专利名称：稳心草的种植方法及快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及稳心草的种植方法及快速繁殖方法。
背景技术：
植物组织培养又称植物克隆，是指通过无菌操作把植物体的各类结构材料，即外植体，包括各种器官、组织或细胞，在人工控制的环境条件下进行离体培养，通过生长发育的过程，产生可以用于繁殖的完整植株，并在数量上得到大幅度的增加。植物组织培养有器官培养、组织培养、胚培养、茎尖培养、花药培养、细胞培养等。
组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。
植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20～30天为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、相对湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。
呼伦贝尔野生植物稳心草(学名为黑点叶金丝桃，Hypericum attenuatttmChois.)，因当地居民用于治疗心脏病而得名，属多年生草本植物。根茎肉质、带须，丛生3～5枝草，成熟稳心草株高60～80厘米，草枝上对称生长枝杈，枝杈不再分杈，枝杈上对称生长草叶，草叶椭圆形，草叶纹络对称随叶形，伞形花在枝杈顶端苞蕾上生、小黄花，苞蕾成熟后果内花籽微小，针形，黑色。苞果形状上尖底圆，中间有一道纹络，整体外观酷似人的心脏。稳心草生长分布在呼伦贝尔大兴安岭山脉杂木林荫下，极为稀少罕见。稳心草生物属性介于草本与木本之间，有着奇特的生物现象，虽为绿色植物，但将其浸入水中就会立刻渗现出鲜血般的颜色。稳心草每年4月末5月初返青，6月在枝杈顶端显现花蕾，花蕾顶部开出黄色小花，花期可至9月霜冻时，霜冻后茎叶开始干枯，外观由绿色变成暗红色。
稳心草，味甘、微涩、草香，根茎、叶、花、籽均可入药，含有丰富的氨基酸和多种微量矿物质元素等药效成份，这在草本植物中是非常少见的。稳心草能溶于水，但以白酒泡制其药效显著，药力能快速入血归心，通达人体微循环系统，对血液进行灭菌、消毒、分解、清洁，能溶解高稠血脂、胆固醇、血栓梗质、血小板凝固物质等，具有快速恢复和全面提高人体免疫力等独特功效。现已有研究表明，稳心草在治疗克山病方面具有很好的疗效。
稳心草生长分布稀少罕见的原因，主要是其种子进化程度低，质量小，不能适应自然环境下繁衍生殖。经在实验室将土壤和温湿度等调至最佳条件，其种子出苗率不足0.3％。由此可见，稳心草是一种十分古老和进化程度极低的濒临灭绝的草本药用植物物种。
针对稳心草在自然条件下的种子繁殖成活率极低，繁殖速度十分缓慢，现有资源远不能满足人们需求，多年来人们又没能成功的进行人工繁殖等问题，需要研究开发一种大量地快速繁殖稳心草的方法，使之能够满足需要。
迄今为止，尚没有关于人工繁殖种植生产稳心草的报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的一个目的在于提供一种稳心草的种植方法。
本发明的另一个目的在于提供一种稳心草的快速繁殖方法。
根据本发明的一个目的，本发明提供的种植方法能够很好的适用于稳心草，采用种子催芽、播种繁育、茎尖组织培养、移栽种植等综合技术，实现全年连续的快速繁育，以满足大面积种植时对稳心草幼苗的需求。
所述稳心草的种植方法可主要包括下述步骤
A1、将采自内蒙古的稳心草种子种在作为基质的腐殖质土中，无直射光照，直至长出能够用于茎尖组织培养的稳心草幼苗，作为稳心草外植体；或者选取自然生长的稳心草嫩茎，作为稳心草外植体；A2、从经消毒处理的稳心草外植体上切取茎尖，接种在分化培养基上培养，直至分化出丛生芽；或者从经消毒处理的稳心草外植体上切取茎尖，接种在分化培养基上培养，直至在芽基部周围形成愈伤组织，将愈伤组织切下来接种在分化培养基上，直至分化出丛生芽；A3、当丛生芽长至3～5厘米时单株切下，接种至生根培养基上培养，直至长出根系，得到稳心草组织培养苗；A4、将由步骤A3得到的稳心草组织培养苗向室外种植地进行移栽种植，移栽时按行间距20～60厘米，移栽在每年的无霜期内进行，种植地为腐殖质多的草地或杂木林地，作遮阳和保湿管理。
