，但都未能成为临床常规试验，除ABO血型可以通过检测受者、供者红细胞确定其两 者血小板ABO血型的相容性，在临床和输血实践中，迄今为止还很难应用现有的技术对每 一次血小板输血进行应该常规进行的配型试验。目前已存在的血小板血型检测技术有：血 小板免疫荧光试验、酶联免疫吸咐试验；混合被动血凝技术、混合细胞粘附试验（固相技 术）、特异的单克隆抗体对血小板抗原固定试验等，这此试验的操作程序都比较复杂，需要 时间长，有的所需设备仪器昂贵。所形成的事实迄今为止在全世界血小板血型配型都没有 成为临床血小板输血的常规检测项目。
【具体实施方式】
[0007] 本发明微柱凝胶免疫检测一血小板配型技术的程序是：1、制备指示红细胞：动物 红细胞通过聚丙乙烯颗粒包被，制备成标准的指示红细胞试剂；2、将指示红细胞加入待输 血小板与病人血清；3、依次加入低离予强度溶液与凝聚胺溶液，离心15秒/ 3, OOOrpm，浙 干上清，轻摇试管，肉眼观察是否凝集；4.如有凝集，加入重悬液后轻摇试管，结果见附件 (附件所示凝聚胺结果判断标准，阳性以"土至4+"表示，表明该病人与待输血小板血型不 相容，即病人的血清中含有与待输血小板抗原产生特异性反应的血小板抗体，该血小板输 入该病人体内必然引起排斥和/或其它免疫病理反应；阴性结果以表示，表明该病人 血清中没有该血小板相应的特异性抗体，两者血小板血型相容，该血小板可以输给该病人。
[0008] 综上所述，在世界上首次将用于红细胞抗原抗体检测的微柱凝胶技术用于血小板 配型和血小板抗原（血型）检测，血小板抗体筛选、血小板抗体特异性检定及鉴定。
[0009] 本发明实用性：比以往的方法更为简单、省时及可靠、易标准化的方法和试剂盒， 使得临床常规可以进行血小板血型配型，确保了血小板安全输血。
[0010] 本发明原理也可适用于白细胞、淋巴细胞及其它人体组织细胞的配型试验及血型 检定试验，应用于器官移植相关的配型及其它有关枪测项目，具备了新颖性、创造性、实用 性条件，故向国家专利局及有关部门申报发明专利。
[0011] 凝聚胺结果判断标准
[0012]
【主权项】
1. 一种简单、快速、可靠的凝聚胺法血小板血型抗体检测技术及试剂盒适用于血小板 抗体选。包括：凝聚胺试验试剂盒制备方法和用于检测血小板细胞膜上同种异体抗体 (血型抗体.免疫反应的试验方法及其应用。2. 根据权利1的方法，试剂盒制备方法包括： 低离子强度溶液：葡萄糖，乙二胺四乙酸二钠；凝聚胺溶液：葡萄糖，凝聚胺；重悬液： 氯化钠，朽1檬酸三钠；指示红细胞：动物红细胞加聚丙乙烯颗粒。3. 根据权利要求1的方法，其中凝聚胺试验方法及其应用如下： 血小板抗体筛选：1. 指示红细胞（同2.)加待输血小板和病人血清反应2. 依次加入低离子强度溶液与凝聚胺溶液3. 离心后浙干上清，轻摇试管，观察红细胞是否凝集4. 加入重悬液，轻摇试管,观察红细胞是否凝集5. 如反应为阳性凝集"土~4+"，表明病人血清中有血小板血型特异性抗体；如反应为 无集，则为阴性" 表明病人血清中不含血小板血型抗体。
【专利摘要】本项发明属医学生物技术生物制品领域(以下简称凝聚胺血小板抗体检测技术)，本发明在世界上首次将凝聚胺红细胞抗原抗体检测技术与乳胶凝集技术结合，建立了血小板血型抗体的检测技术方法和制备了试剂盒，主要应用于临床血小板血型配型、血小板血型抗体筛选，检测及确定实验。用此技术进行的检测方法比传统技术简便，三分钟内可完成试验、易于标准化，在国内外首次能够使血小板配型技术成为临床常规检测项目。
【IPC分类】G01N33/80
【公开号】CN104914252
【申请号】CN201410087602
【发明人】茅培华, 李平, 陈亚平, 邓玲玲
【申请人】上海润普生物技术有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月11日