专利名称：双斑东方鲀三倍体诱导方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼类三倍体的诱导，尤其是涉及一种采用静水压法诱导双斑东方鲀三倍体的方法。
背景技术：
三倍体育种具有控制过度繁殖，促进生长、延长寿命及改进鱼肉品质等方面的优点，是品种改良的重要技术之一，它包括冷休克、热休克和静水压处理三种方法。目前有关成功诱导双斑东方鲀三倍体的方法尚未见正式报道。其它鱼类三倍体的诱导多采用冷休克和热休克两种方法，迄今为止相关工作有1)Swarup对三棘刺鱼卵采用冷休克方法诱导，得到三倍体成鱼(Swarup H Productionof triploidy in Gasterosteus aculeatus(L)[J].JGenet，1959a，(56)129～142.)；2)Ojima等对鲤鱼卵采用冷休克方法诱导，结果获得了三倍体成鱼(Ojima Y，MakinoS Triploidy induced by cold shock in fertilized eggs of the carp[M].Proc JapanAcad1978，54，ser B，359～362.)；3)Chourrout采用热休克方法得到虹鳟鱼三倍体幼鱼(Chourrout D Thermal inductionof diploid gynogenesis and triploidy in the eggs of the rainbow trout(Salmon gairdner Richardson)[J].Reprod，Nutr Develop，1980，20(3A)727～733.)；4)Wolters等对斑点叉尾鱼回进行冷休克诱导三倍体，实验结果也获得了三倍体成鱼(Wolters W K，Libuy G S，Chrisman，C L.Induction of triploidy in channel catfish[J].Transs Am Fish，90C.1981a，110(2)310～312.)；5)龙锋对黑鲷三倍体育种的研究，提出冷休克方法优于热休克(尤锋.黑鲷三倍体的人工诱导研究[J].海洋与湖沼，1993，24(3)248～255.)；6)Peter F等热休克诱导的溪鳟三倍体(Peter F，Galbreath Barbaral，Samples.Optimization of thermal shock protocols for induction of triploidy in brooktrout[J].North American journal of aquaculture，2000，62(4)249～259.)；7)王军等的大黄鱼三倍体诱导的初步研究(王军，王德祥，尤颖哲，等，大黄鱼三倍体诱导的初步研究[J]，厦门大学学报(自然科学版)，2001，40(4)927-930)。
除此之外，利用温度休克的方法还在鲽、大菱鲆、大西洋鲑和大马哈鱼等20余种鱼类获得三倍体。静水压处理方法则是新近发展起来的一种诱导鱼类多倍体的方法，其原理是利用水静压机能够产生较高的水静压来抑制第二极体的排出而产生三倍体。国外近几年来采用静水压诱导三倍体较多，迄今为止，国内外相关工作有①Linhart O等在欧洲鲶鱼受精后3min以600kg/cm2的压力持续4min，结果得到97.8％±1.8％三倍体胚胎，最后有33.7％±16.9％的存活率(Linhart O，et al.Comparison ofmethods for hatchery-scale triploidization of European catfish (Silurus glanisL)[J].Linhart O Journal of AppliedIchthyology，2001，17(6)247～255)；②林琪等的静水压休克诱导大黄鱼三倍体(林琪，吴建绍，曾志南，静水压休克诱导大黄鱼三倍体[J]，海洋科学，2001，25(9)6-9)；③桂建芳等采用静水压休克法研究促使第二极体保留诱发三倍体水晶彩鲫的最佳条件，结果产生了100％的三倍体水晶彩鲫，而且胚胎存活率为对照组的90％左右(桂建芳，梁绍昌，孙建民，等.鱼类染色体组操作的研究I.静水压休克诱导水晶彩鲫[J].水生生物学报，1990，14(4)336～344.)。
虽然静水压处理诱导鱼类三倍体的方法需要静水压仪这一特殊设备，但是静水压处理的三倍体在诱导率和存活率上都要高于温度休克。
发明内容
本发明旨在提供一种结果纯正，孵化率、诱导率和苗种成活率高，具有便于现场操作、安全可靠、简便易行等优点的诱导双斑东方鲀三倍体的方法。为此，本发明采用静水压法进行诱导的技术方案。
本发明的步骤为1)采用人工受精，用家禽尾翅羽毛将成熟亲鱼挤出的精子与卵混合；2)在精子与卵混合后的受精卵中加入海水并搅拌，激活受精卵；3)将激活后的受精卵迅速放入压力容器，于激活后30～60s开始施压，施压达到靶压力38～56MPa时停止施压，水温15～25℃，pH值7.5～8.5；持续5～20min后降压，完成静水压法的三倍体诱导。
所用海水的水温最好为19～21℃；pH值8.0～8.2；最好在达到靶压力49～51MPa时停止施压。
本发明采用静水压法进行诱导的技术方案具有以下突出的优点结果纯正，孵化率、诱导率和苗种成活率高，便于现场操作、安全可靠、简便易行。
具体实施例方式
以下实施例将对本发明作进一步的说明。
实施例1先将性成熟的双斑东方鲀亲鱼进行催产，采用干法受精，水温为15～18℃，pH值7.5～7.8，将激活后的受精卵迅速置于压力容器中，于激活30s后开始施压，当靶压力达到38～43Mpa时停止施压，持续5min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞90％，苗种成活率≥35％，三倍体诱导率≥30％。
实施例2与实施例1相似，其不同在于当靶压力达到43～49Mpa时停止施压，施压后持续10min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞73％，苗种成活率≥22％，三倍体诱导率68％。
