专利名称：一种微生物菌剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物菌剂及其制备方法和应用，更具体地说，涉及一种由解脂雅洛氏酵母菌(Yaliowia lipolytica)、绿色木霉菌(Trichodermaviride)、高温芽孢杆菌(Bacillus sp.)、生黑链霉菌(Steptomyces pigrifacienfs)、诺卡氏菌(Nocardia sp.)五种菌株和固体培养基组成的微生物菌剂及其制备方法和作为粪便处理剂的应用。
背景技术：
目前，应用于畜禽粪便无害化处理的微生物发酵菌剂已有多种专利和文献报道，它们可分为三种类型一种是自然菌群发酵法，即堆积畜禽粪便，在好氧条件下，利用废物本身的微生物繁殖进行发酵，这种方法的缺点是发酵时间长，发酵过程会给环境带来一定的影响；第二种方法是将一些具有发酵功能的微生物应用于粪便的发酵，但由于没有利用高温发酵菌株和脱臭发酵菌株的功能，往往导致发酵不彻底或需较长时间，并且发酵产品吸潮后会返臭；第三种方法是利用环境友好微生物菌群发酵废弃物，这种菌群具有发酵、除臭、杀病菌的多重功能，但由于菌群庞大，成本高，应用受到限制。
发明内容
本发明的目的是提供一种微生物菌剂及其制备方法和应用，它能克服一种微生物菌剂，其特征在于由解脂雅洛氏酵母菌、绿色木霉菌、高温芽孢杆菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌五种菌株和固体培养基组成，该五种菌株在每克菌剂中的菌数范围比为15～30∶20～40∶15～30∶15～30∶15～30。
上述微生物菌剂的制备方法，其特征在于，首先将解脂雅洛氏酵母菌、绿色木霉菌、高温芽孢杆菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌分别依次作一级斜面培养、二级液体振荡培养、三级固体发酵培养，至每克固体培养基中的菌数分别达到0.5～1.2×108个、1.0～5.0×108个、1.0～2.5×108个、1.0～2.5×108个、1.0～2.5×108个；所述的固体发酵培养在固体培养基上进行，使用前，调节培养基中的水份至40～50％，121～122℃，湿热灭菌30～40分钟，冷却至室温；最后，将各菌株纯培养物在室温下按单一菌株的菌数范围比15～30∶20～40∶15～30∶15～30∶15～30进行搅拌混合。
上述微生物菌剂用作粪便处理剂。
本发明的优点是所用的微生物能针对性地去除粪便中的臭味物质--脂肪酸和粪蛋白，同时兼顾了中温和高温阶段的分解作用，故本菌剂能将除臭和发酵两种功能有机地结合在一起，有效地利用了微生物的转化和代谢发热作用，实现了畜禽粪便水份和臭味的快速脱除，同时废弃物可作为优质的有机肥料使用，方法简单、成本低，无环境污染。
具体实施例方式
本发明所用的解脂雅洛氏酵母菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌等三种菌株己于2004年6月7日前在武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，它们的保藏号分别为CCTCC NO M95017、CCTCC NO AA92021、CCTCC NOM95018；绿色木霉菌株和高温芽孢杆菌株在市场上已公开销售。
实施例1解脂雅洛氏酵母菌株的培养解脂雅洛氏酵母菌首先在马铃薯养基上，30℃，作一级斜面培养；48小时后，接种到摇瓶里，30℃，作二级液体振荡培养；36小时后，以重量比为5％的接种量，接种到固体培养基上，30℃，作三级培养至菌数达到0.8×108个/克固体培养基。
绿色木霉菌株的培养绿色木霉菌首先在PDA培养基上，30℃，作一级斜面培养；72小时后，接种到摇瓶里，30℃，作二级液体振荡培养；48小时后，以重量比为5％的接种量，接种到固体培养基上，30℃，作三级培养至菌数达到3.0×108个/克固体培养基。
高温芽孢杆菌株的培养高温芽孢杆菌首先在肉汤蛋白胨培养基上，30℃，作一级斜面培养；48小时后，接种到摇瓶里，30℃，作二级液体振荡培养；24小时后，以重量比为5％的接种量，接种到固体培养基上，30℃，作三级培养至菌数达到1.5×108个/克固体培养基。
