专利名称：一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法，具体地说是有 机铬元素饲料添加剂一蚯顿小肽铬的其生产方法，属于水产配合饲料技术领 域。
背景技术：
蚯蚵俗称曲蟮，中药称地龙，是属于环节动物门寡毛纲(Olgochaeta) 的一类低等动物，目前全世界已知有3000余种，在我国共有13属，我国的 蚯蚓种类大约有几百种，具有很高的药用价值，是我国医药宝库中珍品。李 时珍在《本草纲目》中曾经记载了蚯弼l的药用价值，它可以配制40多种中药， 用蚯顿粪配制的药方有21种；所治病症有伤寒热结，风热头痛、惊风、尿 闭、历节风痛、口舌糜烂、眼赤喉肿、秃疮瘰疬等。主取其清热、镇惊、利 尿、通络之功效。
近年来发现，蚯蚓含蚓激酶，对心血管疾病有较好的治疗效果。蚯蚓酶 不仅能激活纤维蛋白溶解酶而溶解血栓，更可直接溶解纤维蛋白。临床治疗 血栓病有效率达80%以上，蚯蚓酶还有降低血液粘度，抑制血小板凝集、抗 凝血，促进血流通畅等作用，对中风后遗症、动脉硬化、高血压和高血粘度 症等有治疗作用。蚓激酶己被开发成药，服用方便、安全，不会像链激酶， 脲激酶等药易引起高纤溶酶血症导致大出血。
蚯蚓富含蛋白质，脂肪和碳水化合物，粗蛋白含量高达72%，并含有人 体所需的氨基酸、维生素和微量元素，能作动物性词料及生产药品和化妆品。 目前由于科技水平所限，尚不能将蚯蚓体内的某些超标重金属分离出来而限 制了人类直接食用。但是将蚯蚓作为蓄禽及水产动物的饵料，它所发挥的作 用可能比激素还大，特别是它惊人的繁殖速度，决定了它是优质、廉价、绿 色的饵料。
蚯虫引粪是一种很好的生物肥，含有丰富的氮、磷、钾、腐殖质、有机质 及镁、硼、镍、锰等作物所需的微量元素，是水果、花卉、蔬菜和苗圃的廉 价高效肥料，并且养殖蚯蚓，可利用有机废料(如禽畜粪便、垃圾、植物 槁柑、糖渣、食用苗渣、酒糟等)成本低，方法简单，促进了资源的循环。 因此蚯蚓具有重要的作用，需求量大增，受到大家重视。
铬是动物的必需微量元素，其最重要的生理功能是三价铬作为葡萄糖耐
量因子(GTF)的活性成分与胰岛素发挥协同生理功能，参与碳水化合物、 脂类、蛋白质和核酸代谢，在降低鱼体应激、提高免疫力方面有特殊作用， 而且有改善生产性能、提高肉制品质、促进鱼体生长。
应激可导致动物糖代谢、矿物质代谢发生一系列改变，导致糖原降解和 糖异生作用加强。葡萄糖利用的加强会导致组织铬动员增加并最终排出体外， 在此情况下补充络可以保护动物不致于因应激而损失某些微量元素(锌、铜、 锰铁等)，因而给应激动物补铬能够减少动物对锌、铜等重要微量元素的需要 量。 一方面，动物在应激情况下、通过下丘脑一垂体一肾上腺皮质轴，使肾 上腺皮质分泌皮质醇大为加强，皮质醇有抑制生长和免疫功能的作用；同时 动物交感神经兴奋，使肾上腺髓质部释放大量的儿茶酚胺，且胰高血糖分泌 也大为增加；另一方面，应激又抑制了胰岛素的分泌。许多应激都促进肾上 腺皮质释放糖皮质激素，从而导致机体对糖原合成作用减弱，分解作用加强， 并加速脂肪组织中脂肪的氧化分解、加强糖原的异生，结果是维持血中较高 的血糖水平米满足机体在应激时的能量需要。因为高血糖要求较多的或较高 生物活性的胰岛素来对抗，于是作为胰岛毒协同激素构成的铬势必要被动员。 铬一胆被动员，就不在被重吸收，而是经屎排泄。因此，应激导致铬的需要 量增加，铬可能具有抗应激作用。应激愈强，持续时间愈长，体内铬动员愈 多，铬排出亦愈多，愈易造成铬缺乏；应激时体内皮质激素分泌增加，生长 和免疫功能受抑制，造成生长缓慢和易感疾病，故补铬有预防应激和抗应激 作用，从而提高体液免疫和细胞免疫水平，增强疫苗注射效果。
目前铬源包括无机铬和有机铬两种形式，无机铬有CrCly6H20、 Cr2(S04)3、 Cr(N03)3等，有机铬包括高铬酵母和螯合铬(如烟酸铬、蛋白铬、 氨基酸铬和甲基吡啶羧酸铬)。铬的吸收与化学结合形式有很大的关系，无机 铬比有机铬难吸收，动物对无机铬的吸收率仅为1%-3%，并和采食量成负相 关，而饲料中有机铬的吸收率为10%-25%。总的来说铬的利用率比较低，限 制了其利用。氨基酸螯合物铬的问世，不仅能解决无机盐、有机态盐存在的 难以吸收因而浪费大的问题，使得它在动物体内的吸收率比无机盐可提高 300%，还能使动物摄入这种化合物同时带入两种营养物质(氨基酸和铬微量 元素)，因而氨基酸螯合铬是公认为动物的理想的饲料添加剂。并且以往专利 所述的螯合物，由酸水解毛发、猪血等动物蛋白分别同钙、镁、锌、铜和钴 等二价金属螯合而得，得到的是水溶性螯合物，其不足之处在于分离出水
