喹喔啉基衍生物的制作方法

专利名称：喹喔啉基衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性，并且有用于治疗HCV感染的大环 类。本发明更尤其涉及喹喔啉基大环化合物、含有此类化合物的组合物和使用此类化合物 的方法、以及制备此类化合物的方法。
背景技术：
HCV是引起非甲型、非乙型肝炎的主要原因，并且在发达世界和发展世界中成为越 来越严重的公共健康问题。据估计，全世界超过两亿人受到该病毒感染，超过感染有人免疫 缺陷病毒(HIV)的个体数量近五倍。由于高百分率的个体遭受慢性感染，因此HCV感染的 患者处于发展为肝硬化、随后发展为肝细胞癌和晚期肝病的高风险之中。在西方世界，HCV 是引起肝细胞癌的最普遍的原因，并且使患者需要肝脏移植。抗HCV疗法的开发存在相当大的障碍，其包括但不限于病毒的持久性，病毒在宿 主中复制过程中的遗传多样性，病毒发展为耐药突变体的高发生率，和重现性感染培养系 统和用于HCV复制和发病机理的小动物模型的缺乏。在大多数情况中，如果考虑到感染病 程的温和性肝脏生物学的复杂性，则对可能具有显著副作用的抗病毒药物必须仔细考虑。目前只有两种批准的用于HCV感染的疗法。原始治疗方案通常涉及3-12个月疗 程的静脉内(注射)干扰素_ α (IFN- α )，而新批准的第二代疗法涉及用IFN- α和通常的 抗病毒核苷模拟物(例如利巴韦林)进行共同治疗。这两种疗法都具有干扰素相关的副作 用以及抗HCV感染的低功效。由于现有疗法的耐受性差且功效令人失望，因此仍需要开发 有效的抗病毒药剂，用于治疗HCV感染。在大多数个体受到慢性感染并且无症状，且预后未知的患者群中，希望有效药物 比目前可用的治疗具有显著更小的副作用。丙型肝炎非结构蛋白_3 (NS3)是病毒多蛋白加 工并因此进行病毒复制所需要的蛋白水解酶。虽然存在与HCV感染有关的大量病毒变体， 但NS3蛋白酶的活性位点保持高度保守，因此使得对它的抑制成为有吸引力的干预模式。 最近用蛋白酶抑制剂治疗HIV的成功，支持了抑制NS3是对抗HCV的战役中的关键靶标的 概念。HCV是黄病毒科(flaviridae)型RNA病毒。HCV基因组是有包膜的，并且含有由 大约9600个碱基对组成的单链RNA分子。它编码由大约3010个氨基酸组成的多肽。HCV多蛋白被病毒和宿主肽酶加工成10个分立的肽，其具有各种功能。有三种结 构蛋白C、E1和E2。P7蛋白的功能未知，并且由高度可变的序列组成。有六种非结构性蛋 白。NS2是锌依赖性金属蛋白酶，其与一部分NS3蛋白联合发挥功能。NS3并入两种催化功
11能(从它与NS2的结合中分离):N-末端的丝氨酸蛋白酶功能，其需要NS4A作为辅因子；以 及羧基末端的ATP酶-依赖性解旋酶功能。NS4A是与丝氨酸蛋白酶紧密结合但非共价(结 合)的辅因子。NS3-NS4A蛋白酶负责裂解病毒多蛋白上的四个位点。NS3-NS4A裂解是自催化的， 以顺式形式出现。其余三种水解NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B都以反式形式出现。 NS3是丝氨酸蛋白酶，在结构上可将其归类为胰凝乳蛋白酶样蛋白酶。尽管NS丝氨酸蛋白 酶本身具有蛋白水解活性，但就催化多蛋白裂解而言，HCV蛋白酶不是有效的酶。已表明， NS4A蛋白的中央疏水区域对这种增强作用是需要的。NS3蛋白与NS4A形成复合物似乎为 加工事件、增强所有位点的蛋白水解功效所必需。开发抗病毒药剂的一般策略是使病毒编码的酶(包括病毒复制必需的NS3)失活。 S.Tan, A.Pause, Y. Shi, N. Sonenberg, Hepatitis CTherapeutics Current Status and Emerging Strategies,Nature Rev. DrugDiscov. 1,867-881(2002)综述了前直接针对发现 NS3蛋白酶抑制剂的努力。发明概述本发明涉及改进的喹喔啉基大环化合物和其药学上可接受的盐、酯或前药，以及 使用其在需要此类治疗的受治疗者(subject)中治疗丙型肝炎感染的方法。本发明的大 环化合物干扰丙型肝炎病毒的生命周期，并且还用作抗病毒药剂。本发明进一步涉及包含 上述化合物、盐、酯或前药的药物组合物，用于给予患有HCV感染的受治疗者。本发明进一 步以药物组合物为特征，其包含本发明的化合物(或其药学上可接受的盐、酯或前药)和 另一种抗HCV药剂，例如干扰素(例如α-干扰素、β-干扰素、复合干扰素(consensus interferon)、聚乙二醇化的干扰素或白蛋白或其它共轭干扰素)；利巴韦林；金刚烷胺；另 一种HCV蛋白酶抑制剂；或HCV聚合酶、解旋酶或内部核糖体进入位点抑制剂。本发明还 涉及通过给予受治疗者本发明的药物组合物来治疗受治疗者的HCV感染的方法。本发明 进一步涉及药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药以及(in combination with)药学上可接受的载体或赋形剂。在本发明的一个实施方案中，公开了式I或II表示的化合物或其药学上可接的 盐、酯或前药其中 R选自