本发明所涉及的部分术语说明如下所述“外植体”为从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
所述“丛生芽”为在植株体同一处着生的许多芽。
所述“茎尖”为带顶芽的茎段。
所述“无直射光照”为有光照，但无直射阳光。
所述“分化”为细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在发育中形成各类组织和器官，完成整个生活周期。
所述“愈伤组织”为在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。
所述“胚状体”对应于胚，为在离体培养过程中产生一种形似胚(具有明显的根端和芽端)，功能与胚相同的结构。
在上述方法中，所述稳心草的外植体可以是稳心草的某个器官，如茎、根或叶，也可以是稳心草的组织、细胞等。
优选的，所述稳心草的外植体为经人工播种繁育出的稳心草幼苗，或者为在生长季节，选取自然生长的稳心草嫩茎。
进一步的，在上述方法中，在步骤A1中，温度为20～30℃，相对湿度为60～80％；
在步骤A2中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光；在步骤A3中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光。
本领域技术人员可以理解，在植株的组织培养中，温度、相对湿度、光照等培养条件对植株生长的影响很大。如果温度、相对湿度等选择不当，会导致试管苗生长缓慢、繁殖率下降，甚至会出现试管苗的玻璃化现象。本发明的发明人经过大量的试验摸索，确定出上述方法中所采用的培养条件是稳心草组织培养的较佳条件。
在上述方法中，丛生芽可由稳心草的外植体直接产生；也可是在外植体上诱导出的愈伤组织形成胚状体，再分化成芽，这两种途径均可以用于实现本发明的目的。
对外植体的消毒，可以采用本领域的常规方法。优选的，可以用无菌水洗净用于组织培养的外植体表面，再用70％酒精消毒。在上超净台后用0.1％氧化汞作表面消毒，再用无菌水清洗。例如，用无菌水洗净表面，在70％酒精中浸泡8～30秒(或用70％酒精擦拭)，在上超净台后，在0.1％的氧化汞溶液中消毒3～5分钟，用无菌水冲洗3～5次，然后在无菌条件下接种在培养基上。
在灭菌消毒后，可用血清学检测法等常规方法判断外植体是否已被消毒。
在上述方法中，培养材料的接种操作应在无菌条件下进行，如在无菌培养室内进行，接种前要对室内及所用工具、材料等提前消毒。
在本发明的培养中，用于光照的光源应能达到本发明所需的光强度，并且应为散射光源，通常可以采用方便易得的日光灯或散射日光等。
在步骤A1中用作基质的腐殖质土可通过挖取山上杂木林荫地表10厘米以下的腐殖土而得到。
可将腐殖质土放入40×40×20厘米的种植培养盘内，自然pH值，不作灭菌处理，以保持自然的营养成分和利于生命力强的种子长出。
点种稳心草种子时，相邻种子的间距为2～5厘米，深度为0.3～0.7厘米。
优选的，将种子按3×3×3厘米的品字形点种，深度0.5厘米左右，然后置无直射光的培养室架上培养。
在所述培养条件下，通常经5天左右出苗，25～30天左右株高长至15～20厘米，这时就可以用于茎尖组织培养。
由于稳心草不能忍受强烈的直射光线，在适度的遮蔽下才能生长良好，因此在稳心草幼苗的生长过程中，采用的光照为无直射光照。
在上述步骤A2中切取的茎段长度应当确保正常的分化出丛生芽，或者应当确保正常的形成愈伤组织，通常切取2～3厘米的茎尖较为适宜。
一般来说，在所述培养条件下，经20天左右便可从芽基部分分化出3～5个丛生芽，同时芽基部分可出现愈伤组织。在所述培养条件下，通常经15天左右，愈伤组织可分化出丛生芽。
在上述步骤A3中在所述培养条件下，通常经10天左右可长出根系，20天左右根系发达，植株生长健壮。
在本发明中，培养基的pH值对稳心草的组织培养具有一定的影响，通常略偏酸性的培养基更有利。优选的，所述培养基的pH值为5～6。更优选的，所述培养基的pH值为6。