溶性螯合的物同时，要损失一部分非水溶性螯合物，同时分离工艺设备复杂、 能耗高、产品成本高。本研究则利用蚯蚓自身酶，以酶法水解蛋白后，与铬 螯合反应，并以吸附剂菌体蛋白吸附螯合反应液，能耗低、工艺品简单、生 产成本低，而且原料(蚯蚓)由有机废物养殖所得，易大量供应。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处，从而提供一种能提高鱼体免疫与 抗氧化能力，提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力， 可提高铬的利用率，且能补充一些小肽营养，改善饲料适口性，提高鱼体抗 应激能力，促进鱼体生长的抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法。
按照本发明提供的技术方案， 一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方 法采用以下工艺步骤
1、 将活蚯蚓洗净，让其尽量吐出体内的食物残渣，称取500 1000g蚯 蚓加入1.5 3L水，用高速捣碎机捣碎，高速捣碎机转速为15000 20000 转/分，捣碎时间为3 5分钟；
2、 将蚯蝴捣碎物料混合均匀，用0.1mol/L的盐酸或氢氧化钠调pH值6 8，在温度为40 55-C条件下自溶酶解反应2 4小时制得蚯蚓小肽液；
3、 将蚯蚓小肽液用100 11(TC沸水浴加热灭活10 15分钟，然后在室 温内放置30 60分钟，经离心10 30分钟取上清液分装、密封备用，获得 小肽浓縮肽液；
4、 取蚯蚓小肽浓縮肽液40 50重量°/。 (2000 3000g)用柠檬酸调pH 值2 4，在温度为70 100。C条件下，加入三氯化铬(CrCl3'6H20) 5 10 重量％ (100g-300g)螯合反应20 60分钟；经室温25'C冷却灭菌获得蚯顿 小肽铬螯合物；
5、 将蚯蚓小肽铬酸螯合物真空浓縮，真空度为60 90kPa，蒸发掉45 55重量％水份(800g-2000g)，后加入等量菌体蛋白粉45 55重量％
(800g-2000g)吸附，并进行喷雾干燥处理，干燥温度50 70°C;干燥时
间30 卯分钟；水分含量8 12%;
6、 最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎，粉碎粒度150 178um，制成80 110目蚯弼l小肽铬酸螯合物干粉。
7本发明蚯顿小肽铬螯合物投喂鱼体试验56d。 蚯蚓小肽液酶解产物分子量分布测定-
根据蛋白质完全水解为游离氨基酸后的平均分子量为150Da左右，此时
的a-NH2/TN从理论上为100%，当a-NH2/TN为50%时，平均分子量则约为 300Da，获得二肽与三肽的混合溶液，后以Waters 600高效液相色谱，采用 标准曲线法测定酶解样品的相对分子质量。分析条件在TSKgd2000 SWXL 300mmx7.8mm色谱柱3(TC下，以乙腈/水/三氟乙酸，45/55/0.1 (V/V)为流 动相，0.5ml/分钟流速UV220nm下测定。分子量校正曲线所用标准品为细 胞色素C (MW12500Da)、抑肽酶(MW6500Da)、杆菌酶(MW1450Da)、 乙氨酸一乙氨酸一酪氨酸一精氨酸(MW451Da)、乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸 (MW189Da);首先根据标准蛋白质相对分子质量及其对应的出峰时间，求 出相对分子质量标准曲线为LogM = 7.38-0.244 (tl-t2)，再用待测酶解样品 上柱，记录出峰时间，从标准曲线求出酶解样品的相对分子质量，分子量都 在20000Da下，主要分布在3000Da下的小肽混合物，甚至可以获得600以 下的的小肽混合物。
蚯蚓小肽铬螯合物对建鲤鱼抗应激与生长的实验
A、 生长实验建鲤由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试 验选择健康、规格、重量基本一致的建鲤，个体初均重约10g。随机分组， 设有对照组，每组设3个平行试验，每平行组100尾试验鱼。建鲤驯化30d 后投喂0、 12.5mg/kg、 25.0mg/kg、 50.0 mg/kg等不同剂量蚯虫引小肽铬螯合物 56d，测定其生长的影响。
B、 应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。 采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20 尾左右，放养于同样规格容积为20L玻璃缸中。