12 Z是叔丁基或环戊基；表示碳-碳单或双键。 发明详述本发明的第一个实施方案是单独的或与药学上可接受的载体或赋形剂组合的如 上所述的式I表示的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。在一个实施方案中，是单独的或与药学上可接受的载体或赋形剂组合的式III或 IV(如下所述)表示的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。
T、i
(III)或(IV)
其中R、Z和Ar如前面实施方案中所定义。
本发明的代表性化合物包括但不限于下列根据式V的化合物(表1)
14 本发明还以包含本发明化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药的药物组合物为 特征。
可以单独的活性药剂给予本发明化合物，或将本发明化合物与一种或多种药剂联 合使用，以治疗或预防丙型肝炎感染或与HCV感染有关的症状。与本发明化合物或本发明 化合物的组合联合给药的其它药剂包括通过直接或间接机制抑制HCV病毒复制来治疗由 HCV感染所引起的疾病的疗法。这些药剂包括例如宿主免疫调节剂(例如干扰素-a、聚 乙二醇化的干扰素_ a、干扰素_ 0、干扰素_ Y、CpG寡核苷酸等)，或抑制宿主细胞功能的 抗病毒化合物，例如肌苷单磷酸脱氢酶(例如利巴韦林等等)。还包括的是调节免疫功能的 细胞因子。还包括的是疫苗，所述疫苗包含直接对抗HCV的HCV抗原或抗原佐剂组合。还 包括的是药剂，其与宿主细胞组分相互作用，以通过抑制内部核糖体进入位点(IRES)引发 的HCV病毒复制的翻译步骤来阻滞病毒蛋白合成，或阻滞病毒颗粒成熟，并且释放靶向膜 蛋白的离子孔道蛋白(viroporin)家族(例如HCV P7等等)的药剂。与本发明化合物联 合给药的其它药剂包括通过靶向牵涉病毒复制的病毒基因组的蛋白来抑制HCV复制的任 何药剂或药剂组合。这些药剂包括但不限于HCV RNA依赖性RNA聚合酶的其它抑制剂，例 如 W00190121(A2)或美国专利 No. 6，348，587B1 或 W00160315 或 W00132153 中描述的核苷 型聚合酶抑制剂或非核苷抑制剂，例如EP1162196A1或W00204425中描述的苯并咪唑聚合 酶抑制剂，或HCV蛋白酶的抑制剂，例如肽模拟物型抑制剂，例如BILN2061等等，或HCV解 旋酶的抑制剂。与本发明化合物组合给药的其它药剂包括抑制同时感染个体的其它病毒复制的 任何药剂或药剂组合。这些药剂包括但不限于用于由乙型肝炎(HBV)感染所引起的疾病 的疗法，例如阿德福韦、拉米夫定和替诺福韦；或用于由人免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起 的疾病的疗法，例如蛋白酶抑制剂洛匹那韦、茚地那韦、奈非那韦、沙奎那韦、氨普那韦、阿 扎那韦(atazanavir)、替拉那韦(tipranavir)、TMC_114、呋山那韦；逆转录酶抑制剂齐多 夫定、拉米夫定、去羟肌苷、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨、阿巴卡韦、依法韦仑、奈韦拉平、 地拉韦啶、TMC-125 ；整合酶抑制剂:L-870812、S-1360 ；或进入抑制剂恩夫韦肽(T-20)、 T-1249。因此，本发明的一个方面涉及治疗或预防由含有RNA的病毒所引起的感染的方 法，其包括对需要此类治疗的患者共同给予一种或多种选自宿主免疫调节剂和第二种抗病 毒药剂或其组合的药剂，以及治疗有效量的本发明化合物或本发明化合物的组合，或其药 学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。宿主免疫调节剂的例 子是但不限于干扰素_ a、聚乙二醇化的干扰素_ a、干扰素、干扰素_、、细胞因子、疫 苗和包含抗原和佐剂的疫苗，所述第二种抗病毒药剂通过抑制与病毒复制有关的宿主细胞 功能或通过靶向病毒基因组的蛋白来抑制HCV的复制。