一种两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法及应用
【专利摘要】本发明属于化学及纳米材料领域，涉及银纳米粒子的制备，具体涉及一种两亲性聚乙二醇?木犀草素?银纳米粒子的制备方法及应用。首先制备两亲性聚乙二醇?木犀草素，然后以一定比例加入硝酸银溶液中，15~70℃反应0.5~24h后得到聚乙二醇?木犀草素?银纳米粒子。本方法制备的聚乙二醇?木犀草素?银纳米粒子粒径、形貌均一，分散性良好，且具有较强的抗菌活性。对金黄色葡萄球菌、β?内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和β?内酰胺酶大肠杆菌最小抑制浓度分别为10μg/mL、15μg/mL、5μg/mL和10μg/mL，在生物、制药催化等领域有良好应用前景。
【专利说明】
一种两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法及 应用
技术领域
[0001 ]本发明属于化学及纳米材料领域，涉及银纳米粒子的制备，具体涉及一种两亲性 聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 银纳米粒子因其表面效应、纳米尺度效应、催化性和抗菌活性在生物传感、细胞成 像、药物转载及癌症治疗方面具有广阔的应用前景。银纳米粒子一般通过化学还原的方法 制备，常用的还原剂有硼氢化钠、柠檬酸、抗坏血酸盐等。但是这些过量的还原剂会对环境 造成污染，且制备的银纳米粒子生物相容性较差。因此制备无污染、稳定性和生物相容性好 的银纳米粒子成为新的研究热点。
[0003] 木犀草素存在于多种药用植物和蔬菜水果中，具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒及 抗癌活性，其天然品已应用于临床治疗咳嗽、祛痰、消炎，并且有较好的疗效。为了增加木犀 草素的水溶性，我们对其结构进行修饰，首次制备了两亲性聚乙二醇-木犀草素，并且在"绿 色化学"的指导原则下制备了具有抗菌活性的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种具有抗菌活性的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒 子的制备方法及应用。以聚乙二醇-木犀草素为还原剂和稳定剂，在水溶液中将硝酸银还原 成银纳米粒子。
[0005] 为实现上述目的本发明采用以下技术方案：
[0006] -种具有抗菌活性的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法，步骤如 下：
[0007] (1)两亲性聚乙二醇-木犀草素的制备：
[0008] a.常温条件下，聚乙二醇经小极性溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液，然后缓慢加入 对甲苯磺酰氯，反应完全后，进行后处理，得到白色固体A;
[0009] b.把木犀草素溶解于大极性无水溶剂中，在60~100°C下，加入4倍于木犀草素质 量的弱碱，经后处理得到黄色固体B;
[0010] C.在10~30°C条件下，将黄色固体B溶于大极性溶剂中，然后加入强碱和白色固体 A进行反应，得到浅黄色固体C;
[0011] d.将浅黄色固体C溶解于甲醇中，制得浓度为lOg/mL的混合溶液，加入质量分数为 5 %的钯碳催化剂，得到聚乙二醇-木犀草素；
[0012] (2)聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备:在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶 液，磁力搅拌条件下，加入步骤（1)所得到的聚乙二醇-木犀草素溶液，在15~70°C下反应 0.5~24h，至溶液颜色由无色转变为棕黄色时，终止反应，离心洗涤得到棕黄色的聚乙二 醇-木犀草素-银纳米粒子。
[0013] 所述步骤（l)a中、步骤（l)b及步骤（l)c中后处理的具体操作为：用小极性溶剂萃 取，经硫酸镁干燥后，浓缩、冰浴降温至〇°C后，加乙醚沉淀、离心、洗涤并抽真空干燥;所述 小极性溶剂为氯仿或二氯甲烷。
[0014] 所述步骤（I)a中聚乙二醇:氢氧化钠:对甲苯磺酰氯的质量比为1: 2~4:1~3，聚 乙二醇为低分子量Mn彡5000,氢氧化钠溶液的物质的量浓度为20%~60%;所述步骤（l)b 中大极性无水溶剂为无水DMF或无水甲苯，弱碱为无水Na2CO3或无水K2CO 3;所述步骤（I)c 中，黄色固体B:强碱：白色固体A的质量比为：1:2~3:3~4，强碱为无水Cs2CO3或无水NaH。
[0015] 所述步骤⑵中混合溶液中聚乙二醇-木犀草素和AgNO3的质量比为0.5:1~3:1。
[0016] 一种具有抗菌活性的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的应用，所述聚乙二 醇-木犀草素-银纳米粒子作为抗菌消炎药，对以金黄色葡萄球菌、β-内酰胺酶阳性金黄色 葡萄球菌、大肠杆菌和β-内酰胺酶大肠杆菌的最小抑制浓度分别为10yg/mL、15yg/mL、5yg/ mL和10yg/mL。