采用流水系统，水温2rC，流速为2L/分钟，并保证充足的氧气，减少 人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察7d， 统计死亡率。
C、 攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行 组均为IO尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后 的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5xl07Cells/mL。按每 100 g鱼重腹腔注射菌液1.0 mL，后放养于同样规格容积为20 L玻璃缸中， 并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。
D、 结果表明蚯蚓小肽铬螯合物能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高 鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力，提高了铬的利用 率，且能补充一些小肽营养，改善饲料适口性，提高鱼体抗应激能力，促进
鱼体生长。
本发明与已有技术相比具有以下优点
1、 采用蚯蚓自身的复合酶系统酶解，获得主要分子量分布在3000KD下 的小肽混合物，成本低，工艺简单，易于操作。
2、 以往的通过蛋白水解获得的铬螯合主要是氨基酸螯合物，本发明是蚯 蚓小肽与三氯化铬螯合获得的小肽螯合物，提高了铬的利用率。
3、 以往专利所述的蛋白金属螯合物，由酸水解毛发、猪血等动物蛋白分 别同钙、镁、锌、铜和钴等二价金属螯合而得，得到的是水溶性螯合物，其 不足之处在于分离出水溶性螯合的物同时，要损失一部分非水溶性螯合物，
同时分离工艺设备复杂、能耗高、产品成本高。
本研究则利用蚯蚓自身酶，以酶法水解蛋白后，与铬螯合反应，并以吸 附剂百分之百利用螯合反应液，吸收速度快，效率更高，能耗低、工艺品简 单、生产成本低，而且原料(蚯蚓)由有机废物养殖所得，易大量供应。
4、 以往专利的金属元素螯合反应，主要的营养载体吸附剂， 一般是麸皮、 沸石粉等，本发明主要采用的是菌体蛋白为载体，既有载体吸附剂的作用， 又有抗菌促生长的作用。
5、 本发明蚯蚓小肽铬螯合通过动物试验，表明蚯蚓小肽铬螯合能提高鱼 体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗 感染能力，促进鱼体生长。
图1为本发明标准蛋白样品高效液相色谱分析图。 图2为本发明酶解处理条件一下蚯蚓高效液相色谱分析图。 图3为本发明酶解处理条件二下蚯蚓高效液相色谱分析图。
具体实施例方式
下面本发明将结合附图中的实施例作进一步描述
实施案例一本发明一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法采用以 下工艺步骤
将活蚯蚓洗净，让其尽量吐出体内的食物残渣。称取500g蚯蚓加入1.5L 水，用高速捣碎机(捣碎机转速15000转/分、捣碎时间3分钟)捣碎调pH 值6，在4(TC条件下自溶酶解反应2小时，IO(TC沸水浴加热灭活IO分钟， 室温放置30分钟，经离心IO分钟取上清液分装、密封备用，获得蚯蚓小肽 浓縮液；将蚯蚓小肽浓縮液40重量％ (2000g)用柠檬酸调pH值2，在温度 为70。C条件下，加入三氯化铬(CrCl3'6H20) 10重量％ (200g)螯合反应20 分钟；经室温25'C冷却灭菌获得蚯蚓小肽铬螯合物；将蚯蚓小肽铬酸螯合物 真空浓縮，真空度为60kPa，蒸发掉50%左右水分(880g)，后加入等量菌体 蛋白粉50重量％ (880g)吸附，菌体蛋白粉(由河北石家庄宏辉蛋白饲料有 限责任公司生产)，并进行喷雾干燥处理，干燥温度50'C;干燥时间30 分钟；水分含量8%;最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎粒度178um，制成80 目左右的蚯弼l小肽铬酸螯合物干粉。
