专利名称：高效引发稻曲病的接种方法
技术领域：
本发明涉及一种菌种的制备接种方法，尤其是一种引发稻曲病的接种方法，属于农业技术领域。
据检索，申请号为97106542.X、申请日为1997.08.01、名称为《增效井岗霉素组合物》的发明揭示一种防治水稻、小麦纹枯病和水稻稻曲病的增效井岗霉，其有效成分为井岗霉素和新菌株增效菌SD#-[23]。此类研究虽然提出了一些防治稻曲病的措施，但并未将关注点放在探索引发稻曲病的接种技术、进而对稻曲病进行深层次的研究上。
据申请人了解，至今对稻曲病菌与寄主相互作用的研究，多限于自然发病的田间观察和调查(Bhagat AP.Field reaction ofrice genotypes to Ustilaginoidea virens.Journal of AppliedBiology.1993，31-2，100-101；Cartwright RD；Lee FN；ParsonsCE；etal.Monitoring of rice diseases and on-farm evaluationof rice varieties in Arkansas.Research Series，ArkansasAgricultural Experiment Station.1999，No.468，148-156，)对病原菌的侵染条件，致病过程，寄主的抗病机制及抗病育种等深层次的研究却少有报道。其重要原因是稻曲病的接种技术未解决，正常条件下人工接种稻曲病发病率低，有关的报道接种发病率只有30％。而对稻曲病深层次研究又是综合控害的重要基础，因此需要探索研究高效引发稻曲病的接种技术。
为了达到以上目的，申请人从以下各方面进行了有益的试验一、不同接种体对发病率的影响①厚垣孢子液用清水振荡洗脱稻曲球表面的厚垣孢子，调至100×视野下的孢子数(number of spores in a field 100×下称NSF)为160；②薄壁分生孢子液取振荡培养液用纱布过滤，将只含孢子的过滤液作4倍差稀释成NSF为192，48，12，3；③菌丝碎片-孢子液(mixture of hyphae-fragment and conidia下称MHC液)将振荡培养5-10d的培养液倒入匀浆机，高速匀浆打碎菌丝，形成菌丝碎片-薄壁分生孢子混合液，其中NSF为200；在孕穗期傍晚接种品种粤优938。结果表明，厚垣孢子接种引起的发病率为0，薄壁分生孢子可引起发病，孢子浓度越高，病情越重，接种MHC液的病情最严重，发病率可高达98.28％，病情指数达71.22(详见表1)。二、不同水稻生育期接种对发病率的影响分别在水稻破口抽穗当天(0天)、破口前6-9天、破口前10-13天，用2个菌株的MHC液在傍晚接种水稻粤优938，武育粳3号和淮9508进行接种试验。
结果表明，两个菌株在三个品种的破口当天接种，发病率都为0，在抽穗破口前6-13天接种的都能引起发病，而以破口前6-9天接种的发病效果最好，此时，三个品种的穗发病率均超过85％，以Uv-2菌株接种粤优938的病情最重(参见表2)。对病情指数作三因素统计，接种时期之间，菌株之间及品种之间均差异极显著。三、不同时段接种对发病率的影响分别在一天的早上(8～10时)、中午(12～14时)、傍晚(16～18时)，用菌株Uv-2(稻曲病病原菌代号，Uv为稻曲病菌的英文缩写)的MHC液接种水稻品种粤优938，武育粳3号和淮9508进行接种试验。
结果表明，在中午接种的仅在粤优938上引起少量发病，在早上和傍晚接种的都能引起较多的发病，以傍晚接种的效果最好，此时，三个品种发病率均在85％以上(参见表3)。对病情指数作二因素统计，品种之间及接种时间之间的差异均极显著。
在以上试验基础上，最终形成的总体技术方案为——本发明高效引发稻曲病的接种方法包括以下步骤1)、制备接种体——用新鲜的稻曲病菌菌株移植于蔗糖马铃薯培养液中，振荡培养5-15天，制成孢子液，其中100×视野下的孢子数(number of spores in a field 100×下称NSF)大于50；2)、适时接种——在水稻生育期中破口前的6-13天，于早上8～10时或傍晚16～18时，将制备的接种体接种到水稻上。
实验证明，采用本发明的方法可以使稻曲病的发病率达到80％。以上，与现有人工接种相比，稻曲病发病率显著提高，从而为深入研究稻曲病创造了良好的条件。
此外，申请人还进行了以下不同培养基质和乳化剂对接种效果影响的试验。将Uv-2的纯孢子离心浓集(8000rpm)，然后用一下三钟液体稀释孢子液，制成所需的孢子数量①纯水；②10％的马铃薯煮汁；③离心浓缩孢子的上清液；并都做无吐温和添加吐温-20(至含量为0.1％)的两种处理。用少许清水将离心孢子团悬浮起来，等量加入配备的3×2种液体，接种粤优938，同时接种MHC液作对比。