[0017] 本发明的有益效果在于:本发明方法简单，操作方便，反应时间短，制备的聚乙二 醇-木犀草素-银纳米粒子呈近球形，平均粒径为25nm，在水溶液中具有很好的稳定性和分 散性。所制得的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子可用于抗菌、抗炎等方面。
【附图说明】
[0018] 图1为聚乙二醇-木犀草素的分子结构图。
[0019]图2为聚乙二醇-木犀草素的核磁共振氢谱。
[0020]图3为聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的紫外吸收光谱。
[0021]图4为聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子扫描电镜(A)、透射电镜(B和C)和电子衍射 图⑶。
[0022]图5为聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的XRD图。
【具体实施方式】
[0023]实施例1:聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备：
[0024] 1、聚乙二醇-木犀草素的制备
[0025] a.白色固体A的合成：在IOOmL的圆底烧瓶中加入l.OOg mPEG(Mn=1900)用15mL CH2Cl2溶解后，加入30 %的NaOH溶液IOmL，磁力搅拌下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加对甲苯磺 酰氯（1.50g溶于15mL CH2Cl2)，滴加完全后，室温反应lh。将反应液转移至分液漏斗中，加入 CH2Cl2 50mL，用水(3 X IOOmL)洗涤有机相，加无水MgSO4干燥，过滤，有机相浓缩约至总体积 的5%，冰浴降温至0°C后，加无水乙醚20mL于-20°C冷冻24h，高速离心，沉淀用无水乙醚洗 涤3次，抽真空干燥，得到0.8790g白色固体A即mPEGwoo-OTs (3-1900)，产率为81.4 %。
[0026] b .浅黄色固体B的合成：在50mL的SchIenk瓶中分别加入100 . Omg木犀草素， 195.Omg K2CO3和10.Omg KI，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)，室温下反应0.5h后，加入0.3mL苄溴，升温至80°C反应5h。降至室温，加水淬灭反应， 将反应液转移至分液漏斗中，用二氯甲烷(CH 2Cl2，3 X 50mL)萃取，合并有机相，用水（3 X IOOmL)洗涤，再加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得到粗品。将粗品进行柱层析（淋洗液为 CH2Cl2),分离得到B(浅黄色固体粉末150.2mg，产率76.4%)。
[0027] c .浅黄色固体C的合成：在50mL的Schl enk瓶中分别加入B (146.4mg)，无水 Cs2C03437.2mg，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水DMF溶解，室温搅拌反应0.5h后，加 入A溶液(534.3mg溶于5mL无水DMF)，室温反应20h后升至80°C反应IOh。降至室温，加水淬灭 反应，用CH 2Cl2(3 X 50mL)萃取，合并有机相，用水(3 X IOOmL)洗涤，加无水MgSO4干燥，过滤， 浓缩得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液:先用CH 2Cl2,后用CH3OH),分离得到浅黄色固体C (浅黄色固体粉末575 · 6mg，产率90 % )。
[0028] d.聚乙二醇-木犀草素的合成:在50mL圆底烧瓶中加入浅黄色固体C(570.Omg)，用 50mL无水CH3OH溶解后，加入186.9mg 5%钯碳催化剂，冰浴0°C下反应Ih后，升至室温继续 反应2011。去除钯碳催化剂，反应液用012(：1 2(3\5〇1^)萃取，合并有机相，用水(3\10〇1^)洗 涤，加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液为CH 3OH)，分离得到聚 乙二醇-木犀草素(浅黄色固体粉末364. Omg，产率72%)。
[0029] 2、聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备
[0030]在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶液，磁力搅拌下加入步骤d所得到的聚乙二 醇-木犀草素，二者的物质的量比为0.5:1，在70°C条件下，反应0.5h，反应至溶液颜色由无 色转变为棕黄色时，终止反应，离心洗涤得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。
[0031]实施例2:聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备：
[0032] 1、聚乙二醇-木犀草素的制备