蚯蚓小肽铬螯合物投喂鱼体生长试验建鲤由中国水产科学院淡水渔业 研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的建鲤600尾，个 体初均重约10g。随机分为2组，其中I组为对照组，II为试验组，每组设3 个平行试验，每平行组100尾试验鱼。建鲤驯化30d后投喂0、 12.5mg/kg蚯 蚓小肽铬螯合物56d，测定其生长的影响。应激试验上述饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂 量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为20 L 玻璃缸中。采用流水系统，水温2rC，流速为2L/分钟，并保证充足的氧气， 减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察 7d，统计死亡率。攻毒实验上述饲养试验结束后在应激前及应激24h后选 择体重基本一致鱼进行攻毒试验，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均 为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜 水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5xl07Cells/mL。按每lOOg 鱼重腹腔注射菌液l.O mL，后放养于同样规格容积为20 L玻璃缸中，并保 证充足的氧气，12.5mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物增重率显著(PO.05)分别提高 了 9.38%;高密度应激ld试验后，12.5mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物显著(P0.05) 降低血液皮质醇浓度10.23%，血糖水平5.28%及丙二醛浓度15.283%，增加 了血液过氧化氢酶14.73%、超氧化物歧化酶活性6.78%;病原菌感染鱼体后， 对照组死亡率为80.0%， 12.5mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物鱼死亡率分别为20.0%; 总的来说，12.5mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提 高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力，日粮中补充了铬，增 加了一些小肽营养，改善饲料适口性，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
实施案例二
将活蚯蚓洗净，让其尽量吐出体内的食物残渣。称取750g蚯蚓加入2.25L 水，用高速捣碎机(捣碎机转速17500转/分、捣碎时间4分钟)捣碎调pH
值7，在50'C条件下自溶酶解反应3小时，100。C沸水浴加热灭活IO分钟， 室温放置45分钟，经离心20分钟取上清液分装、密封备用，获得蚯顿小肽 浓縮液；将蚯蚓小肽浓縮液(45重量％) 2500g用柠檬酸调pH值3，在温度 为85。C条件下，加入三氯化铬(CrCl3.6H20) 8重量％ (200g)螯合反应40分 钟；经室温25。C冷却灭菌获得蚯蚓小肽铬螯合物；将蚯躬l小肽铬酸螯合物真 空浓縮，真空度为75kPa,蒸发掉47%水分(1350g)，后加入等量菌体蛋白 粉47重量％ (1350g)吸附，菌体蛋白粉(由河北石家庄宏辉蛋白饲料有限 责任公司生产)，并进行喷雾干燥处理，干燥温度6(TC;干燥时间60分 钟；水分含量10%;最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎粒度150um,制成100 目左右的蚯蚓小肽铬酸螯合物干粉。
蚯蚓小肽铬螯合物投喂鱼体生长试验建鲤由中国水产科学院淡水渔业 研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的建鲤600尾，个 体初均重约10g。随机分为2组，其中I组为对照组，II为试验组，每组设3 个平行试验，每平行组100尾试验鱼。建鲤驯化30d后投喂0、 25.0mg/kg蚯 蚓小肽铬螯合物56d，测定其生长的影响。应激试验上述饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/kg)，每个剂量组 分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为20L玻 璃缸中。采用流水系统，水温21'C，流速为2L/分钟，并保证充足的氧气， 减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察 7d，统计死亡率。