一种新型肾脏病模型的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种肾脏疾病模型的构建，尤其涉及一种新型肾脏病模型的制作方法。
【背景技术】
[0002]随着社会经济的发展和人们生活方式的改变，慢性肾脏病(CKD)已呈流行趋势，人群中的发病率高达10%以上。鉴于人们对CKD发病机制的认识还不够深入，临床上也缺乏满意的干预手段，大部分病人最终进入终末期肾病阶段，需要血液净化及肾脏移植治疗，给家庭和社会带来沉重的负担。在CKD的病因中，急性肾脏损伤(AKI)后的渐进性进展被认为是CKD发生的重要病因之一。因此深入研究和认识AKI向CKD进展的分子病理机制，提出新的治疗靶点，是临床干预CKD的重要基础。近些年来，人们利用传统的AKI动物模型(如缺血/再灌注肾损伤模型，顺铂诱导的急性肾损伤等)，延长观察时间，进行AKI向CKD转化的相关研究。但是由于这些传统AKI模型的高死亡率(长期观察的死亡率甚至可以达到80-90%以上)，而幸存的动物可能由于其基因背景相关的抗损伤作用(肾脏损伤较重的大部分已经死亡，肾脏损害较轻的可以存活，这可能与基因差异相关)，其病理损害较轻，无法呈现典型的CKD病理表现(广泛的纤维化和肾小管萎缩等)。正是缺少可以广泛应用及认可的AKI向CKD进展的动物模型，使得该领域的研究无法快速进展，也极大的限制了临床干预手段的研发。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种新型肾脏病模型的制作方法。
[0004]本发明通过以下技术方案来实现上述目的:
[0005]本发明将小鼠肾动脉夹闭60分钟，小鼠可存活，于21天取肾脏检测病理，可发现弥漫型纤维化等慢性肾损伤病理改变;其操作过程包括以下步骤:
[0006](I)将小鼠麻醉后打开前腹，分离暴露出肾动脉；
[0007](2)用动脉夹将单侧肾动脉夹闭60分钟；
[0008](3)夹闭完成后，取出动脉夹，关闭腹腔；
[0009](3)将小鼠正常饲养3周，取双侧肾脏检测病理状况。
[0010]进一步，所述步骤(I)的具体方法为:取小鼠腹部正中切口，沿腹白线切开肌层，进入腹腔，推开肠管向对侧，暴露一侧肾脏及血管，充分游离肾门处血管，暴露动静脉;所述步骤(2)的具体方法为:以血管夹同时夹闭肾动静脉，计时60分钟，期间温盐水纱布覆盖腹腔切口，保持小鼠身体温暖;所述步骤(3)的具体方法为:所述关闭腹腔为缝合腹部肌肉及皮肤。
[0011]本发明的有益效果在于:
[0012]本发明是一种新型肾脏病模型的制作方法，与现有技术相比，本发明动物模型的成功建立为肾脏病领域进行深入的AKI向CKD转化的机制及干预研究提供了有效的工具和可能，不仅大大降低了造模动物死亡率，并有效的形成慢性肾损伤，具有推广应用的价值。
【具体实施方式】
[0013]下面对本发明作进一步说明:
[0014]本发明将小鼠肾动脉夹闭60分钟，小鼠可存活，于21天取肾脏检测病理，可发现弥漫型纤维化等慢性肾损伤病理改变;其操作过程包括以下步骤:
[0015](I)将小鼠麻醉后打开前腹，分离暴露出肾动脉；
[0016](2)用动脉夹将单侧肾动脉夹闭60分钟；
[0017](3)夹闭完成后，取出动脉夹，关闭腹腔；
[0018](3)将小鼠正常饲养3周，取双侧肾脏检测病理状况。
[0019]进一步，所述步骤(I)的具体方法为:取小鼠腹部正中切口，沿腹白线切开肌层，进入腹腔，推开肠管向对侧，暴露一侧肾脏及血管，充分游离肾门处血管，暴露动静脉;所述步骤(2)的具体方法为:以血管夹同时夹闭肾动静脉，计时60分钟，期间温盐水纱布覆盖腹腔切口，保持小鼠身体温暖;所述步骤(3)的具体方法为:所述关闭腹腔为缝合腹部肌肉及皮肤。
[0020]本发明应用单侧肾脏较长时间缺血(30-60分钟)再灌注，对侧肾正常保留，经过四周的观察，不但在AKI侧肾脏诱导了典型的CKD病变(广泛的小管间质纤维化及肾小管萎缩)，还极大地降低了死亡率(由于对侧肾脏的代偿，死亡率可以接近0%)。同时，通过调控缺血时间(30、45、60分钟等)，可以获得达到不同程度的CKD。由于健侧肾脏的代偿作用，小鼠无尿毒症表现，因此患侧肾脏的进展性损伤中也除外了尿毒症毒素的复杂影响，其CKD的发生基本上是单纯AKI的作用。此外，本模型的另一优势是，在典型的CKD发生后，切除健侧肾脏，可以导致尿毒症的表现，进而可以进行AKI诱导的终末期肾病的相关研究。
[0021]以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
【主权项】
1.一种新型肾脏病模型的制作方法，其特征在于:将小鼠肾动脉夹闭60分钟，小鼠可存活，于21天取肾脏检测病理，可发现弥漫型纤维化等慢性肾损伤病理改变;其操作过程包括以下步骤: (1)将小鼠麻醉后打开前腹，分离暴露出肾动脉； (2)用动脉夹将单侧肾动脉夹闭60分钟； (3)夹闭完成后，取出动脉夹，关闭腹腔； (3)将小鼠正常饲养3周，取双侧肾脏检测病理状况。2.根据权利要求1所述的新型肾脏病模型的制作方法，其特征在于:所述步骤(I)的具体方法为:取小鼠腹部正中切口，沿腹白线切开肌层，进入腹腔，推开肠管向对侧，暴露一侧肾脏及血管，充分游离肾门处血管，暴露动静脉。3.根据权利要求1所述的新型肾脏病模型的制作方法，其特征在于:所述步骤(2)的具体方法为:以血管夹同时夹闭肾动静脉，计时60分钟，期间温盐水纱布覆盖腹腔切口，保持小鼠身体温暖。4.根据权利要求1所述的新型肾脏病模型的制作方法，其特征在于:所述步骤(3)的具体方法为:所述关闭腹腔为缝合腹部肌肉及皮肤。
【专利摘要】本发明公开了一种新型肾脏病模型的制作方法，具体为将小鼠肾动脉夹闭60分钟，小鼠可存活，于21天取肾脏检测病理，可发现弥漫型纤维化等慢性肾损伤病理改变；与现有技术相比，本发明动物模型的成功建立为肾脏病领域进行深入的AKI向CKD转化的机制及干预研究提供了有效的工具和可能，不仅大大降低了造模动物死亡率，并有效的形成慢性肾损伤，具有推广应用的价值。
【IPC分类】A61D1/00
【公开号】CN105596108
【申请号】CN201610057281
【发明人】贾占军, 于婧, 董隽, 张爱华, 黄松明, 王璐, 公伟, 李树珍
【申请人】南京医科大学附属南京儿童医院
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月27日