在本发明的方法中，培养基的配方也是决定稳心草繁殖率的重要因素。在本发明中，茎尖培养所用的培养基可选自MS(Murashige and Skoog)培养基、1/2MS培养基、改良的MS培养基、N6培养基、White培养基、heller培养基等常用培养基。通常可以利用上述常用培养基作为基础配方，然后再根据稳心草组织的生长情况，选择性添加各种植物激素(包括细胞分裂素类、生长素类等)、琼脂、蔗糖等，并调整pH值。稳心草对激素的反应比较敏感，培养基中生长素类和细胞分裂素类的种类、相对比例和绝对量都能直接影响到组织培养的过程。所用的生长素类包括萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、2，4-二氯萘氧乙酸(2，4-D)等，所用的细胞分裂素类包括6-苄基氨基嘌呤(BA)、激动素(KT)、玉米素(ZT)等。
一般植物激素都配制成1mg/ml的浓度。在配培养基时，按培养基配方中数值的10倍来量取。如某培养基配方为MS+BA0.5，其意义为在每升MS基本培养基中加入BA0.5mg。按照我们先前配制的激素储藏液的浓度，我们只需量取0.5ml储藏液注入培养基即可满足0.5mg/L的要求。
在本发明的一个具体实施方式
中，稳心草茎尖组织培养所用的分化培养基、生根培养基等均为MS培养基。试验结果表明，丛生芽的诱导率约为85％以上，愈伤组织的诱导率为60％以上，生根率为95％以上，说明该培养基适用于本发明。
在本发明的另一个具体实施方式
中，稳心草茎尖组织培养所用的分化培养基为MS+BA 0.3mg/L+NAA 0.4mg/L，生根培养基为MS+IAA 0.5mg/L，增殖培养基为MS+BA2.5mg/L+NAA 0.2mg/L。试验结果表明，丛生芽的诱导率约为90％以上，愈伤组织的诱导率为55％以上，生根率为90％以上。
在本发明的还一个具体实施方式
中，稳心草茎尖组织培养所用的分化培养基为N6+4-D 0.1mg/L，生根培养基为1/2MS，增殖培养基为N6+KT 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L。试验结果表明，丛生芽的诱导率约为70％左右，愈伤组织的诱导率为40％左右，生根率为75％左右。
由于MS培养基为植物组织培养中常用的培养基，方便易得，更符合工业化生产的需要，因此，本发明所用的培养基优选为MS培养基。
将分装好的培养基进行高压灭菌，取出灭菌后的培养基要及时用皮套系紧，放试验台上冷却凝固备用。
在上述方法中，将丛生芽切下后可先进行增殖培养，然后再进行生根培养。因此，在上述步骤A1后，还可进一步包括下述增殖培养步骤将丛生芽切下来接种至增殖培养基上，温度26～28℃，相对湿度60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，直至增殖分化出丛生芽。
在上述步骤中，切取的茎段长度应当确保正常的分化出丛生芽，通常经15天左右增殖分化出5～6倍的丛生芽。
优选的，所用的培养基为MS培养基。
进一步的，所述稳心草的种子可首先进行催芽培养处理，以加快出芽速度，并提高出芽率。所述催芽步骤如下将经消毒的种子用40～50℃的温水浸泡15～30小时，然后取出种子，温度26～28℃，相对湿度70～80％，培养2～4天。
在上述步骤中，通常应选用籽粒饱满的种子，用70％的酒精漂洗消毒。
在温水中浸泡的时间优选为24小时，浸泡24小时后，在显微镜下可见种子湿润膨大。
培养时，为了能够保持温度恒定，通常将种子置于恒温箱中，培养时间优选为3天左右，此时，在显微镜下可见种子尖部生出白色小芽，出芽率可为65％以上。该催芽方法简便易行，在大规模生产时，可降低生产成本。
稳心草每年8～9月份种子成熟，这时选择植株高而粗壮的采摘其苞果，掰开苞果将里面的种子倒入密封的瓶内保存备用，作为用于催化培养的种子。
进一步的，上述方法还包括如下的移栽种植步骤将由上述方法的步骤A3得到的稳心草组织培养苗向室外种植地进行移栽种植，移栽在每年的无霜期内进行，种植地为腐殖质多的土地，作遮阳和保湿管理。
在上述步骤中，在每年5月中旬至8月末的无霜期内均可进行移栽。移栽地宜选择腐殖质多的草地或杂木林地，土地不需作翻耕和除草处理，因为稳心草具有在和其它植物共生条件下转化吸收各种营养成分的生物特性，同时其它植物可起到遮阳和保持荫湿环境的作用。