攻毒实验上述饲养试验结束后在应激前及应激24h后选 择体重基本一致鱼进行攻毒试验，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均 为IO尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜 水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5xl07CeUs/ml。按每lOOg 鱼重腹腔注射菌液l.Oml，后放养于同样规格容积为20L玻璃缸中，并保证 充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。结果表明与 对照组相比，25.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物增重率显著(P<0.05)分别提高了 12.56%;高密度应激ld试验后，25.0mg/kgg蚯弼l小肽铬螯合物显著(P〈0.05) 降低血液皮质醇浓度12.58%，血糖水平6.38%及丙二醛浓度10.27%，增加了 血液过氧化氢酶12.68%、超氧化物歧化酶活性8.44%;病原菌感染鱼体后， 对照组死亡率为85.0%， 1.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物鱼死亡率分别为14.0%; 总的来说，25.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提 高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力，日粮中补充了铬，增
加了一些小肽营养，改善词料适口性，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。 实施案例三
将活蚯蚓洗净，让其尽量吐出体内的食物残渣。称取1000g蚯蚓加入3.0L 水，用高速捣碎机(捣碎机转速20000转/分、捣碎时间5分钟)捣碎调pH 值8.0，在55'C条件下自溶酶解反应4小时，IO(TC沸水浴加热灭活IO分钟， 室温放置60分钟，经离心60分钟取上清液分装、密封备用，获得蚯蚓小肽 浓縮液；将蚯蚓小肽浓縮液50重量％ (3000g)用柠檬酸调pH值4，在温度 为100。C条件下，加入三氯化铬(CrCl3.6H20) 5重量％ (150g)螯合反应60 分钟；经室温25'C冷却灭菌获得蚯蚓小肽铬螯合物；将蚯弼l小肽铬酸螯合物 真空浓縮，真空度90kPa，蒸发掉45%水分(1900g),后加等量菌体蛋白粉 45重量％ (1900g)吸附，并进行喷雾干燥处理，干燥温度70°C;干燥时 间90分钟；水分含量12%;最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎粒度124um, 制成120目左右的蚯蚓小肽铬酸螯合物干粉。
蚯蚓小肽铬螯合物投喂鱼体生长试验建鲤由中国水产科学院淡水渔业 研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的建鲤600尾，个 体初均重约llg。随机分为2组，其中I组为对照组，II为试验组，每组设3 个平行试验，每平行组100尾试验鱼。建鲤驯化30d后投喂0、 50.0mg/kg蚯 蚓小肽铬螯合物56d，测定其生长的影响。应激试验上述饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)，每个剂量组 分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为20L玻 璃缸中。采用流水系统，水温2rC，流速为2L/分钟，并保证充足的氧气， 减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察 7d，统计死亡率。攻毒实验上述饲养试验结束后在应激前及应激24h后选 择体重基本一致鱼进行攻毒试验，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均 为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜 水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5xl07cdlS/mL。