[0033] a.白色固体A的合成：在IOOmL的圆底烧瓶中加入l.OOg mPEG(Mn=1900)用15mL CH2Cl2溶解后，加入20 %的NaOH溶液IOmL，磁力搅拌下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加对甲苯磺 酰氯（l.OOg溶于15mL CH2Cl2)，滴加完全后，室温反应lh。将反应液转移至分液漏斗中，加入 CH2Cl2 50mL，用水(3 X IOOmL)洗涤有机相，加无水MgSO4干燥，过滤，有机相浓缩约至总体积 的5%，冰浴降温至0°C后，加无水乙醚20mL于-20°C冷冻24h，高速离心，沉淀用无水乙醚洗 涤3次，抽真空干燥，得到0.8690g白色固体A即HiPEG 19qq-OTs (3-1900 )，产率为81.2 %。
[0034] b .浅黄色固体B的合成：在50mL的SchIenk瓶中分别加入100 . Omg木犀草素， 195.Omg K2CO3和10.Omg KI，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)，室温下反应0.5h后，加入0.3mL苄溴，升温至80°C反应5h。降至室温，加水淬灭反应， 将反应液转移至分液漏斗中，用二氯甲烷(CH 2Cl2，3 X 50mL)萃取，合并有机相，用水（3 X IOOmL)洗涤，再加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得到粗品。将粗品进行柱层析（淋洗液为 CH2Cl2)，分离得到B(浅黄色固体粉末149 · 2mg，产率76 · 3 % )。
[0035] c .浅黄色固体C的合成：在50mL的Schl enk瓶中分别加入B (146.4mg)，无水 Cs2C03439.2mg，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水DMF溶解，室温搅拌反应0.5h后，加 入A溶液(585.6mg溶于5mL无水DMF)，室温反应20h后升至80°C反应IOh。降至室温，加水淬灭 反应，用CH 2Cl2(3 X 50mL)萃取，合并有机相，用水(3 X IOOmL)洗涤，加无水MgSO4干燥，过滤， 浓缩得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液:先用CH 2Cl2,后用CH3OH),分离得到浅黄色固体C (浅黄色固体粉末622 · 2mg，产率85 % )。
[0036] d.聚乙二醇-木犀草素的合成:在50mL圆底烧瓶中加入浅黄色固体C(570.0mg)，用 50mL无水CH3OH溶解后，加入186.9mg 5%的钯碳催化剂，冰浴0°C下反应Ih后，升至室温继 续反应2011。去除钯碳催化剂，反应液用012(：1 2(3\5〇1^)萃取，合并有机相，用水(3\10〇1^) 洗涤，加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液为CH 3OH)，分离得到 聚乙二醇-木犀草素(浅黄色固体粉末364. Omg，产率72 % )。
[0037] 2、聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备
[0038]在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶液，磁力搅拌下加入步骤d所得到的聚乙二 醇-木犀草素，二者的物质的量比为1.7:1，在43°C条件下，反应12h，反应至溶液颜色由无色 转变为棕黄色时，终止反应，离心洗涤得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。 [0039]实施例3:聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备：
[0040] a.白色固体A的合成：在IOOmL的圆底烧瓶中加入l.OOg mPEG(Mn=1900)用15mL CH2Cl2溶解后，加入60 %的NaOH溶液6.7mL，磁力搅拌下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加对甲苯磺 酰氯(3. Og溶于15mL CH2Cl2)，滴加完全后，室温反应Ih。将反应液转移至分液漏斗中，加入 CH2Cl2 50mL，用水(3 X IOOmL)洗涤有机相，加无水MgSO4干燥，过滤，有机相浓缩约至总体积 的5%，冰浴降温至0°C后，加无水乙醚20mL于-20°C冷冻24h，高速离心，沉淀用无水乙醚洗 涤3次，抽真空干燥，得到1.4790g白色固体A即mPEGwoo-OTs (3-1900)，产率为81.4 %。
[0041 ] b .浅黄色固体B的合成：在50mL的SchIenk瓶中分别加入100 . Omg木犀草素， 195.Omg K2CO3和10.Omg KI，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)，室温下反应0.5h后，加入0.3mL苄溴，升温至80°C反应5h。降至室温，加水淬灭反应， 将反应液转移至分液漏斗中，用二氯甲烷(CH 2Cl2，3 X 50mL)萃取，合并有机相，用水（3 X IOOmL)洗涤，再加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得到粗品。将粗品进行柱层析（淋洗液为 CH2Cl2),分离得到B(浅黄色固体粉末150.2mg，产率76.4%)。