移栽时按行间距20～60厘米，将连带培养土的苗栽种至坑穴内，然后培土踏实并一次性浇透水即可。在本发明的一个具体实施方式
中，移栽时的行间距为40×40厘米，所挖坑穴的大小为8×10厘米。
稳心草喜在荫湿环境生长，因而种植地要做好遮阳和保湿管理，有条件的可搭架遮阳和铺设喷灌设施，还可在种植地按东西向间距30米左右栽种速生杨等林木，以增强抗风、遮阳和保湿等自然调节能力，同时还要加强防范牲畜践踏和采食以及春秋两季防火等管防工作。
由于通过上述方法得到的稳心草组织培养苗是在无菌、高湿、恒温环境下生长和发育的，既不保湿也不能防止杂菌侵染，因此，还需经过驯化培养以适应移栽至自然环境下的正常生长。所述驯化培养步骤如下将由上述方法的步骤A3得到的稳心草组织培养苗移栽至以自然腐殖土质作为基质的种植培养盘内，温度20～25℃，相对湿度40～60％，散射日光照，驯化培养15～25天。
在上述步骤中，植株之间应保持一定的行间距，通常为10～20厘米，优选为15×15厘米，经20天左右驯化培养后，即可向室外种植地移栽种植。
稳心草每年9月份霜冻后生长期结束，收获后可在立秋后20天左右进行。收获时用镰刀从稳心草贴根处割下，然后打成捆装入透气性好的袋中，防止草叶或枝杈掉失，运回后要放置在荫凉通风层架上保管，以防霉变。
加工时先将杂草挑出，再用粉碎机粉碎成末后装入密封的容器内，以备深加工成为各种溶液剂、注射剂、冲剂、片剂、胶囊、丸及酊剂等药品和从中提取药效成分及加工成为其它功能性产品时使用。
根据本发明的另一个目的，本发明提供了一种稳心草的快速繁殖方法，其包括下述步骤B1、将采自内蒙古的稳心草种子种在作为基质的腐殖质土中，无直射光照，直至长出15～20的稳心草幼苗，作为稳心草外植体；或者选取自然生长的稳心草嫩茎，作为稳心草外植体；B2、从经消毒处理的稳心草外植体上切取2～3厘米的茎尖，接种在pH值为5～6的分化培养基上培养，直至分化出丛生芽；或者从经消毒处理的稳心草外植体上切取茎尖，接种在pH值为5～6的分化培养基上培养，直至在芽基部周围形成愈伤组织，将愈伤组织切下来接种在pH值为5～6的分化培养基上，直至分化出丛生芽；B3、当丛生芽长至3～5厘米时单株切下，接种至pH值为5～6的生根培养基上培养，直至长出根系，得到稳心草组织培养苗。
进一步的，在步骤B1中，温度为20～30℃，相对湿度为60～80％；在步骤B2中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光；在步骤B3中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光。
进一步的，对所述稳心草外植体的消毒处理步骤为用无菌水洗净用于组织培养的外植体表面，再用70％酒精消毒8～30秒，在上超净台后用0.1％氧化汞作表面消毒3～5分钟，再用无菌水清洗3～5次。
所述稳心草的种子可首先通过下述步骤进行催芽培养处理将经消毒的种子用40～50℃的温水浸泡15～30小时，然后取出种子，温度24～28℃，相对湿度70～80％，培养2～4天。
在步骤A2后，可进一步包括下述步骤将丛生芽切下来接种至pH值为5～6的增殖培养基上，温度24～28℃，相对湿度60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，直至增殖分化出丛生芽。
所述方法还可进一步包括下述步骤将由步骤A3得到的稳心草组织培养苗移栽至以自然腐殖上质作为基质的种植培养盘内，温度20～25℃，相对湿度40～60％，散射日光照，驯化培养15～25天；将经驯化培养的稳心草组织培养苗向室外种植地进行移栽种植，移栽在每年的无霜期内进行，种植地为腐殖质多的土地，作遮阳和保湿管理。
本发明提供了野生草本药用植物稳心草的人工繁殖方法和种植方法，从而可以实现人工种植生产，在挽救这一珍奇的濒临灭绝的草本药用植物物种的同时，为人类大量提供能够加工生产成为具有很高价值的药品的草本药用植物资源。本发明的稳心草种植技术，目前尚未出现过报道，所以本发明属国内外首创，填补了国内外对野生草本药物植物稳心草进行人工繁殖种植的空白。