本发明的其它方面涉及治疗或预防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法，其包 括对需要此类治疗的患者共同给予治疗或减轻HCV感染症状(包括肝硬化和肝炎)的药 剂或药剂组合，以及治疗有效量的本发明化合物或本发明化合物的组合或其药学上可接受 的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。本发明的又一个方面提供治疗或 预防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法，其包括对需要此类治疗的患者共同给予一种 或多种治疗患者的由乙型肝炎(HBV)感染所引起疾病的药剂，以及治疗有效量的本发明化 合物或本发明化合物的组合或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药 的盐或其组合。治疗患者的由乙型肝炎(HBV)感染所引起疾病的药剂可以是例如但不限于
21L_脱氧胸苷、阿德福韦、拉夫米定或替诺福韦替诺福韦或其任何组合。含有RNA的病毒的例 子包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。本发明的又一个方面提供治疗或预防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法， 其包括对需要此类治疗的患者共同给予一种或多种治疗患者的由人免疫缺陷病毒(HIV) 感染所引起疾病的药剂，以及治疗有效量的本发明化合物或本发明化合物的组合或其药 学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。治疗患者的由人免 疫缺陷病毒(HIV)感染所引起疾病的药剂可以包括但不限于洛匹那韦、茚地那韦、尼非那 韦(nelfmavir)、沙奎那韦、氨普那韦、阿扎那韦(atazanavir)、替拉那韦(tipranavir)、 TMC-114、呋山那韦、齐多夫定、拉米夫定、去羟肌苷、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨、阿巴卡 韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉韦啶、TMC-125、L-870812、S-1360、恩夫韦肽(T-20)或T-1249 或其任何组合。含有RNA的病毒的例子包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。另外，本发明提 供本发明化合物或本发明化合物的组合或其治疗可接受的盐形式、立体异构体或互变异构 体、前药、前药的盐或其组合以及一种或多种选自宿主免疫调节剂和第二种抗病毒药剂或 其组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗患者的由含有RNA的病毒(尤其是丙型肝 炎病毒)所引起的感染。宿主免疫调节剂的例子是但不限于干扰素-a、聚乙二醇化的-干 扰素、干扰素、干扰素、细胞因子、疫苗和包含抗原与佐剂的疫苗，所述第二种抗 病毒药剂通过抑制与病毒复制有关的宿主细胞功能或通过靶向病毒基因组的蛋白来抑制 HCV的复制。当用于上述或其它治疗时，一种或多种本发明化合物连同一种或多种本文上面所 定义药剂的组合可以纯形式(在存在此类形式的情况下)、其药学上可接受的盐、前药、前 药的盐或其组合的形式使用。或者，此类治疗剂的组合可以以药物组合物的形式给药，所述 药物组合物含有治疗有效量的感兴趣的化合物或化合物的组合。或它们的药学上可接受的 盐形式、前药或前药的盐，以及一种或多种上文所定义的药剂和药学上可接受的载体。通过 使所述病毒与所述药物组合物接触，类药物组合物可用来抑制含有RNA的病毒(尤其丙型 肝炎病毒(HCV))的复制。另外，此类组合物有用于治疗或预防由含有RNA的病毒(尤其丙 型肝炎病毒(HCV))所引起的感染。因此，本发明的其它方面涉及治疗或预防由含有RNA的病毒(尤其丙型肝炎病毒 (HCV))所引起的感染的方法，其包括对需要此类治疗的患者给予药物组合物，所述药物组 合物包含本发明化合物或本发明化合物的组合或其药学上可接受的盐、立体异构体或互变 异构体、前药、前药的盐或其组合，一种或多种上文所定义的药剂和药学上可接受的载体。