木脂素类化合物4-酮基松脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种从药用植物山芝麻中分离得到的木脂素类化合物 4-丽基松脂素在制备抗己肝病毒药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 据有关统计显示，全世界大约有3亿多人为慢性己肝病毒（皿V)携带者，我国约占 半数。己肝病毒感染已成为全球性的影响人类健康的主要疾病之一，由于皿V感染可W导 致慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌，因此成为影响人类寿命的九大疾病之一。由于慢性皿V 感染者较非携带者发生肝癌的相对危险率为217,因此在全世界每年大约有200万人死于 己肝引起的肝硬化和肝癌，而我国又是己型肝炎的高发区，每年约有25万人死于与己肝相 关的慢性肝病（肝硬化与肝癌）。上述疾病给人民健康和国民经济带来巨大损失。因此，寻 求高效低毒的抗皿V药物已成为刻不容缓的问题。
[0003] 药物化学工作者在筛选抗皿V药物的过程中进行了不懈的努力，但到目前为止能 治愈皿V感染的特效药还在寻找。临床上已获得抑A正式批准使用的a-干扰素和核巧类 药物拉米巧巧只能在某种程度上获得治疗效果，对大多数病人还达不到治愈的目的，停止 治疗后的"反固巧见象是医药工作者最感棘手的问题，所W开发研制高效、低毒、不"反固圳勺 抗皿V新药向药物化学工作者提出了挑战。在筛选抗皿V新药的过程中，越来越多的药物 化学工作者把注意力转向了植物来源丰富、价廉易得、毒副作用小、分子结构复杂多样的天 然化合物。
[0004] 山芝麻为梧桐科植物山芝麻化elicteres angustifolia L.)的干燥根或全株，味 苦、性寒，归肺、大肠经，可解表清热、解毒消肿，用于治疗感冒发热、巧腮、乳娥、麻疹、咳嗽、 泄泻痴疾、痛肿。药理研究表明山芝麻具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗肿瘤等活性。我们的研 究表明山芝麻粗提物具有很好的抗皿V活性，但对其抗皿V的药效物质却缺乏研究，而本发 明涉及的4-丽基松脂素尚未见抗皿V活性报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从山芝麻中分离得到的木脂素类化合物4-丽基松脂素 在制备抗己肝病毒药物中的用途。
[0006] 本发明应用现代药理筛选方法，从梧桐科山芝麻属化elicteres)植物山芝麻 (H. angustifolia)中提取分离得到木脂素类化合物4-丽基松脂素，并经试验证实其具有 抗皿V活性。
[0007] 本发明所述的活性化合物具有如下的化学结构：
[0008]
[0009] 本发明的化合物通过下述方法制备：
[0010] 取山芝麻干燥地上部分15kg，95%己醇回流提取，浓缩后分别用石油離、己酸己醋 和正了醇萃取，共得1. 05kg，取己酸己醋萃取物160g进行硅胶柱色谱，W二氯甲焼-甲醇梯 度洗脱，所得流份W不同洗脱剂进行反复硅胶柱色谱、MPLC和半制备HPLC等分离纯化手段 分离得到化合物4-丽基松脂素。
[0011] 本发明的化合物4-丽基松脂素进行了体外抗皿V实验，结果证实，所述化合物具 有显著的抗皿V活性，且有效浓度低，其对皿sAg的ICs。值为36. 6 U g/ml，对皿eAg的ICsc 值为126. 4 U g/ml，显著高于阳性对照拉米巧巧，可作为活性成分用于制备抗皿V的药物。
【具体实施方式】
[0012] 实施例14-丽基松脂素的提取分离
[0013] 取山芝麻干燥地上部分巧kg,粉碎，用95 %己醇回流提取3次巧化X3)，每 次化，合并提取液并浓缩得浸膏1.0化g，加水（化）混悬，分别W等体积石油離、己酸己 醋和正了醇萃取5次，合并萃取液并浓缩至干，得己酸己醋萃取物160g。将己酸己醋萃 取部位经硅胶（200-300目）柱色谱分离，依次W二氯甲焼-甲醇巧0:1-0:1)梯度洗 脱，得到11个流份（化.1-11)，其中流份化.3 (30g)再经硅胶柱色谱（二氯甲焼-甲醇， 30:1,20:1，10:1,5:1,3:1，1:1)、MPLC(甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脱）和半制备 HPLC 等手段纯化，分离得到化合物4-丽基松脂素（4-ketopinoresinol，1)。