生黑链霉菌株的培养生黑链霉菌首先在高氏一号培养基上，30℃，作一级斜面培养；48小时后，接种到摇瓶里，30℃，作二级液体振荡培养；36小时后，以重量比为5％的接种量，接种到固体培养基上，30℃，作三级培养至菌数达1.5×108个/克固体培养基；诺卡氏菌株的培养诺卡氏菌首先在GY培养基上，30℃，作一级斜面培养；48小时后，接种到摇瓶里，30℃，作二级液体振荡培养；36小时后，以重量比为5％的接种量，接种到固体培养基上，30℃，作三级培养至菌数达1.5×108个/克固体培养基。
固体培养基的制备上述五种菌株的固体培养基的组成及重量百分比为米糠50％、麸皮20％、玉米粉15％、大豆粉12％、石灰粉2.9％、硫酸铵0.1％。使用前，调节培养基中的水份至45％，121℃，湿热灭菌30分钟，冷却至室温。
菌株纯培养物的混合将各菌株纯培养物以质量比2∶1∶1∶1∶1混合，就得到了本发明的微生物菌剂。
另将畜禽粪便置于发酵槽中，按重量比加入40％的秸杆粉混匀，调节水份至45％，获得预处理物料。在室温下，以重量比为5％的接种量向预处理物料中加入上述微生物菌剂，进行搅拌，并定时曝气，10天内可以达到完全腐熟，含水量降至20％左右，腐熟的物料为灰色，略带酒糟气味。
实施例21吨鲜鸡粪(含水量45～70％)按实施例1中的方法预处理以后，加入0.05吨的上述微生物菌剂，于室温下发酵，3天后，温度可达50℃，定时搅拌和通气，勿使发酵温度超过70℃，10天内发酵过程结束，得到灰色略带酒糟气味的发酵产品。与自然发酵组对照，结果表明，加入本发明的微生物菌剂，发酵周期由1个半月缩短至1个星期；产品含水量由40％降至20％左右；产品的外观和气味分别为灰色和略带酒糟气味，不同于自然发酵产品的黑色和霉腥味；产品含氮量为自然发酵的1.5倍，略低于未发酵物料，其中氨态氮有损失；磷和钾含量两者相当，并均与未发酵物料相当；产品的有机质含量较自然发酵制得的产品高，略低于未发酵物料。
权利要求
1.一种微生物菌剂，其特征在于由解脂雅洛氏酵母菌、绿色木霉菌、高温芽孢杆菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌五种菌株和固体培养基组成，该五种菌株在每克菌剂中的菌数范围比为15～30∶20～40∶15～30∶15～30∶15～30。
2.如权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于所述的固体培养基由米糠、麸皮、玉米粉、大豆粉、石灰粉和硫酸铵组成，它们的重量百分数范围依次分别为45～60％、15～25％、10～20％、7～15％、2～5％、0.05～0.1％。
3.权利要求1所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于首先将解脂雅洛氏酵母菌、绿色木霉菌、高温芽孢杆菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌分别依次作一级斜面培养、二级液体振荡培养、三级固体发酵培养，至每克固体培养基中的菌数分别达到0.5～1.2×108个、1.0～5.0×108个、1.0～2.5×108个、1.0～2.5×108个、1.0～2.5×108个；所述的固体发酵培养在固体培养基上进行，使用前，调节培养基中的水份至40～50％，121～122℃，湿热灭菌30～40分钟，冷却至室温；最后，将各菌株纯培养物在室温下按单一菌株的菌数范围比15～30∶20～40∶15～30∶15～30∶15～30进行搅拌混合。
4.权利要求1所述的微生物菌剂用作粪便处理剂。
全文摘要
本发明公开了一种微生物菌剂及其制备方法，它可有效地解决规模化养殖场畜禽粪便对环境的污染，同时实现废弃资源的综合开发利用。所述的微生物菌剂由解脂雅洛氏酵母菌、绿色木霉菌、高温芽孢杆菌、生黑链霉菌、诺卡氏菌五种菌株和固体培养基组成，它可以用作粪便处理剂。所述的制备方法包括上述菌株的三级纯培养和培养物的按比例混合。本菌剂制备方法简单，成本低，它将除臭和发酵功能有机地结合在一起，有效地利用了微生物的转化和代谢发热作用，实现了畜禽粪便水分和臭味的快速脱除，同时废弃物可作为优质的有机肥料使用，无环境污染。
文档编号C05F3/00GK1594538SQ20041002445
公开日2005年3月16日 申请日期2004年7月8日 优先权日2004年7月8日
发明者胡国斌, 丛日山, 刘怡 申请人:中国海洋大学