本发明人多年民间临床近80余例各类重病患者试验，均取得良好疗效，无任何副作用。稳心草可以治疗各种心脏病、心脑血管病、脑栓梗塞病、肺、肝、胃、肾、胆病及糖尿病、前列腺病、白血病等各种癌症等，一般用药后均可在1～3个月治愈，且不出现反复。经试验和研究发现，稳心草并非是包治百病的神药，只因其具有贯通气血、固本扶正和治本清源的独特功效，才使其具有可以医治百病的神奇疗效。相信以稳心草固本清源的独特疗效和未来更加深入的科学研究，一定会开发成为一种可以突破和医治包括艾滋病在内的严重威胁人类生命疾病的一种全新概念的、纯天然生态化的、无任何毒副作用和依赖性的，能够极大的提高人类生命质量和寿命的全科药物。
为了更好地理解本发明的本质，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。
具体实施例方式
本发明所用实验材料，如无特别说明，均为市售产品。
稳心草的快速繁殖及种植方法实施例11、种子采集稳心草每年8～9月份种子成熟，这时在内蒙古呼伦贝尔选择高而粗壮的植株，采摘其苞果，掰开苞果将里面的种子倒入密封的瓶内保存备用。
2、催芽培养挑选籽粒饱满的种子，先用70％酒精漂洗消毒，然后用40～50℃的温水浸泡24小时，在显微镜下可见种子湿润膨大，这时捞出放入瓶内置温度26～28℃，相对湿度70～80％恒温箱培养3天左右，在显微镜下可见种子尖部生出白色小芽，出芽率为65％以上。
3、播种繁育挖取山上杂木林荫地表10厘米以下腐殖土作基质，放入40×40×20厘米种植培养盘内，pH值自然，不作灭菌处理，以保持自然营养成分和利于生命力强的种子长出。将经催芽培养的种子按3×3×3厘米的品字形点种，深度0.5厘米左右，然后置无直射光的培养室架上培养，温度25℃左右，相对湿度60～70％，经5天左右出苗，25～30天左右株高长至15～20厘米，这时就可以用于茎尖组织培养。
4、外植体准备将用于组织培养的外植体，即催芽播种繁育出的稳心草幼苗(也可取自然生长的嫩茎)，用无菌水洗净表面，在70％酒精中浸泡8～12秒(或用70％酒精擦拭)，在上超净台后，在0.1％的氧化汞溶液中消毒3～5分钟，用无菌水冲洗3～4次，然后在无菌条件下接种在培养基上。
5、初级培养从经消毒处理的外植体切取2～3厘米带顶芽的茎段在无菌条件下接种在MS培养基上培养，温度26～28℃，相对湿度60～70％，每天日光灯或散射光照12小时，光照度约为1500～2000lx。经20天左右从芽的基部分化出3～5个丛生芽，同时在芽基部周围可出现愈伤组织。这时将愈伤组织切下来接种在新的MS培养基上，经15天左右可分化出丛生芽。丛生芽的诱导率约为85％以上，愈伤组织的诱导率为60％以上。
6、增殖培养将丛生芽切下来接种至MS培养基上进行增殖培养，温度26～28℃，相对湿度60～70％，每天日光灯或散射光照12小时，光照度约为1500～2000lx。经15天左右增殖分化出5～6倍丛生芽。
7、生根培养当丛生芽长至3～5厘米时单株切下，接种至MS培养基上培养，温度26～28℃，相对湿度60～70％，每天日光灯和散射光照12小时，光照度约为1500～2000lx。经10天左右即可长出根系，生根率为95％以上，20天左右根系发达，植株生长健壮。
8、驯化培养将生根培养的植株移栽至以自然腐殖土作基质的种植培养盘内，行间距15×15厘米，温度20～25℃，相对湿度40～60％，散射日光照，经20天左右驯化培养后，即可向室外种植地移栽种植。
9、移栽种植每年5月中旬至8月末无霜期内均可进行移栽。移栽地宜选择腐殖质多的草地或杂木林地，土地不需作翻耕和除草处理，因为稳心草具有在和其它植物共生条件下转化吸收各种营养成分的生物特性，同时其它植物可起到遮阳和保持荫湿环境的作用。
移栽时按行间距40×40厘米，挖8×10厘米的坑穴，将连带培养土的苗栽种至坑穴内，然后培土踏实并一次性浇透水即可。稳心草的移栽成活率为90％以上，移栽后稳心草植株生长健壮。
10、种植地保管稳心草喜在荫湿环境生长，因而种植地要做好遮阳和保湿管理，有条件的可搭架遮阳和铺设喷灌设施，还可在种植地按东西向间距30米左右栽种速生杨等林木，以增强抗风、遮阳和保湿等自然调节能力，同时还要加强防范牲畜践踏和采食以及春秋两季防火等管防工作。
