盒包含用于测量所述生物样品中和至少一个对照样品中 SCD127的表达的特异性工具或试剂。
[0062] 特别地，本发明的试剂盒可用于评估住院患者的死亡风险，所述患者是已经受诸 如手术、烧伤、创伤等侵害或感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，并且特别是处于 脈毒性休克的状态的患者。
[0063] 优选地，可用于测定生物样品中SCD127的表达的存在于本发明的试剂盒中的特异 性工具或试剂可W被用于检测和/或定量SCD127的表达，优选地在蛋白质水平上。
[0064] 在特别优选实施方式中，本发明的试剂盒含有单克隆或多克隆抗-SCD127抗体、特 别是单克隆抗体，来作为能够测量所述生物样品中SCD127的表达的特异性工具或试剂。
[0065] 另一个阳性对照样品也可W是从已知已幸免的至少一个患者获得的生物样品。类 似地，另一个阴性对照样品也可W是从已知未幸免的至少一个患者获得的生物样品。与其 用于阳性或阴性对照无关，运种类型的对照样品特别得自一个或多个下述患者，所述患者 已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害、或感染，从而产生全身炎症反应(SIRS),特别是呈现脈 毒症的一个或多个患者，并且优选是处于脈毒性休克的状态的一个或多个患者。
[0066] 优选地，该试剂盒包含阳性对照样品和阴性对照样品，并且特别地，各样品选自如 上文定义的校准样品。
[0067] 本发明还涵盖了本发明的试剂盒用于实施本发明的方法的用途，且特别是在患者 中评估死亡风险的用途，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等的侵害或感染，从而产 生全身炎症反应(SIRS)的患者，特别是呈现脈毒症、特别是重度脈毒症的患者。优选地，使 用本发明的试剂盒能够评估处于脈毒性休克的状态中的患者的死亡风险。
[0068] 设及所述方法的上述所有优选【具体实施方式】和其组合也构成本发明的试剂盒及 其用途的优选实施方式。
[0069] 各种其他特性从参照附图作出的W下描述而变得明显，所述附图通过非限制性实 例示出本发明的【具体实施方式】，其中：
[0070] ?图1示出脈毒性休克之后在70位患者中，在D1-2测量的血浆性SCD127的浓度、 SAPSII得分和SOFA得分的R0C曲线。
[0071] ?图2AJB和2C示出在脈毒性休克之后在D1-2(A)和D3-4(B)的70位患者的SCD127 和SAPSII得分(C)的存活曲线。
[0072] ?图3A和3B示出在脈毒性休克之后在D1-2(A)和D3-4(B)的70位患者的SCD127的 组合与SAPSII得分的存活曲线。
[007引方法
[0074] 生物样品
[0075] 在脈毒性休克之后第1-2天(D1-2)和第3-4天(D3-4)自处于脈毒性休克的70位患 者采集血浆样品，并且随后储存（回顾性队列）。还从41位健康志愿受试者采集了血浆样品。
[0076] 入住脈毒性休克的重症监护之后28天，14位患者未存活（"NS")，即，20%，同时70 位患者中56位患者("S")已存活。
[0077] 通过化ISA测定IL-7受体(SCD127)的可溶形式 [007引"涂覆"
[0079] 制备"涂覆"缓冲液，所述缓冲液在500毫升(mL)水（pH 9.6)中含有0.8克（g) Na2C〇3、1.4g Na肥〇3和O.lg 化。
[0080] 在板中每个孔沉积稀释于"涂覆"缓冲液中的100化捕获抗体（Ab)(小鼠抗-人 CD 127单克隆抗体R34.34，BeckmanCoulter?) ([Ab ]=祉g/mL)。随后将该板覆盖并在4 °C下 解育过夜。
[0081 ] 随后抽吸所述孔的内容物，并且用至少3(Κ)化的0.05%PBS-Tween20洗涂缓冲液洗 涂所述孔3次。每次洗涂时均小屯、去除所有液体。在最后一次洗涂之后，将所述板倒置在吸 附剂纸上W消除缓冲液的所有痕迹。
[00剧"封闭"
[0083] 借助于每个孔150化的封闭缓冲液（10%胎牛血清(FCS)/PBS-Tween20,0.05%)来 封闭非特异性固定，然后在37Γ下将所述板解育化。
[0084] 同样，抽吸所述孔的内容物，并且用至少30化L的0.05 %PBS-Tween20洗涂缓冲液 洗涂所述孔3次。每次洗涂时均谨慎去除所有液体。在最后一次洗涂之后，将所述板倒置在 吸附剂纸上W便消除缓冲液的所有痕迹。
[00财样品和对照
