专利名称：树兰的无菌播种和组织培养方法
技术领域：
本发明涉及树兰的无菌播种和组织培养方法。
背景技术：
树兰属(Epidendrum)又名柱瓣兰属，是兰科中最大的属之一，本属植物全球约有1000多种，附生或地生，多产于热带美洲，根据品种的不同习性可在高温、中温或低温温室中栽培。有些种类有休眠期，有些无明显的休眠期。它的茎的变化也较大，有的具假鳞茎，有的具芦苇状的直立茎，假鳞茎的顶端有少数叶。树兰属植物的花茎生于茎顶端，花有数朵到多朵，花大型或小型，萼片和花瓣均甚细窄，但唇瓣肥大，基部深凹，蕊柱甚发达，故名柱瓣兰属。树兰属植物的花色繁多，其中许多种类具有很高的观赏价值。树兰(Epidendrum radians)是较具代表性的种类。
树兰(Epidendrum radians)为附生兰，原产墨西哥，茎细长圆柱形而多分枝，其上着生多数灰白色的气生根，叶片细长，花鲜红色，十几朵花排成总状花序生于一长花葶之顶，花期春夏至晚秋，花期长，具有很高的观赏价值。树兰的繁殖可采用扦插和分株，但繁殖速度慢，而树兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发。
目前，国内外未有树兰的无菌播种和组织培养及大规模生产和专利申请的报道。
发明内容
本发明的目的在于解决树兰种子因胚发育不完全，在自然状态下难以萌发的问题，开发一种可大规模繁殖树兰种苗的方法。
本发明采用人工营养液利用无菌播种的方法获得大量试管苗，并利用无菌实生苗的茎尖或茎节进行丛生芽的增殖并通过生根培养形成完整植株，实现了本发明的目的。
本发明的技术特征在于，包括下列步骤(1)材料选择选取生长健壮的母株开花时进行人工授粉，授粉110-130天后的果实作为外植体；(2)无菌播种用70％-80％的酒精浸泡20-40秒后置于8％-15％的次氯酸钠溶液中消毒10-30分钟，无菌水冲洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚均匀撒播接种到培养基中，所述培养基每升中含有的椰子水100毫升，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为N6；(3)组织培养利用上述步骤生长的无菌实生苗的茎尖或茎节在培养基中形成丛生芽，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为MS，在培养基中继代增殖，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖30克，其余成分为MS，丛生芽在生根时以培养基培养形成完整植株，所述的培养基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，琼脂7克，蔗糖20克，其余的成分为1/2MS；(4)试管苗移栽当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗7-10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入体积比为1∶1的泥炭和粗椰壳的混合基质中。
在上述所有步骤中所述的培养基pH5.4-5.6，培养温度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
在上述所有步骤的培养基中，加入琼脂可固化培养基。
在所述的无菌播种的步骤中，所述的椰子水是从新鲜的椰子中取出的椰子水经多层纱布过滤所得。所述的N6为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看谭文澄、戴策刚主编，《观赏植物组织培养技术》，北京中国林业出版社，1991。
在所述的无菌播种的步骤中，一般一个果能播3-5瓶，20-40天左右胚萌发，55-65天左右形成完整植株；当培养基中无菌实生菌太密而实生苗较小时，可在相同的培养基上培养壮苗。
在所述的组织培养的步骤中，所述的香蕉汁是由香蕉去皮后用榨汁机打碎而成。所述的1/2MS是将MS中的大量元素和微量元素减半，其它成分不变而形成的培养基，所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看谭文澄、戴策刚主编，《观赏植物组织培养技术》，北京中国林业出版社，1991。
在所述的试管苗移栽的步骤中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90％以上。
本发明的最佳的实验条件和培养基配方见具体实施方式
。
本发明具有如下优点(1)增值倍数高丛生芽的增值可达3-5倍；(2)移栽的成活率高成活率可达90％以上；(3)设备简单只需要简单的植物组织培养设备即可进行；(4)出苗快，稳定性高，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好；(5)可作为树兰属其它种、属内或与其它属间杂种的无菌播种和组织培养的方法。
具体实施例方式
实施例1树兰的无菌播种和组织培养繁殖1.选取生长健壮的母株开花时进行人工授粉，授粉120天后取果实用作外植体；2.用75％的酒精浸泡30秒后置于10％的次氯酸钠溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚均匀撒播接种到培养基中，所述培养基每升中含有的椰子水100毫升，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为N6，一个果播了4瓶，30天胚萌发，60天形成完整植株；说明所述的椰子水是从新鲜的椰子中取出的椰子水经多层纱布过滤所得。所述的培养基pH5.5，培养温度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
3.利用上述步骤生长的无菌实生苗的茎尖或茎节在培养基中形成丛生芽，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为MS，在培养基中继代增殖5倍，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖30克，其余成分为MS，丛生芽在生根时以培养基培养形成完整植株，所述的培养基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，琼脂7克，蔗糖20克，其余的成分为1/2MS；说明所述的香蕉汁是由香蕉去皮后用榨汁机打碎而成的。所述的培养基pH5.5，培养温度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
4.试管苗移栽当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入体积比为1∶1的泥炭和粗椰壳的混合基质中。
5.结果移植的成活率为95％。
权利要求
1.一种树兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于包括4个步骤(1)材料选择授粉110-130天后的果实作为外植体；(2)无菌播种用70％-80％的酒精浸泡20-40秒后置于8％-15％的次氯酸钠溶液中消毒10-30分钟，无菌水冲洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚均匀撒播接种到培养基中，所述培养基每升中含有的椰子水100毫升，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为N6；(3)组织培养利用上述步骤生长的无菌实生苗的茎尖或茎节在培养基中形成丛生芽，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖20克，其余成分为MS，在培养基中继代增殖，所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克，琼脂7克，蔗糖30克，其余成分为MS，丛生芽在生根时以培养基培养形成完整植株，所述的培养基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，琼脂7克，蔗糖20克，其余的成分为1/2MS；(4)试管苗移栽当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗7-10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入体积比为1∶1的泥炭和粗椰壳的混合基质中；在上述所有步骤中所述的培养基pH5.4-5.6，培养温度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
2.根据权利要求1所述的一种树兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于(1)所述的材料选择中，选取授粉120天后的果实作为外植体；(2)在所述的无菌播种的步骤中，用75％的酒精浸泡30秒后置于10％的次氯酸钠溶液中消毒20分钟；(3)在所述的试管苗移栽的步骤中，当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗10天。
全文摘要
本发明涉及树兰(Epidendrum radians)的无菌播种和组织培养方法。其特征在于采用人工营养液利用无菌播种的方法获得大量试管苗，并利用无菌实生苗的茎尖或茎节进行丛生芽的增殖，再通过生根培养形成完整植株。本发明具有投入少，产出高的特点，能成功地进行树兰种苗的无菌播种和组织培养快速繁殖，出苗快，稳定性高，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好，并可为树兰属其它种、属内或与其它属间杂种的无菌播种和组织培养提供方法。
文档编号A01H4/00GK1535571SQ03114178
公开日2004年10月13日 申请日期2003年4月10日 优先权日2003年4月10日
发明者曾宋君, 段俊, 黄向力 申请人:中国科学院华南植物研究所