当以联合形式给药时，可以将治疗剂配制为同时给予或在预定时段内给予的单独 组合物，或可以以单一单位剂型的形式给予治疗剂。此类联合疗法中所使用的抗病毒药剂包括有效抑制哺乳动物中病毒形成和/或 复制的药剂(化合物或生物制品)，其包括但不限于干扰哺乳动物中病毒形成和/或复制所 必需的宿主或病毒机制的药剂。此类药剂可以选自另一种抗HCV药剂；HIV抑制剂；HAV抑 制剂；和HBV抑制剂。其它抗HCV药剂包括有效削弱或预防丙型肝炎相关症状或疾病的进展的那些药 剂。此类药剂包括但不限于免疫调节剂；HCV NS3蛋白酶的抑制剂；HCV聚合酶的其它抑制 剂；HCV生命周期中的另一种靶标的抑制剂；以及其它抗HCV药剂，包括但不限于利巴韦林、金刚烷胺(amantadine)、左旋韦林(levovirin)和利巴韦林前体(viramidine)。免疫调节剂包括有效提高或增强哺乳动物中免疫系统反应的那些药剂 (化合物或生物制品)。免疫调节剂包括但不限于肌苷单磷酸脱氢酶抑制剂，例如 VX-497(merimepodib, Vertex Pharmaceuticals) ；I 类干扰素；II 类干扰素；复合干扰素； 脱唾液酸干扰素(asialo-interferon)聚乙二醇化的干扰素和共轭干扰素，包括但不限于 与其它蛋白(包括但不限于人白蛋白)共轭的干扰素。I类干扰素是所有与I型受体结合 的干扰素组，包括天然和合成产生的I类干扰素，而II类干扰素都与II型受体结合。I类 干扰素的例子包括但不限于[a]-
-、[A]-、[Q]-和[t]-干扰素，而II类干扰素的 例子包括但不限于干扰素。HCV NS3蛋白酶的抑制剂包括有效抑制哺乳动物中HCV NS3蛋白酶的功能 的药剂(化合物或生物制品)。HCV NS3蛋白酶的抑制剂包括但不限于W099/07733、 W0 99/07734、W0 00/09558、W0 00/09543、W0 00/59929、W003/064416, W0 03/064455、 W0 03/064456、W0 2004/030670、W02004/037855、W0 2004/039833、W0 2004/101602、 W0 2004/101605、W02004/103996、W0 2005/028501、W0 2005/070955、W0 2006/000085、 W02006/007700 和 W0 2006/007708 (都由 Boehringer Ingelheim 申请)、W002/060926、 W0 03/053349、W003/099274、W0 03/099316、W02004/032827、W0 2004/043339、W0 2004/094452、W0 2005/046712、W02005/051410、W0 2005/054430 (都由 BMS 申请)、W0 2004/072243、W02004/093798、W0 2004/113365、W0 2005/010029 (都由 Enanta 申请)、 W02005/037214 (Intermune)和 W0 2005/051980 (Schering)中描述的那些化合物，以及鉴 定为 VX-950、ITMN-191 和 SCH 503034 的候选物。HCV聚合酶的抑制剂包括有效抑制HCV聚合酶的功能的药剂(化合物或生物制 品)。此类抑制剂包括但不限于HCV NS5B聚合酶的非核苷和核苷抑制剂。HCV聚合酶的 抑制剂的例子包括但不限于 W0 02/04425、W003/007945、W0 03/010140、W0 03/010141、 W0 2004/064925、W02004/065367、W0 2005/080388 和 W0 2006/007693 (都由 Boehringer Ingelheim 申请)、TO 2005/049622 (Japan Tobacco)、W0 2005/014543 (JapanTobacco)、 W0 2005/012288 (Genelabs)、W0 2004/087714 (IRBM)、ff003/101993 (Neogenesis)、W0 03/026587 (BMS)、W0 03/000254 (Japan Tobacco)和 W0 01/47883 (Japan Tobacco)中描述 的那些化合物、以及临床候选物XTL-2125、HCV 796、R-1626和NM 283。HCV生命周期中的另一种靶标的抑制剂包括不通过抑制HCV NS3蛋白酶的功能而 有效抑制HCV的形成和/或复制的药剂(化合物或生物制品)。