[0042](：.浅黄色固体(]的合成：在5〇1111^的3(31116111<:瓶中分别加入13(146.411^)，无水〇82〇〇3 292.8mg，抽真空干燥，氮气流保护下加入5mL无水DMF溶解，室温搅拌反应0.5h后，加入A溶 液(439.2mg溶于5mL无水DMF)，室温反应20h后升至80°C反应10h。降至室温，加水淬灭反应， 用CH 2Cl2(3X50mL)萃取，合并有机相，用水(3\10〇1^)洗涤，加无水1^〇4干燥，过滤，浓缩 得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液:先用CH 2Cl2,后用CH3OH),分离得到浅黄色固体C(浅黄 色固体粉末495.6mg，产率88 % )。
[0043] d.聚乙二醇-木犀草素的合成:在50mL圆底烧瓶中加入浅黄色固体C(570.0mg)，用 50mL无水CH3OH溶解后，加入186.9mg 5%的钯碳催化剂，冰浴0°C下反应Ih后，升至室温继 续反应2011。去除钯碳催化剂，反应液用012(：1 2(3\5〇1^)萃取，合并有机相，用水(3\10〇1^) 洗涤，加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩得粗品。将粗品进行柱层析(淋洗液为CH 3OH)，分离得到 聚乙二醇-木犀草素(浅黄色固体粉末364. Omg，产率72 % )。
[0044] 2、聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备
[0045]在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶液，磁力搅拌下加入步骤d所得到的聚乙二 醇-木犀草素，二者的物质的量比为3:1，在15°C条件下，反应24h，反应至溶液颜色由无色转 变为棕黄色时，终止反应，离心洗涤得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。
[0046] 实施例4
[0047] 1、聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备
[0048]步骤1:聚乙二醇-木犀草素的制备
[0049]首先，聚乙二醇(Mn= 1900)用二氯甲烷溶解后，加入氢氧化钠溶液，搅拌下缓慢加 入对甲苯磺酰氯，反应完全后用二氯甲烷萃取，硫酸镁干燥后，浓缩，冰浴降温至0 °c后，加 乙醚沉淀，离心，沉淀用乙醚洗涤，抽真空干燥，得到白色固体A。然后，木犀草素溶解于无水 DMF中，在弱碱K2CO3作用下，利用苄溴于60~100°C选择性对木犀草素分子中β'-ΟΗ,ν-ΟΗ， 7-0Η进行苄基化保护，反应液用二氯甲烷萃取，合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，浓缩，分 离得到黄色固体Β。接着，黄色固体B溶解于无水DMF中，在强碱Cs 2CO3作用下和白色固体A进 行反应，反应液用二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后，浓缩，冰浴降温至0 °C后，加乙醚沉淀、 离心，乙醚洗涤，抽真空干燥，得到浅黄色固体C。最后，浅黄色固体C溶解于甲醇中，在5%的 钯碳催化剂作用下脱去苄基保护基，离心去除钯碳催化剂，浓缩得到聚乙二醇-木犀草素。 [0050]步骤2:聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备
[0051 ]在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶液，磁力搅拌下加入步骤1所得到的聚乙二 醇-木犀草素，二者的物质的量比为0.5:1~3:1，反应至溶液颜色由无色转变为棕黄色时， 终止反应，离心洗涤得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。
[0052]步骤3:抗菌活性测试
[0053]打孔法测得聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子对以金黄色葡萄球菌、β_内酰胺酶阳 性金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和β-内酰胺酶大肠杆菌的抑制浓度如表1所示，四种菌的最小 抑制浓度分别为 I Oyg/mL、15yg/mL、5yg/mL 和 I Oyg/mL。
[0054] 表1在不同浓度下聚乙二醇-太犀草素-银纳米粒子对不同细菌的抑菌圈官径
[0056] 2、制备得到的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的表征
[0057] 按照实施例制备得到的聚乙二醇-木犀草素为浅黄色固体，结构式如图1所示，在 1H MMR(400MHz，DMS0-d6)图2中，Sl〇.677(broad，lH)，9.683(broad，lH)，9.474(s，lH)， 7.312~7.300(m，2H)，6.858(d，2H，J = 8.8Hz)，6.489(d，lH，J=1.6Hz)，6.374~6.359(m, 2H)，4· 089(t，2H, J = 4· 4Hz)，3 · 803~3 · 233(mPEGi9〇〇chain)。