[00化]校准标度是用稀释于PBS 5%FCS稀释缓冲液中的重组人IL-7Ra/CD127化嵌合体 (R&D Systems-目录号：306-IR)来产生，如在下表1中并根据C.Janot-Sardet等人，Journal of Immunological Methods,2010,28,115-123所述。
[0087]表 1 [008引
[0089] 将lOOyL样品或对照（临时重构且W60ng/mL和lOng/mL的浓度呈等分试样的 CD127FC嵌合体溶液)加入各孔，随后将该板在37°C下解育化。
[0090] 再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少3(Κ)化的0.05%PBS-Tween20洗涂缓冲液洗 涂所述孔3次。每次洗涂时均小屯、去除所有液体。在最后一次洗涂之后，将所述板倒置在吸 附剂纸上W便消除缓冲液的所有痕迹。
[0091] 检测抗体
[0092] 将稀释于PBS/5 %FCS中的100化的检测抗体（用ImL的1 %TBS-BSA(R&DSystems麼 )重构的生物素酷化山羊多克隆抗-CD127抗体)加入各孔（[Ab]=2(K)ng/mL)，然后将该板在 37 °C下解育化。
[0093] 再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少3(Κ)化的0.05%PBS-Tween20洗涂缓冲液洗 涂所述孔3次。每次洗涂时均小屯、去除所有液体。在最后一次洗涂之后，将所述板倒置在吸 附剂纸上W便消除缓冲液的所有痕迹。
[0094] 掲示内容
[0095] 将10化L链霉抗生物素蛋白-皿P加入各孔（[链霉抗生物素蛋白-皿P]=祉L/mL)。 随后覆盖该板并且在环境溫度下解育30min。
[0096] 再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少3(Κ)化的0.05%PBS-Tween20洗涂缓冲液洗 涂所述孔3次。每次洗涂时均小屯、去除所有液体。在最后一次洗涂之后，将所述板倒置在吸 附剂纸上W便消除缓冲液的所有痕迹。在此洗涂阶段，所述孔用洗涂缓冲液浸泡Imin至 2min，然后抽吸。
[0097] 将两个烧瓶的比色底物TMB(3,3'，5,5'-四甲基对二氨基联苯，bioM自rieux# XX化F1UC)按体积比混合，并且将10化L的此底物溶液沉积至各孔中。随后覆盖该板并且在 环境溫度下解育30min。
[0098] 最终，通过测量450nm处的吸光度来读取该板。
[0099] 多变量分析
[0100] Cox模型可W评价"危害比化azard Ratio)"和其95%置信区间（95%CI似及其显 著性。SAPSII和SOFA得分W连续变量的形式被包括在该模型中，假定其值与死亡风险之间 (存活者与非存活者)呈线性关系。统计分析是使用软件SPSS( 17.0版，SPSS，化icago，IL)和 Gra地化d P;rism(5.03版，Gra地化d Software,La Jolla,CA)来进行。将P值小于0.05视为 显著。
[0101] 存活比较分析("对数秩和化Og Ra址)"检验）
[0102] 使用上述软件生成R0C(接受者操作特性）曲线，并且用于获得最佳灵敏度和特异 性的优化浓度或最佳SCD127阔是通过约登指数(Youden's index)来定义，其将用于所考虑 的标记物的增量数值的灵敏度和特异性的参数相结合。因此确定出提供最高约登指数（即 优化的灵敏度和特异性）的标记物的优化浓度。在基于该优化值对患者划分层之后，获得 Kaplan-Meier存活曲线。使用"对数秩和(；Log Rank)"检验和基于运些存活曲线的斜率计算 的"危害比"(和其95%置信区间），来评估所述组之间存活的差异。
[0103] 结果
[0…4] 分析IL-7受体的可溶形式(SCD127)
[0105] 如上所述在来自处于脈毒性休克的70位患者的血浆样品中测量血浆SCD127的浓 度，并且基于住院治疗的前24小时可得的临床和生理数据，在运些患者中评估SOFA和 SAPSII严重度得分。
[0106] 还在得自41位健康志愿受试者化V)的样品上进行相同测量。
[0107] 结果归纳于下表2至4:
[0刪 SCD127预测脈毒性休克患者的死亡的能力
[0109]针对待研究事件（即，死亡率），研究测定血浆SCD127的浓度的预测能力。还针对该 相同事件，研究得自两个参考得分(SAPSII和SOFA)的预测能力。
[0110] 结果是W患脈毒性休克的70位患者在D1-2测量的SCD127W及SAPSII和SOFA严重 度得分的的R0C(接受操作特性）曲线形式示于图1中。
[0111] 曲线下面积的评估在下表2中记录，意味着已知SOFA和SAPSII得分的预