一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法
【技术领域】
[00011本发明涉及实验室检测领域，特别是一种人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法。
【背景技术】
[0002] 2015年药典记载：取本品粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷 30ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇30ml，加热回流3小时， 提取液低温蒸干，加水l〇ml使溶解，加石油醚(30~60 °C )提取2次，每次10ml，弃去醚液，水 液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱长为15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液。再用 20 %乙醇50ml洗脱，弃去20 %乙醇洗脱液，继用80 %乙醇80ml洗脱，收集洗脱液70ml，蒸干， 残渣加甲醇溶解，转移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。LC测试的 条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-〇. 05 %磷酸溶液(20:80)为流动相;检 测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于1500。
[0003] 药典的方法操作过程复杂，洗脱次数多，对操作人员的操作技能要求高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，该方法操作简 单，测定精度高。
[0005] 本发明提供的技术方案为:一种人参叶中人参皂苷Rg 1和Re的测定方法，其特征在 于，包括以下步骤：
[0006] 步骤1:将人参叶粉碎后米用ASE萃取法得到萃取液；
[0007] 步骤2:将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤 液；
[0008] 步骤3:将滤液采用液相色谱法分析；
[0009] 液相色谱分析条件为：
[0010] a)仪器:双三元液相色谱仪
[0011] b)色谱柱：50X2.1mml.7ym
[0012] c)柱温:40 °C
[0013] d)流速:0.3mL/min
[0014] e)流动相：乙腈-水;梯度洗脱；
[0015] 其中梯度洗脱具体为在o-lmin时流动相为乙腈:水，其体积比为60:40;l-3min时 流动相为乙腈:水，其体积比为70:30; 3-8min时流动相为乙腈:水，其体积比为80:20;
[0016] f)检测波长：203nm〇
[0017] 在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的步骤1具体为：
[0018] S11:将人参叶粉碎后，过筛；
[0019] S12:称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
[0020] S13:在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻 土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0021]萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110°C;静态萃取时间7min;冲洗体积 80%;静态循环次数3次。
[0022]在上述的人参叶中人参阜苷Rgl和Re的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。 [0023]在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的静态萃取的压力为 1500psi〇
[0024]在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间 为 60s。
[0025]在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的步骤2具体为将萃取液 稀释后加入到离心管中净化，然后过滤后得到滤液，所述的离心管中加有石墨碳SPE柱。 [0026]在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的双三元液相色谱仪为 Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。
[0027]在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的色谱柱为Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ色谱柱。
[0028] 在上述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法中，所述的ASE萃取法采用的是 ASE350快速溶剂萃取仪。
[0029] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0030] 本发明的萃取方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
【附图说明】
[0031] 图1为本发明的色谱分析人参皂苷Rgl有效性验证的直角坐标图；
[0032]图2为本发明的色谱分析人参皂苷Re有效性验证的直角坐标图。
【具体实施方式】
[0033]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0034] 实施例1:
[0035]将人参叶样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.2g，精密称定，与lg硅藻土混合均匀， 待用，移入到预先放好过滤膜的ASE 10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池 口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移至蒸发皿中蒸干后用甲醇 溶解并定容至10mL容量瓶，吸取lml样品液加入装有lOOmgGCB的2ml离心管进行净化，溶液 过0.22微米滤膜后进入HPLC测定。
[0036]萃取条件(见表1)为：
[0037]表 1
luujv」 分机万沄艿lu淞《β堵沄，mffle堵分机杀忏：
[0040] a)仪器:Thermo 双三元液相(υ-3000)
[0041] b)色谱柱：Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ 1.7μηι 50X2.1 mm
[0042] c)柱温:40°C
[0043] d)流速:0.3mL/min
[0044] e)流动相：乙腈-水梯度洗脱（lmin乙腈:水的体积比为60:40; l-3min乙腈:水的体 积比为70:30; 3-8min乙腈:水的体积比为80:20)
[0045] f)检测波长：203nm [0046] 色谱分析有效性验证：
[0047] 取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每lml 含人参皂苷Rgl 〇.2mg、人参皂苷Re 0.2mg的溶液。
[0048] 取人参皂苷Rg 1对照品、人参皂苷Re对照品，精密称定，加甲醇制成每1 m 1约含 0.2mg的混合溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.5μ1、ΙμL、1.5μ1、2μ1、3μ1进入LC测定， 并依照上述方法测定。以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程:人参皂苷Rgl y = 1264.2χ+7·6763，R2 = 0.99979,人参皂苷Rgl y= 1148.8χ-0·96132，R2 = 0.99998,人参 皂苷Rgl在0 ·0911~0 · 5466mg/ml，人参皂苷Rgl在0 · 1013~0 · 6078mg/ml范围内呈良好的线 性关系。表2和图1为人参皂苷Rgl线性试验结果;表3和图2为人参皂苷Re线性试验结果;其 中，图1和2的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。
[0049]表2人参皂苷Rgl线性试验结果
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[0053] 1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0054]取相同批号的样品（批号：15071601)0.2g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取 供试品溶液，进样量为lyL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品人参皂苷Rgl和人参皂苷 Re的总量见表1，RSD为0.5%，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表4。
[0055] 表 4
[0056]
[0057] 1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
[0058] 米用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对人参叶进彳丁萃取，人参叶为3批， 批号分别为 15071601，120303，1407221;
[0059] 实施例1的ASE萃取方法对同一批次的人参叶采用相同规格的设备平行测试两次， 分别为ASE1和ASE2表示。
[0060] 具体测试结果见下表5;
[0061] 表 5 [0Γ…
[0063]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将人参叶粉碎后米用ASE萃取法得到萃取液； 步骤2:将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液； 步骤3:将滤液采用液相色谱法分析； 液相色谱分析条件为： a) 仪器:双三元液相色谱仪 b) 色谱柱：50X2.1mml.7ym (：)柱温:40°〇 d) 流速:0.3mL/min e) 流动相：乙臆-水;梯度洗脱； 其中梯度洗脱具体为在〇-lmin时流动相为乙腈:水，其体积比为60 :40; l-3min时流动 相为乙腈:水，其体积比为70:30; 3-8min时流动相为乙腈:水，其体积比为80:20; f) 检测波长：203nm〇2. 根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，其特征在于，所述的 步骤1具体为： S11:将人参叶粉碎后，过筛； S12:称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用； S13:在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至 达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为:萃取溶剂为甲醇；萃取温度110 °C ;静态萃取时间7min;冲洗体积80 % ;静 态循环次数3次。3. 根据权利要求2所述的人参叶中人参皂苷Rg 1和Re的测定方法，其特征在于，所述的 萃取池的体积为1 〇m 1。4. 根据权利要求2所述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，其特征在于，所述的 静态萃取的压力为1500psi。5. 根据权利要求4所述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，其特征在于，所述的 静态萃取的吹扫时间为60s。6. 根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rgl和Re的测定方法，其特征在于，所述的 步骤2具体为将萃取液稀释后加入到离心管中净化，然后过滤后得到滤液，所述的离心管中 加有石墨碳SPE柱。7. 根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rg 1和Re的测定方法，其特征在于，所述的 双三元液相色谱仪为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。8. 根据权利要求7所述的人参叶中人参皂苷Rg 1和Re的测定方法，其特征在于，所述的 色谱柱为Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ色谱柱。9. 根据权利要求8所述的人参叶中人参皂苷Rg 1和Re的测定方法，其特征在于，所述的 ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。
【专利摘要】本发明公开了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；本发明提供了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105651925
【申请号】
【发明人】陈学松, 廖强, 韦日伟, 陈佳丽, 姚泳成
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年4月15日