此类药剂可以干扰HCV的 形成和/或复制所必需的宿主或HCV病毒机制。HCV生命周期中的另一种靶标的抑制剂包 括但不限于进入抑制剂；抑制选自解旋酶、NS2/3蛋白酶和内部核糖体进入位点(IRES)的 靶标的药剂；和干扰其它病毒靶标(包括但不限于NS5A蛋白和NS4B蛋白)的功能的药剂。可能出现可同时被丙型肝炎病毒和一种或多种其它病毒感染的患者，所述其它病 毒包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)和乙型肝炎病毒(HBV)。因此 还考虑通过共同给予按照本发明的化合物以及HIV抑制剂、HAV抑制剂和HBV抑制剂中的 至少一种来治疗此类同时感染的联合疗法。根据又一个实施方案，本发明的药物组合物可以进一步包含一种或多种HCV生命 周期中的其它靶标的抑制剂，所述其它靶标包括但不限于解旋酶、聚合酶、金属蛋白酶和内
23部核糖体进入位点(IRES)。根据另一个实施方案，本发明的药物组合物可以进一步包含另一种抗病毒、抗细 菌、抗真菌或抗癌药剂、或免疫调节剂或另一种治疗剂。根据再一个实施方案，本发明包括通过给予所述受治疗者有效量的本发明化合物 或其药学上可接受的盐、酯或前药在需要此类治疗的受治疗者中治疗病毒感染(例如但不 限于丙型肝炎感染)的方法。根据其它实施方案，本发明包括通过给予所述受治疗者抗HCV病毒有效量或抑制 量的本发明药物组合物在需要此类治疗的受治疗者中治疗丙型肝炎感染的方法。本发明的另外实施方案包括通过使生物样品与本发明的化合物接触来处理生物 样品的方法。本发明的又一方面是制备本文所描述的任何化合物的方法，该方法使用本文所描 述的任何合成方法。紅以下列出的是用于描述本发明的各种术语的定义。这些定义适用于在贯穿本说明 书和权利要求中使用的术语，除非在特定情况下另有限定，无论是单独限定还是作为较大 基团的一部分限定。术语“病毒感染”是指病毒进入细胞或组织中，例如丙型肝炎病毒(HCV)。通常，病 毒的进入还与复制有关。可通过使用例如酶免疫分析测定生物流体样品(例如血液)中的 病毒抗体滴度来确定病毒感染。其它合适的诊断方法包括基于分子的技术，例如RT-PCR、 直接杂交捕获试验、基于核酸序列的扩增等等。病毒可以感染器官(例如肝脏)，并导致疾 病，例如肝炎、肝硬化、慢性肝病和肝细胞癌。术语“抗癌药剂”是指能够预防或抑制癌症发展的化合物或药物。此类药剂的例 子包括顺钼、放线菌素D、多柔比星、长春新碱、长春碱、依托泊苷、安吖唳、米托蒽醌、替尼泊 苷(tenipaside)、紫杉醇、秋水仙碱、环孢素A、吩噻嗪类或硫杂蒽类。术语“抗真菌剂”应用来描述除了 3-AP、3_AMP或3_AP和3-AMP的前药之外的 可用于治疗真菌感染的本发明化合物。本发明的抗真菌剂包括例如特比萘芬、氟康唑、 伊曲康唑、泊沙康唑(posaconazole)、克霉唑、灰黄霉素、制霉菌素、托萘酯、卡泊芬净 (caspofungin)、两性霉素B、脂质体两性霉素B和两性霉素B脂质复合物。术语“抗细菌剂”是指由微生物产生的抑制其它微生物生长的天然存在的抗生素， 和在实验室中合成或修饰的具有灭菌或抑菌活性的药剂，例如内酰胺抗细菌药剂、糖 肽类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类和氨基糖苷类。通常，如果抗细菌剂是抑菌剂，则指 该药剂基本终止细菌细胞生长(但不杀死细菌)；如果该药剂是杀菌剂，则指该药剂杀死细 菌细胞(并且可以在杀死细菌之前终止其生长)。术语“免疫调节剂”是指改变受治疗者的体液或细胞免疫系统的工作的任何物质。 此类免疫调节剂包括肥大细胞介导的炎症的抑制剂、干扰素、白介素、前列腺素、留体、皮质 甾体、集落刺激因子、趋化因子等等。本文所描述的化合物含有一个或多个不对称中心，并由此产生对映体、非对映体 及其它立体异构形式，可根据绝对立体化学将其定义为(R)_或(S)-，或对于氨基酸来说， 定义为(D)-或(L)-。本发明旨在包括所有此类可能的异构体，以及它们的外消旋体和光学