实施例3与实施例1相似，其不同在于当靶压力达到49～56Mpa时停止施压，施压后持续20min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞40％，苗种成活率≥20％，三倍体诱导率83％。
实施例4先将性成熟的双斑东方鲀亲鱼进行催产，采用干法受精，水温为18～21℃，pH值7.8～8.0，将激活后的受精卵迅速置于压力容器中，于激活30s后开始施压，当靶压力达到38～43Mpa时停止施压，持续20min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞50％，苗种成活率≥78％，三倍体诱导率≥60％。
实施例5与实施例4相似，其不同在于激活35s后开始施压，当靶压力达到43～49Mpa时停止施压，持续10min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞56％，苗种成活率≥18％，三倍体诱导率75％。
实施例6与实施例4相似，其不同在于激活40s后开始施压，当靶压力达到49～56Mpa时停止施压，持续5min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞83％，苗种成活率＞28％，三倍体诱导率91％。
实施例7先将性成熟的双斑东方鲀亲鱼进行催产，采用干法受精，水温为21～23℃，pH值8.0～8.5，将激活后的受精卵迅速置于压力容器中，其不同在于激活50s后开始施压，当靶压力达到38～43Mpa时停止施压，持续5min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞73％，苗种成活率≥25％，三倍体诱导率62％。
实施例8与实施例7相似，其不同在于水温为23～25℃，激活55s后开始施压，当靶压力达到43～49Mpa时停止施压，持续10min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞69％，苗种成活率≥20％，三倍体诱导率88％。
实施例9与实施例7相似，其不同在于激活60s后开始施压，当靶压力达到49～56Mpa时停止施压，持续20min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞21％，苗种成活率＞15％，三倍体诱导率85％。
实施例10先将性成熟的双斑东方鲀亲鱼进行催产，采用干法受精，水温为20～21℃，pH值7.8～8.0，将激活后的受精卵迅速置于压力容器中，于激活30s后开始施压，当靶压力达到38～41Mpa时停止施压，持续5min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞91％，苗种成活率≥45％，三倍体诱导率36％。
实施例11与实施例10相似，其不同在于持续10min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞70％，苗种成活率≥26％，三倍体诱导率69％。
实施例12与实施例10相似，其不同在于持续20min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞63％，苗种成活率≥50％，三倍体诱导率66％。
实施例13先将性成熟的双斑东方鲀亲鱼进行催产，采用干法受精，水温为20～21℃，pH值7.8～8.0，将激活后的受精卵迅速置于压力容器中，于激活60s后开始施压，当靶压力达到49～51Mpa时停止施压，持续5min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞73％，苗种成活率≥28％，三倍体诱导率100％。
实施例14
与实施例13相似，其不同在于施压后持续10min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞38％，苗种成活率≥15％，三倍体诱导率100％。
实施例15与实施例13相似，其不同在于施压后持续20min后降压，即完成静水压法的诱导。实验结果表明，孵化率＞13％，苗种成活率＞10％，三倍体诱导率85％。
权利要求
1.双斑东方鲀三倍体诱导方法，其特征在于其步骤为1)采用人工受精，用家禽尾翅羽毛将成熟亲鱼挤出的精子与卵混合；2)在精子与卵混合后的受精卵中加入海水并搅拌，激活受精卵；3)将激活后的受精卵迅速放入压力容器，于激活后30～60s开始施压，施压达到靶压力38～56MPa时停止施压，水温15～25℃，pH值7.5～8.5；持续5～20min后降压，完成静水压法的三倍体诱导。
2.如权利要求1所述的双斑东方鲀三倍体诱导方法，其特征在于所述的水温为19～21℃。
3.如权利要求1所述的双斑东方鲀三倍体诱导方法，其特征在于所述的pH值8.0～8.2。
4.如权利要求1所述的双斑东方鲀三倍体诱导方法，其特征在于所述的靶压力为49～51MPa时停止施压。
全文摘要
双斑东方鲀三倍体诱导方法，涉及一种鱼类三倍体的诱导，尤其是涉及一种采用静水压法诱导双斑东方鲀三倍体。提供一种结果纯正，孵化率、诱导率和苗种成活率高，具有便于现场操作、安全可靠、简便易行等优点的诱导双斑东方鲀三倍体的方法。步骤为采用人工受精，用家禽尾翅羽毛将成熟亲鱼挤出的精子与卵混合；在精子与卵混合后的受精卵中加入海水并搅拌，激活受精卵；将激活后的受精卵迅速放入压力容器，于激活后30～60s开始施压，施压达到靶压力38～56MPa时停止施压，水温15～25℃，pH值7.5～8.5；持续5～20min后降压，完成静水压法的三倍体诱导。
文档编号A01K61/00GK1836504SQ20061007697
公开日2006年9月27日 申请日期2006年4月13日 优先权日2006年4月13日
发明者丁少雄, 尤颖哲, 蔡葆青, 陈何东 申请人:厦门大学