按每lOOg 鱼重腹腔注射菌液l.OmL，后放养于同样规格容积为20L玻璃缸中，并保证 充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。结果表明与 对照组相比，50.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物增重率显著(P<0.05)分别提高了 13.14%;高密度应激ld试验后，2.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物显著(PO.05) 降低血液皮质醇浓度11.44%，血糖水平5.78%及丙二醛浓度9.87%,增加了 血液过氧化氢酶14.66%、超氧化物歧化酶活性9.78%;病原菌感染鱼体后，
对照组死亡率为79.0。/。，50.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物鱼死亡率分别为10.0%; 总的来说，50.0mg/kg蚯蚓小肽铬螯合物能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提 高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力，日粮中补充了铬，增 加了一些小肽营养，改善词料适口性，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
权利要求
1、一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法，其特征是采用以下工艺步骤(1)、将活蚯蚓洗净，让其尽量吐出体内的食物残渣，然后在蚯蚓中加入水，用高速捣碎机捣碎，高速捣碎机转速为15000～20000转/分，捣碎时间为3～5分钟；(2)、将蚯蚓捣碎物料混合均匀，调pH值6～8，在温度为40～55℃条件下自溶酶解反应2～4小时制得蚯蚓小肽液；(3)、将蚯蚓小肽液用100～110℃沸水浴加热灭活10～15分钟，然后在室温内放置30～60分钟，经离心10～30分钟取上清液分装、密封备用，获得小肽浓缩肽液；(4)、取蚯蚓小肽浓缩肽液40～50重量％，调pH值2～4，在温度为70～100℃条件下，加入三氯化铬5～10重量％，螯合反应20～60分钟；经室温冷却灭菌获得蚯蚓小肽铬螯合物；(5)、将蚯蚓小肽铬酸螯合物真空浓缩水份45～55重量％，再加入等量菌体蛋白粉45～55重量％吸附，并进行喷雾干燥处理，干燥温度50～70℃；干燥时间30～90分钟；水分含量8～12％；(6)、最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎，制成80～110目蚯蚓小肽铬酸螯合物干粉。
2、 根据权利要求1所述的一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法， 其特征在于所述的粉碎粒度为150 178um。
3、 根据权利要求1所述的一种抗应激药物蚯蝴小肽螯合铬的制备方法， 其特征在于所述调pH值用O.lmol/L的盐酸或氢氧化钠或柠檬酸。
4、 根据权利要求1所述的一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合袼的制备方法， 其特征在于所述真空度为60 90 kPa。
全文摘要
本发明涉及一种抗应激药物蚯蚓小肽螯合铬的制备方法，特征是将活蚯蚓洗净，在蚯蚓中加入水，用高速捣碎机捣碎；再将蚯蚓捣碎物料混合均匀自溶酶解反应制得蚯蚓小肽液；蚯蚓小肽液用沸水浴加热灭活，经离心获得小肽浓缩肽液；取蚯蚓小肽浓缩肽液，加入三氯化铬螯合反应；经室温冷却灭菌获得蚯蚓小肽铬螯合物；蚯蚓小肽铬酸螯合物经真空浓缩，再加入菌体蛋白粉吸附，并进行喷雾干燥处理，最后将蚯蚓小肽铬酸螯合物粉碎，制成蚯蚓小肽铬酸螯合物干粉。本发明能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力，可提高铬的利用率，且能补充小肽营养，改善饲料适口性，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
文档编号A23K1/10GK101356954SQ20081019561
公开日2009年2月4日 申请日期2008年8月30日 优先权日2008年8月30日
发明者波 刘, 跑 徐, 戈贤平, 骏 谢 申请人:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心