[0058] 按照I中制备得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。图3显示，制备的聚 乙二醇-木犀草素-银纳米粒子最大吸收波长为440nm，是典型的银纳米粒子的SPR吸收峰。
[0059] 将制备的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子在扫描、透射电子显微镜下观察，可以 看到纳米粒子为球形，粒径在25nm左右，且较为均匀（图4A、B、C)。
[0060] 图4D是聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的电子衍射图，它是由同心圆环组成，环 形花样主要是由大量细小的晶体颗粒产生，由此说明银纳米粒为多晶结构。
[0061 ] 从图5 XRD中可以看出，聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子在38.25°、44.40°、 64.42°、77.54°和81.68°处出现特征衍射峰，分别对应于面心立方银的（111 )、（ 200)、 (220)、（311)和(222)晶面。而35°以前出现的峰主要是mPEG的衍射峰，说明银纳米粒表面结 合有聚乙二醇-木犀草素分子。
[0062]如图3所示，浓度为4X 10-4mol · L-1的聚乙二醇-木犀草素水溶液的UV-vis吸收曲 线;反应后聚乙二醇-木犀草素 -银纳米粒子的UV-vis吸收曲线。比较反应前后溶液在354nm 处的吸光度值的变化，确定反应溶液中大约有89.9 %的聚乙二醇-木犀草素结合到聚乙二 醇-木犀草素-银纳米粒子的表面。然后通过ICP检测出聚乙二醇-木犀草素 -银纳米粒子中 Ag的含量为6.65 %。
【主权项】
1. 一种两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法，其特征在于:步骤如下： 两亲性聚乙二醇-木犀草素的制备： a. 常温条件下，聚乙二醇经小极性溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液，然后缓慢加入对 甲苯磺酰氯，反应完全后，经后处理，得到白色固体A; b. 把木犀草素溶解于大极性无水溶剂中，在60~IOOtC下，加入2倍于木犀草素质量的 弱碱，经后处理得到黄色固体B; c .在10~30°C条件下，将黄色固体B溶于大极性溶剂中，然后加入强碱和白色固体A进 行反应，经后处理，得到浅黄色固体C; d.将浅黄色固体C溶解于甲醇中，制得浓度为lOg/mL的混合溶液，加入质量分数为5% 的钯碳催化剂，得到聚乙二醇-木犀草素； (2 )聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备:在干燥洁净的锥形瓶中加入AgNO3溶液，磁 力搅拌条件下，加入步骤(1)所得到的聚乙二醇-木犀草素溶液，在15~70°C下反应0.5~24h， 离心洗涤得到棕黄色的聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子。2. 如权利要求1所述的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法，其特征在 于:所述步骤（l)a中、步骤（l)b及步骤（I) c中后处理的具体操作为：用小极性溶剂萃取，经 硫酸镁干燥后，浓缩、冰浴降温至〇°C后，加乙醚沉淀、离心、洗涤并抽真空干燥;所述小极性 溶剂为氯仿或二氯甲烷。3. 如权利要求1所述的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法，其特征在 于:所述步骤(l)a中聚乙二醇:氢氧化钠:对甲苯磺酰氯的质量比为1:2~4:1~3,聚乙二醇为 低分子量Mn < 5000，氢氧化钠溶液的物质的量浓度为20%~60%;所述步骤（I) b中大极性无水 溶剂为无水DMF或无水甲苯，弱碱为无水Na2CO3或无水K 2CO3;所述步骤（I )c中，黄色固体B: 强碱：白色固体A的质量比为：1:2~3:3~4，强碱为无水Cs2CO3或无水NaH。4. 如权利要求1所述的两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的制备方法，其特征在 于:所述步骤(2)中混合溶液中聚乙二醇-木犀草素和AgNO 3的质量比为0.5:1~3:1。5. -种两亲性聚乙二醇-木犀草素-银纳米粒子的应用，其特征在于:所述聚乙二醇-木 犀草素-银纳米粒子作为抗菌消炎药，对以金黄色葡萄球菌、β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球 菌、大肠杆菌和β -内酰胺酶大肠杆菌的最小抑制浓度分别为10yg/mL、15yg/mL、5yg/mL和10 yg/mL〇
【文档编号】A61K9/14GK105943556SQ201610333113
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】庆伟霞, 刘绣华, 王勇, 李明静
【申请人】河南大学