专利名称：盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法。
现有技术未见有盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法的报道。
本发明提供了一种盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法，该方法成功地实现了盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽的诱导，解决了愈伤组织分化苗容易变异以及盾叶薯蓣无菌短枝生根难的问题，并提高了移栽成活率。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法，包括盾叶薯蓣无菌克隆珠芽诱导、生根、移栽步骤，取盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体，清洗后，在超菌台上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞灭菌5-8min，最后用无菌水冲洗数次，切成带单个腋芽或顶芽的小节，初代培养基为MS无激素培养基PH5.8，在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的培养条件下选取培养基6-BA0.2mg/l＋NAA0.1mg/l＋IAA0.1mg/l＋PH5.8进行株芽诱导，然后转入IAA0.5mg/l＋NAA0.5mg/l的MS培养基中进行生根培养，珠芽生根20天后，把温度降到23＋1℃培养1周，洗去苗根部的培养基，用0.1％的杀菌剂浸泡5min，栽于河沙或河沙∶腐质土＝1∶1的混合土中，保持基质湿度80％左右，外加遮光网和塑料膜覆盖。
与现有技术相比，本发明存在的优益效果为1、用生物技术，在无菌条件下诱导盾叶薯蓣产生珠芽，并筛选出珠芽发生率为86％、生根率为100％的培养基配方。经查新，本发明的盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法尚未见报道。
2、本发明盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导的成功，不但解决了愈伤组织分化苗容易变异的问题，同时还克服了盾叶薯蓣无菌短枝生根的难题，并提高了移栽成活率。
下面结合本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例11、材料与方法取盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体，用肥皂和自来水清洗后，在超菌台上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞灭菌5~8min，最后用无菌水冲洗数次，切成带单个腋芽或顶芽的小节。初代培养基为MS无激素培养基PH5.8)。在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的培养条件下进行培养基种类、激素和激素浓度对盾叶薯蓣生长、株芽诱导及株芽生根的影响。2.1不同培养基对盾叶薯蓣生长的影响5种培养基的激素均为6-BA0.2mg/l＋NAA0.01＋PH5.8，试验结果(表1)表明，MS培养基较适宜盾叶薯蓣的生长。
表1小同培养基对盾叶薯蓣生长的影响(接种60d的统计结果)
2.2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽诱导的影响试验结果表明(表2)，珠芽发生与激素有密切关系，诱导数量的多少与6-BA有关，珠芽大小与生长素有关。最佳的激素组合为6-BA0.2＋IAA0.1＋NAA0.1。转接60d后珠芽诱导率达86％，珠芽直径大小0.17cm。珠芽产生的部位在节上，不影响丛芽和其它侧芽的生长，均可作为下一代的繁殖材料。2.3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽生根的影响从表3可以看出，激素种类及其不同的浓度对盾叶薯蓣珠芽生根影响不显著，各个试验的生根率都能达到90％以上。因此，盾叶薯蓣珠芽的生根比较容易，但在IAA0.5＋NAA0.5的MS培养基中能达到最好的生根效果(100％)。
表2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽诱导的影响(接种60d的统计数)
表3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽生根的影响(接种30d的统计数)
2.4珠芽生根苗移栽珠芽生根20d后，把温度降到23＋1℃培养1周左右，取出苗用自来水洗去根部的培养基，用0.1％的多菌灵浸泡5min，栽于河沙或河沙腐质土＝1∶1的混合土中。保持基质湿度80％左右，外加遮光网和塑料膜覆盖，一周后揭膜，30d后的成活率达90％以上。盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导的成功，不但解决了愈伤组织分化苗容易变异的问题，同时还克服了盾叶薯蓣无菌短枝生根的难题，并提高了移栽成活率。
权利要求
1.盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法，包括盾叶薯蓣无菌克隆珠芽诱导、生根、移栽步骤，其特征是取盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体，清洗后，在超菌台上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞灭菌5-8min，最后用无菌水冲洗数次，切成带单个腋芽或顶芽的小节，初代培养基为MS无激素培养基PH5.8，在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的培养条件下选取培养基6-BA0.2mg/l＋NAA0.1mg/l＋IAA0.1mg/l＋PH5.8进行株芽诱导，然后转入IAA0.5mg/l＋NAA0.5mg/l的MS培养基中进行生根培养，珠芽生根20天后，把温度降到23＋1℃培养1周，洗去苗根部的培养基，用0.1％的杀菌剂浸泡5min，栽于河沙或河沙∶腐质土＝1∶1的混合土中，保持基质湿度80％左右，外加遮光网和塑料膜覆盖。
全文摘要
本发明属于生物技术领域,提供了一种盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法,该方法成功地实现了盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽的诱导,解决了愈伤组织分化苗容易变异以及盾叶薯蓣无菌短枝生根难的问题,并提高了移栽成活率。
文档编号A01H4/00GK1335058SQ0112880
公开日2002年2月13日 申请日期2001年8月29日 优先权日2001年8月29日
发明者罗桂芬, 胡虹, 吕春朝, 李树云, 王 华 申请人:中国科学院昆明植物研究所