11、收获稳心草每年9月份霜冻后生长期结束，收获后可在立秋后20天左右进行。收获时用镰刀从稳心草贴根处割下，然后打成捆装入透气性好的袋中，防止草叶或枝杈掉失，运回后要放置在荫凉通风层架上保管，以防霉变。
12、加工加工时先将杂草挑出，再用粉碎机粉碎成末后装入密封的容器内，以备深加工成为各种溶液剂、注射剂、冲剂、片剂、胶囊、丸及酊剂等药品和从中提取药效成分及加工成为其它功能性产品时使用。
实施例2在实施例1的步骤5中，所用的培养基为MS+BA 0.3mg/L+NAA0.4mg/L；步骤6中，所用的培养基为MS+BA2.5mg/L+NAA 0.2mg/L；步骤7中，所用的培养基为MS+IAA 0.5mg/L；其它同实施例1。丛生芽的诱导率约为90％以上，愈伤组织的诱导率为55％以上，生根率为90％以上。
实施例3在实施例1的步骤5中，所用的培养基为N6+4-D 0.1mg/L；步骤6中，所用的培养基为N6+KT 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L；步骤7中，所用的培养基为1/2MS；其它同实施例1。丛生芽的诱导率约为70％左右，愈伤组织的诱导率为40％左右，生根率为75％左右。
本发明所用组织培养基的制备实施例4MS培养基的配制1、培养基称取称取硝酸铵(NH4NO3)1650mg、硝酸钾(KNO3)1900mg、氯化钙(CaCl2·2H2O)440mg、硫酸镁(MgSO4·7H2O)370mg、磷酸二氢钾(KH2PO4)170mg、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)27.8mg、乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)37.3mg、碘化钾(KI)0.83mg、硼酸(H3BO3)6.2mg、硫酸锌(ZnSO4·7H2O)8.6mg、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.25mg、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.025mg、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.025mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素0.1mg、盐酸吡哆酸0.5mg、蔗糖30000mg、琼脂7000mg。
2、培养基的配制将称取的MS培养基原料加入装有蒸馏水的容器中，适当加温使之充分溶解，然后倒入1L容量瓶内用蒸馏水定容。称取10g琼脂放锅内加500ml蒸馏水，加温使琼脂充分溶解再加入30g蔗糖搅匀，趁热倒入1L容量瓶内用蒸馏水定容。将调配号的MS培养基液与琼脂溶液混合搅拌均匀，用氢氧化钠40g溶液调整pH值至6.5，灭菌后pH值至6。然后分装至50ml容器内，装量为20ml左右，用锡箔纸封好瓶口。
3、灭菌将分装好的培养基放入高压锅中灭菌，压强1.05Mpa，温度121℃，当锅内压力到0.5Mpa时打开放气阀放出冷气，以保证锅内上下温度一致充分灭菌，当压力升至1.05Mpa时计时灭菌15分钟。取出灭菌后的培养基要及时用皮套系紧，放试验台上冷却凝固备用。
实施例5N6培养基的配制1、培养基称取称取硝酸钾(KNO3)2830mg、硫酸铵((NH4)2SO4)463mg、氯化钙(CaCl2·2H2O)166mg、硫酸镁(MgSO4·7H2O)185mg、磷酸二氢钾(KH2PO4)400mg、硫酸锰(MnSO4·4H2O)4.4mg、硫酸锌(ZnSO4·7H2O)1.6mg、硼酸(H3BO3)0.8mg、碘化钾(KI)1.6mg、甘氨酸2mg、烟酸0.5mg、盐酸硫胺素(维B1)1.0mg、盐酸吡哆素(维B6)0.5mg、蔗糖50000mg、琼脂10000mg、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)27.8mg。
N6培养基的配制方法与灭菌方法参见实施例4。
以上对本发明较佳实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
权利要求