结果表明，将孢子悬配于10％的马铃薯煮汁中引发的病情显著高于悬配于清水及离心上清液中的病情。总体上接种体中加入吐温与否差异不显著。用作该项对比的MHC液接种效果很好，能100％引起发病，病情指数达98.86(表4)。表1 三种接种体接种的发病情况接种体 厚垣孢子 薄壁分生孢子 MHC液孢子浓度 160 3 12 48 192 200发病率PDP(％) 0.00d 33.97c 52.21c76.38b 93.08a98.28a病情指数DI0.00e 6.98d 8.14d 26.92c 46.60b71.22a表2 在水稻三个时期接种MHC液引起的发病情况接种时期 Uv-2 Uv-12(破口前，天) 粤优938 武育粳3号 淮9805粤优938 武育粳3号 淮9805发病率(％) 10-1365.96b 3.46b0.00b 3.13ab0.00a 0.00bPDP(％)6-9 92.92a 98.33a 87.19a13.33a3.45a 19.41a00.00c 0.00b0.00b 0.00b 0.00a 0.00b病情指数 10-1314.62B 0.38B0.00B 0.35AB0.00A 0.00BDI 6-9 53.49A 33.99A 21.94A1.48A 0.38A 2.16A00.00C 0.00B0.00B 0.00B 0.00A 0.00B表3 在三个时段接种Uv-2的MHC液引起的发病情况接种时段(时) 发病率 PDP(％) 病情指数 DI粤优938武育粳3号淮9805粤优938 武育粳3号 淮98058--10 91.67a 27.40b 28.70b33.89b3.04b 3.40b12--14 15.76b 0.00c 0.00c 2.52c 0.00c 0.00c16--18 92.92a 98.33a 87.19a53.49a33.99a 21.94a表4 接种液中加入马铃薯煮汁和吐温引起的发病情况薄壁分生孢子液 MHC液清水马铃薯煮汁上清液无吐温 加吐温 无吐温加吐温无吐温加吐温无吐温加吐温发病率PDP(％)43.33cd 51.67cd 77.85bc 97.62ab 41.67cd 33.10d100.00a 100.00a病情指数DI 5.19d8.15cd 14.84c50.86b4.81d 4.12d 96.86a92.72a
值得一提的是，以上接种过程如采用注射接种，效果优于其他接种方法。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围内。
权利要求
1.一种高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于包括以下步骤1)、制备接种体——用新鲜的稻曲病菌菌株移植于蔗糖马铃薯培养液中，振荡培养5-15天，制成菌丝碎片-孢子液，或薄壁分生孢子液，其中100×视野下的孢子数大于50；2)、适时接种——在水稻生育期中破口前的6-13天，于早上8～10时或傍晚16～18时，将制取的接种体接种到水稻上。
2.根据权利要求1所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于所述孢子液为薄壁分生孢子液，将振荡培养5-10天的培养液用纱布过滤，再将只含孢子的过滤液稀释后制得。
3.根据权利要求2所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于所述孢子液为菌丝碎片-薄壁分生孢子混合液，将振荡5-10天的培养液倒入匀浆机，高速匀浆打碎菌丝后制得。
4.根据权利要求2或3所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于在水稻破口前6-9天接种。
5.根据权利要求4所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于在傍晚16～18时接种。
6.根据权利要求5所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于接种的方法采用注射接种。
7.根据权利要求1所述高效引发稻曲病的接种方法，其特征在于所述步骤1)中，使用10％的马铃薯煮汁，稀释孢子液，制成所需的孢子数量，得到孢子悬配液。
全文摘要
本发明涉及一种引发稻曲病的接种方法，属于农业技术领域。该方法包括制备接种体—用清水振荡洗脱稻曲球表面的厚垣孢子，振荡培养5－15天，制成孢子－菌丝碎片悬浮液，其中100×视野下的孢子数大于50；适时接种—在水稻生育期中破口前的6－13天，于早上8～10时或傍晚16～18时，将制备的接种体接种到水稻上。采用本发明的方法可以使稻曲病的发病率达到80％，以上，与现有人工接种相比，稻曲病发病率显著提高，从而为深入开展水稻稻曲病抗病育种研究创造了良好的条件。
文档编号A01G16/00GK1460406SQ0313162
公开日2003年12月10日 申请日期2003年6月3日 优先权日2003年6月3日
发明者陈志谊, 张君成, 刘永锋 申请人:江苏省农业科学院