专利名称：：拟盘多毛孢毒素在除草剂中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及拟盘多毛孢毒素的用途，尤其涉及在除草剂领域中的用途。
背景技术：
：拟盘多毛孢[尸"to/o"o戸^gwe//m7(Desm)Stey.]是一种植物病原真菌，可以引起毛竹叶斑病和杉木縮顶病等多种病害。该病害对寄主植物具有很强的破坏作用，能造成寄主植物大量落叶。这己为公众所熟知。近年来，从真菌代谢产物中分离鉴定除草活性物质，直接用于杂草防除或模拟活性物质结构，人工合成除草剂，己成为杂草防除研究和微生物除草剂开发的热点领域。通过检索相关资料，未见以拟盘多毛孢粗毒素为主要成分的生物源除草剂剂型的相关报道。
发明内容本发明的目的在于提供拟盘多毛孢毒素的新用途，即在除草剂中的应用。为了更好地理解本发明的实质，下面将拟盘多毛孢毒素应用于除草的实验结果来说明其在除草剂领域中的新用途。将保存于PDA斜面上的拟盘多毛孢菌株接种于平板上，所述的PDA斜面其组成为马铃薯200g，琼脂20g，葡萄糖20g，水1000mL。在253(TC黑暗条件下培养，待菌落约4)80mm时，用4>5mm无菌打孔器切取菌落外缘菌丝制备成菌饼。将含马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000mL的PD培养基或含玉米粉200g，葡萄糖20g，水1000mL的玉米粉培养基或含玉米粉100g，黄豆粉100g，葡萄糖20g，水1000mL的玉米—黄豆粉培养基装于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接种菌饼3块，在转速为150200r/min、2530。C黑暗条件下振荡培养15天，将拟盘多毛孢培养液用双层脱脂棉纱布滤去菌丝，即得到粗毒素培养滤液，取粗毒素培养滤液，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，'合并萃取后的乙酸乙酯并进行浓縮近干，然后用甲醇定容至总体积的1/51/8，即得到粗毒素，然后，向粗毒素中加入表面活性剂1601即三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型，余量用水补齐，最后充分混匀即可。表面活性剂1601的分子结构式如下CH3—CH—O(EO)n(PO)m(EO)pH」31601采用茎叶处理法对其进行除草生物活性测定。具体方法为在口径07cm、高10cm的塑料杯中，杯底有3个0O.2cm的孔，装入8cm深的蛭石，在每杯中分别均匀地播种已发芽的稗草、或马唐、或牛筋草、或狗尾草、或虎尾草种子25粒，然后覆盖lcm厚的蛭石，将播种后的塑料杯转入瓷盘中，同时保持约0.5cm的水层，置于温度25°C、光照强度为3800LX、相对湿度70%条件下进行培养，待杂草生长至约35cm时供试验用。将所得到的拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂用水稀释不同倍数后用喉头喷雾器均匀喷洒，以杂草叶片湿润为止，以清水为对照，每个处理重复3次，在培养杂草生长的条件下培养48小时后，用目测法观察抑制作用。其分级标准为生长抑制率同对照为0级；生长抑制率小于25。％为1级；生长抑制率在25%50%为2级；生长抑制率在50%75°/。为3级；生长抑制率在75%95%为4级；生长抑制率在95%以上为5级。本申请人将所得的35%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂进行防除棉花田杂草的田间药效试验，所得到的拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂的用量为200mL/667m2，以山东京博农化有限责任公司生产的5。％精喹禾灵乳油为对照药剂，其用量为100mL/667m2，同时设清水为空白对照。施药方法为在棉花田行间定向茎叶喷雾处理，所用喷雾器为工农16型手动喷雾器，喷水量为30L/667m2。试验地设在保定市郊的四平庄村，试验地地势平坦，肥力一致，播种密度为3000株/667m2。田间主要杂草有稗草、马唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等。棉花于2007年4月15日播种，待株高约1520cm时进行药效试验，供试棉花品种为冀2000。在每个小区中，按棋盘式随机取5个调査-点，每点面积为0.25m2，于施药前和施药后2天、3天、10天调査各处理区杂草种类和杂草株数，每个处理重复3次。按下列公式计算防效防除效果(％)=(1—TaXCVTbXCa)X100。其中i;为处理区防治后残存的杂草株数；Tb为处理区防治前残存的杂草株数；Ca为对照区防治后残存的杂草株数；Cb为对照区防治前残存的杂草株数。结果见表l。表135%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对棉花田杂草的防除效果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>田间试验结果表明35%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对棉花田杂草具有较好的防除效果，施药后2天和3天的防效分别为78.5%和82.6%，而5%精喹禾灵乳油的防效仅为10.5%禾[113.40%，由此可见，35%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对杂草防除的速效性要高于5%精喹禾灵乳油；35。％拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂10天的防效为90.6%，5%精喹禾灵乳油10天的防效为94.6%，但从田间目测结果来看，利用本发明的除草剂对棉花田中的杂草具有较好的控制作用。35%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对供试的棉花品种没有药害。采用茎叶处理法的试验结果表明，本发明的拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对稗草、马唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等杂草具有较好的防治效果。拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂对稗草、马唐的抑制作用最强，其抑制程度均为5级；对牛筋草、狗尾草、虎尾草的抑制程度为45级，而清水对照对供试杂草的生长没有抑制作用。从以上结果，可以得出本发明的优点在于本发明对拟盘多毛孢粗毒素发掘了新的用途，开拓了一个新的应用领域；本发明的拟盘多毛孢粗毒素应用在除草剂中，除草效果明显，预示着良好的药用前景-具体实施例方式为了更清楚的理解本发明，以下通过申请人给出的技术方案所完成的具体实施例对本发明作进一步的详细描述，这些仅是本发明较好的实施例，但不限于这些实施例。实施例1:将本发明人保存的拟盘多毛孢菌株接种于PDA平板上，在253(TC黑暗条件下培养，待菌落约争80mm时，用无菌打孔器(45mm)切取菌落外缘菌丝制备成菌饼。将PD培养基装于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接种菌饼3块，在150r/min25"C黑暗条件下培养15天。将拟盘多毛孢培养液用双层脱脂棉纱布滤去菌丝，即得到粗毒素培养滤液。取3000mL粗毒素培养滤液，分别用1500mL、1000mL、500mL的乙酸乙酯进行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并进行浓縮近干，然后用甲醇定容至600mL，即得到粗毒素。将100g的1601加入到200mL的粗毒素中，然后加入700mL的水，充分搅拌均匀后得到20。％拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂1000mL。实施例2:将本发明人保存的拟盘多毛孢菌株接种于PDA平板上，在253(TC黑暗条件下培养，待菌落约4)80mm时，用无菌打孔器((J)5mm)切取菌落外缘菌丝制备成菌饼。将玉米粉培养基装于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接种菌饼3块，在150r/min25。C黑暗条件下培养15天。将拟盘多毛孢培养液用双层脱脂棉纱布滤去菌丝，即得到粗毒素培养滤液。取5000mL粗毒素培养滤液，分别用2500mL、1500mL、lOOOmL的乙酸乙酯进行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并进行浓縮近干，然后用甲醇定容至lOOOmL，即得到粗毒素。将120g的1601加入到350mL的粗毒素中，然后加入530mL的水，充分搅拌均匀后得到35%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂1000mL。取10mL的拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂和拟盘多毛孢粗毒素密封于试管中并置于54'C士2"C的恒温条件下贮存14天，然后将经热贮后的水剂样品和粗毒素利用茎叶处理法对4叶期稗草进行除草生物活性测定。试验见结果见表2，试验结果表明拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂和拟盘多毛孢粗毒素经热贮后都有不同程度的生物活性降低现象，但水剂的生物活性降低程度要明显低于粗毒素。由此可见，将拟盘多毛孢粗毒素加工成水剂后不仅除草生物活性明显增强，而且提高了拟盘多毛孢粗毒素的热贮稳定性。表2拟盘多毛孢粗毒素水剂和拟盘多毛孢粗毒素热贮前后对稗草的生物活性测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>将本发明人保存的拟盘多毛孢菌株接种于PDA平板上，在253(TC黑暗条件下培养，待菌落约(^Omm时，用无菌打孔器(4)5mm)切取菌落外缘菌丝制备成菌饼。将玉米一黄豆粉培养基装于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接种菌饼3块，在150r/min25。C黑暗条件下培养15天。将拟盘多毛孢培养液用双层脱脂棉纱布滤去菌丝，即得到粗毒素培养滤液。取4000mL粗毒素培养滤液，分别用2000mL、1000mL、lOOOmL的乙酸乙酯进行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并进行浓縮近干，然后用甲醇定容至800mL，即得到粗毒素。将150g的1601加入到500mL的粗毒素中，然后加入350mL的水，充分搅拌均匀后得到50%拟盘多毛孢粗毒素除草剂水剂1000mL。分别取实施例1、实施例2、实施例3的除草剂水剂采用茎叶处理法对其进行除草生物活性测定。具体方法为在口径07cm、高10cm的塑料杯中，杯底有3个00.2^11的孔，装入8cm深的蛭石，在每杯中分别均匀地播种已发芽的稗草种子25粒，然后覆盖lcm厚的蛭石，将播种后的塑料杯转入瓷盘中，同时保持约0.5cm的水层，置于温度25°C、光照强度为3800LX、相对湿度70%条件下进行培养，待杂草生长至约35cm时供试验用。用喉头喷雾器均匀喷洒各药剂处理，以杂草叶片湿润为止，以清水为对照，每个处理重复3次，在培养杂草生长的条件下培养48小时后测量各处理的杂草鲜重(g)，按下列公式计算生长抑制率(％)。供试验用的实施例1、实施例2、实施例3所得到除草剂水剂的稀释倍数依次为50倍、87.5倍、125倍。尘长抑制率"/)—对照组杂草鲜重(g)—处理组杂草鲜重(g)><inn土长抑制车--对照组杂草鲜重(g)-X100试验结果表明将上述试验中所得到的20%、35%和50%的拟盘多毛孢粗毒素水剂依次稀释成50倍、87.5倍和125倍的药液处理马唐，48小时后对稗草的生长抑制率依次为75.4%、93.5%和88.6%。试验结果表明将拟盘多毛孢粗毒素加工成35。％水剂效果最好。权利要求1.拟盘多毛孢毒素在除草剂中的应用。全文摘要本发明涉及拟盘多毛孢毒素的用途，尤其涉及在除草剂领域中的用途。利用该产品制成的除草剂经水稀释后喷洒，对稗草、马唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等杂草具有较好的防治效果。可以得出本发明的优点在于本发明对拟盘多毛孢粗毒素发掘了新的用途，开拓了一个新的应用领域；本发明的拟盘多毛孢粗毒素应用在除草剂中，除草效果明显，预示着良好的药用前景。文档编号A01N63/00GK101371666SQ20071013924公开日2009年2月25日申请日期2007年8月21日优先权日2007年8月21日发明者剑张,张金林,董晔欣申请人:董晔欣