1.一种稳心草的种植方法，其特征在于，包括下述步骤A1、将采自内蒙古的稳心草种子种在作为基质的腐殖质土中，无直射光照，直至长出能够用于茎尖组织培养的稳心草幼苗，作为稳心草外植体；或者选取自然生长的稳心草嫩茎，作为稳心草外植体；A2、从经消毒处理的稳心草外植体上切取茎尖，接种在分化培养基上培养，直至分化出丛生芽；或者从经消毒处理的稳心草外植体上切取茎尖，接种在分化培养基上培养，直至在芽基部周围形成愈伤组织，将愈伤组织切下来接种在分化培养基上，直至分化出丛生芽；A3、当丛生芽长至3～5厘米时单株切下，接种至生根培养基上培养，直至长出根系，得到稳心草组织培养苗；A4、将由步骤A3得到的稳心草组织培养苗向室外种植地进行移栽种植，移栽时按行间距20～60厘米，移栽在每年的无霜期内进行，种植地为腐殖质多的草地或杂木林地，作遮阳和保湿管理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A1中，温度为20～30℃，相对湿度为60～80％；在步骤A2中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光；在步骤A3中，温度为24～28℃，相对湿度为60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，用于光照的光源为日光灯或散射日光。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A1中，所述能够用于茎尖组织培养的稳心草幼苗高度为15～20厘米；在步骤A2中，所述从稳心草外植体上切取的茎尖长度为2～3厘米。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A2和A3中，所述分化培养基和生根培养基的pH值均为5～6。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A2中，对所述稳心草外植体的消毒处理步骤为用无菌水洗净用于组织培养的外植体表面，再用70％酒精消毒8～30秒，在上超净台后用0.1％氧化汞作表面消毒3～5分钟，再用无菌水清洗3～5次。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A2后，进一步包括下述步骤将丛生芽切下来接种至增殖培养基上，温度24～28℃，相对湿度60～80％，光照时间为10～12小时/天，光强度为1000～2000lx，直至增殖分化出丛生芽。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述增殖培养基的pH值为5～6。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稳心草的种子通过下述步骤首先进行催芽培养处理将经消毒的种子用40～50℃的温水浸泡15～30小时，然后取出种子，温度24～28℃，相对湿度70～80％，培养2～4天。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在将稳心草组织培养苗进行移栽种植前，进行如下步骤将由步骤A3得到的稳心草组织培养苗移栽至以自然腐殖土质作为基质的种植培养盘内，温度20～25℃，相对湿度40～60％，散射日光照，驯化培养15～25天。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A4中，移栽时，将连带培养土的苗栽种至坑穴内，然后培土踏实并一次性浇透水。
全文摘要
本发明提供了一种草本药用植物稳心草的种植方法和快速繁殖方法，通过选择不同的培养基和培养条件，经过催芽培养、播种繁育、茎尖组织培养、移栽种植，并通过控制温度、相对湿度、移栽种植及管护等，实现了稳心草的人工繁殖种植。本发明不仅能够挽救草本药用植物稳心草这一珍奇物种，而且为人类提供一种可以加工生产成多种医疗药品和从中提取药效成分并加工成为其它功能性产品的原料资源。
文档编号A01H4/00GK1723769SQ200510012229
公开日2006年1月25日 申请日期2005年7月20日 优先权日2005年7月20日
发明者方在吉 申请人:方在吉