专利名称：杀虫真菌分生孢子液体保存方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种杀虫真菌分生孢子的液体保存方法。
应用昆虫病原真菌控制害虫的研究已取得了长足的进展。近年来，真菌杀虫剂产品发展迅速，防治对象包括温室害虫、沙漠蝗虫、水稻叶蝉以及卫生害虫，如蟑螂、白蚁、苍蝇等，市场规模日益扩大，产生了良好的经济和社会效益。
在种类丰富的昆虫病原真菌中，丝孢类真菌如白僵菌、绿僵菌、拟青霉、轮枝菌等是广泛用于生物防治的虫生真菌，这些真菌的生活史包括营养生长和无性繁殖产生分生孢子两个阶段。因为只有无性繁殖体分生孢子才是侵染昆虫有效的侵染源，所以分生孢子是真菌杀虫剂的首选材料。理想的真菌制剂应该是分生孢子的均匀分散系，同时要求有很好的贮存稳定性。
但是，许多重要的杀虫真菌的分生孢子是疏水性的，因此分生孢子不可能在水中形成均匀的分散系。大多数表面活性剂、湿润剂以及相关物质可使许多惰性颗粒材料形成均匀分散系，然而，表面活性物质与真菌分生孢子不相容，或被分生孢子代谢而萌发，生长成菌丝团，或对分生孢子有害或有抑制作用，从而使其杀虫的作用减弱或丧失。
由于上述原因，我国目前用于生物防治的真菌制剂仍停留在随配随用的的“桶配剂型”阶段，使用麻烦，且无法形成规模效应和进行商业化生产。欧美国家虽有一些真菌杀虫剂，但其稳定性仍然没有得到有效地解决。
本发明的目的在于提供一种杀虫真菌分生孢子液体保存方法。该方法可使真菌分生孢子分散均匀，并使其在室温(26℃)下贮存，保持活力(萌发率＞85％)达3个月以上。
本发明依次通过以下步骤实现(1)杀虫真菌分生孢子的制备用培养基平板方法接种杀虫真菌，培养出新鲜的分生孢子，或液体发酵，或固体基物发酵，并经分离提纯出高孢粉，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将分散剂1或分散剂2或分散剂1和分散剂2配成水溶液，使分散剂1浓度为0.01～1％(V/V)，分散剂2浓度为0.001～0.01％(W/V)，然后将杀虫真菌分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
分散剂1为月桂氮卓酮，化学名为1-十二烷基-六氢-2H-氮杂卓-2-酮，分散剂2为Manoxol OT，其分子式为C20H37NaO7S。
上述发明中，杀虫真菌可以是白僵菌、绿僵菌、拟青霉、轮枝菌等；步骤(2)还可向制剂中加入与杀虫真菌分生孢子生物学相容的助剂，如其它分散剂、增效剂、抗氧化剂、紫外保护剂等。
该方法使杀虫真菌分生孢子在室温(26℃)下，贮存3个月以上，活孢率仍达85％以上。分生孢子活力检测用平板法。
分散剂1在孢子活力稳定性上作用明显优于分散剂2，但后者的分散性要高于前者，混合二者，虽然在分生孢子活力稳定性方面与单用分散剂1效果相当，但对分生孢子的分散性却高于单用分散剂1。
本发明的优点在于，该方法能使杀虫真菌分生孢子在分散剂的水溶液中均匀分散，并使其在室温下保持高活力达三个月以上，这就可以克服以往随配随用的“桶配剂型”所带来的使用麻烦，且无法形成规模效应和进行商业化生产等问题，使杀虫真菌能够更加广泛地使用，从而更好地为农业生产服务。
实施例1(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮配成水溶液，使其浓度为0.01％(V/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例2(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将Manoxol OT配成水溶液，使其浓度为0.001％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例3(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮和Manoxol OT配成水溶液，使其浓度分别为0.1％(V/V)和0.005％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例4(1)杀虫真菌分生孢子的制备用PDA培养基平板接种蜡介轮枝菌(Verticillium lecanni)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮配成水溶液，使其浓度为1％(V/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例5(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDA培养基平板接种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮配成水溶液，使其浓度为0.05％(V/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例6(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将Manoxol OT配成水溶液，使其浓度为0.01％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例7(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDA培养基平板接种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将Manoxol OT配成水溶液，使其浓度为0.005％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例8(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮和Manoxol OT配成水溶液，使其浓度分别为0.05％(V/V)和0.01％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例9(1)杀虫真菌分生孢子的制备用SDAY培养基平板接种金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮和Manoxol OT配成水溶液，使其浓度分别为0.01％(V/V)和0.005％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
实施例10(1)杀虫真菌分生孢子的制备用PDA培养基平板接种蜡介轮枝菌(Verticillium Lecanni)，28℃恒温培养12天，用灭菌毛笔轻轻刷下分生孢子，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将月桂氮卓酮和Manoxol OT配成水溶液，使其浓度分别为1％(V/V)和0.001％(W/V)。然后将分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。
权利要求
1.一种杀虫真菌分生孢子液体保存方法，其特征在于依次包括下列步骤(1)杀虫真菌分生孢子的制备用培养基平板方法接种杀虫真菌，培养出新鲜的分生孢子，或液体发酵，或固体基物发酵，并经分离提纯出高孢粉，备用；(2)杀虫真菌分生孢子分散系的配制先用蒸馏水将分散剂1或分散剂2或分散剂1和分散剂2配成水溶液，使分散剂1浓度为0.01～1％(V/V)，分散剂2浓度为0.001～0.01％(W/V)，然后将杀虫真菌分生孢子加入，搅拌均匀至饱和，使其浓度达109mL-1，装瓶室温保存。分散剂1为月桂氮卓酮，化学名为1-十二烷基-六氢-2H-氮杂卓-2-酮，分散剂2为Manoxol OT，其分子式为C20H37NaO7S。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，杀虫真菌可以是白僵菌、绿僵菌、拟青霉、轮枝菌等。
全文摘要
一种杀虫真菌分生孢子液体保存方法,通过将一定浓度的月桂氮卓酮或Manoxol OT等分散剂单用或混合使用,使杀虫真菌分生孢子在分散剂的水溶液中均匀分散,并使其在室温下保持高活力达三个月以上,这就可以克服以往随配随用的“桶配剂型”所带来的使用麻烦,且无法形成规模效应和进行商业化生产等问题,使杀虫真菌能够更加广泛地使用,从而更好地为农业生产服务。
文档编号A01N63/00GK1329829SQ01124159
公开日2002年1月9日 申请日期2001年8月20日 优先权日2001年8月20日
发明者张永军, 裴炎, 杨星勇, 方卫国 申请人:西南农业大学