[0014] 所得化合物为白色结晶性粉末，[口按：+58. 6 (C 1. 5, MeOH) ;UV (MeOH)入ma JimQog e ) :282 (2. 65)，233 (3. 22)，210(4. 28) ;IR(KBr) : Umaxkm 1) :3438, 1744, 12 68;ESI-MSm/z:395[M+Nar0iH-Mffi(CD30D，600MHz)5H:6.82~6.99WH，m，aromat ic-H)，5. 42(lH，d，J = 3. 8Hz，H-6)，5. 25(lH，d，J = 3.6Hz，H-2)，4. 32(lH，dd，J = 6. 9, 9. 3Hz, H-8a)，4. 05 (IH, dd, J = 4. 8, 9. 3Hz, H-8b)，3. 90 (3H, s, OCH3)，3. 89 (3H, S ，0邸3)，3. 69(lH，dd，J = 3. 9,9. 3Hz，H-5)，3. 37(lH，ddt，J = 4. 2,6. 9,9. 3Hz，H-l)。 口C-NMR(CD30D，150MHz) 5c:51.0(C-l)，85. l(C-2), 179. 7(C-4)，54. 4(C-5)，87. 2(C-6)，73 .8 (C-8)，132. 4 (C-r )，110. 6 (C-2'），149. 2 (C-3'），147. 4 (C-4'），116. 2 (C-5'），119. 5 (C-6 '），133.2(C-1" ),110. 7(C-2" ),149. 4(C-3" ),148. 2(C-4" ),116. 4(C-5" ),119. 8(C-6 ")，56. 4 (OCH3)，56. 5 (OCH3)。
[0015] 实施例2体外抗皿V实验
[0016] 应用化P G2的2. 2. 15细胞株（教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室， 上海），W每孔IOX IO5个细胞接种于24孔板，培养基为DMEM，生长液含10 %胎牛血清， 380y g/ml 0418,0.03%谷胺醜胺，青霉素、链霉素各IOOy g/ml，在5% C〇2赔箱中37°C培 养，48小时后，换成二甲基亚讽助溶的含药物的培养液，每种药物设3~5个浓度，每个浓度 设4个平行孔，继续培养9天（每3天换液一次），收集上清液用化ISA检测皿sAg及皿eAg 含量。同样条件下W不含药物的培养液上清液作为对照组。同时用上述细胞株，用MT法 测定药物的细胞毒性。阳性对照为拉米巧巧（3TC)。结果证实本发明所述化合物具有显著 的抗皿V活性，且有效浓度低，其对皿sAg的ICw值为36. 6 U g/ml，对皿eAg的ICw值为 126. 4 y g/ml，显著高于阳性对照拉米巧巧（表1)。
[0017] 表1. 4-丽基松脂素对皿sAg和皿eAg分泌的抑巧[J作用
[0020] 本发明中实验采用的试剂均为本领域公知技术，可市购。
[0018]
[0019]
【主权项】
1. 具有下述结构的化合物4-酮基松脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用途，2. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的化合物4-酮基松脂素听过下述方法 制备： 取山芝麻干燥地上部分，粉碎，用95 %乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液并浓缩 得浸膏，加水混悬，分别以等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取5次，合并萃取液并浓缩 至干，得乙酸乙酯萃取物； 将乙酸乙酯萃取部位经200-300目硅胶柱色谱分离，依次以二氯甲烷-甲醇50:1-0:1 梯度洗脱，得到11个流份（Fr. 1-11)，其中流份Fr. 3再经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇， 30:1,20:1，10:1,5:1,3:1，1:1)、MPLC (甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脱）和半制备 HPLC 纯化，分离得到化合物4-酮基松脂素。
【专利摘要】本发明属于医药领域，涉及一种木脂素类化合物在制备抗乙肝病毒药物中的用途。本发明从山芝麻属Helicteres植物山芝麻H.angustifolia中提取分离得到木脂素类化合物4-酮基松脂素并经试验证实其具有抗乙肝病毒活性；所述的化合物经与阳性对照拉米呋啶药理试验比较，结果显示其具有显著的抗乙肝病毒作用，对HBsAg的IC50值为36.6μg/ml，对HBeAg的IC50值为126.4μg/ml，显著高于阳性对照拉米呋啶，本发明的化合物可作为活性成分用于制备抗乙肝病毒的药物。
【IPC分类】A61P31/20, A61K31/34
【公开号】CN105663110
【申请号】
【发明人】陈道峰, 殷翔, 史训龙, 朱海燕, 卢燕
【申请人】复旦大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年11月18日