24纯形式。可以通过上述程序从它们各自的旋光活性前体来制备旋光异构体，或通过外消旋 混合物的拆分来制备旋光异构体。可以在拆分试剂的存在下，通过本领域技术人员已知的 色谱或重复结晶或这些技术的一些组合来进行拆分。关于拆分的进一步细节可在Jacques 等人，Enantiomers, Racemates，and Resolutions (John Wiley&Sons, 1981)中找到。当本 文所描述的化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，否则化合物有 意包括E和Z几何异构体两者。同样，还有意包括所有的互变异构形式。除非文中如此声 明，否则本文出现的碳_碳双键的构型只是为方便起见而选择，并无意指定特定的构型；因 此，本文任意描述为反式的碳-碳双键可能是顺式、反式或该两者的任何比例的混合物。本文使用的术语“受治疗者”是指哺乳动物。因此受治疗者是指例如狗、猫、马、牛、 猪、豚鼠等等。优选的受治疗者是人。当受治疗者是人时，受治疗者在本文中可被称为患者。本文使用的术语“药学上可接受的盐”是指通过本发明方法所形成的化合物的那 些盐，其在合理医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺 激性、过敏反应等等，并且与合理的益处/风险比率相称。药学上可接受的盐在本领域是众 所周知的。本文使用的术语“氨基保护基”是指本领域已知的在合成程序过程中保护氨基对 抗不希望有的反应的不稳定化学部分。所述合成程序之后，可以选择性地除去本文所描述 的氨基保护基。T. H. Greene 禾口 P. G. M. ffuts, Protective Groups in OrRanic Synthesis, 第3版，John ffiley&Sons, NewYork(1999)中一般性描述了已知的氨基保护基。氨基保护 基的例子包括但不限于叔丁氧羰基，9-芴基甲氧羰基，苄氧羰基等。本文使用的术语“药学上可接受的酯”是指通过本发明方法所形成化合物的 酯，其在体内水解，并且包括容易在人体中分解释放母体化合物或其盐的那些酯。合适 的酯基团包括例如衍生自药学上可接受的脂族羧酸(尤其烷酸、烯酸、环烷酸和烷二酸 (alkanedioie acids))的那些酯，其中每个烷基或烯基部分有利地不超过6个碳原子。具 体酯的例子包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和琥珀酸乙酯。本文使用的术语“药学上可接受的前药”是指通过本发明方法所形成化合物的那 些前药，其在合理的医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触，而没有过度的毒 性、刺激性、过敏反应等等，与合理的益处/风险比率相称，并且有效达到其预期用途，可能 的话，还可以是本发明化合物的两性离子形式。本文使用的“前药”是指可在体内通过代谢 方式(例如通过水解)转化得到本发明的式所描述的任何化合物的化合物。前药的各种形 式在本领域是已知的，例如在下列中所讨论的那些Bundgaard编，Design of Prodrugs, Elsevier (1985) ；Widder 等人编，Methods in Enzymology,第 4 卷，AcademicPress (1985)； Krogsgaard-Larsen 等人编，"Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development,第 5 章，113—191 (1991) ；Bundgaard ^ A Journal of Drug Deliver Reviews, 8 :1_38(1992) ；Bundgaard,J. of Pharmaceutical Sciences,77 :285 et seq. (1988) ；Higuchi禾口Stella编，Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems,American Chemical Society (1975)；禾口 Bernard Testa&Joachim Mayer, "Hydrolysis In Drug And ProdrugMetabolism Chemistry, Biochemistry And Enzymology, " John Wiley andSons, Ltd. (2002)。本文使用的术语“非质子溶剂”是指相对于质子活性呈惰性的溶剂，即，不担当质子供体。实例包括但不限于烃类(例如己烷和甲苯)，例如卤代烃，例如二氯甲烷、二氯乙 烷、氯仿等等；杂环化合物，例如四氢呋喃和N-甲基吡咯烷酮；以及醚，例如二乙醚、二-甲 氧基甲基醚。此类溶剂为本领域技术人员所熟知，并且单独(individual)溶剂或其混合物 可优选用于特定的化合物和反应条件，这取决于以下因素例如试剂的溶解性、试剂的反应 性和优选的温度范围。非质子溶剂的进一步讨论可以在有机化学教科书或在专业专著中找 至丨J，例如 OrRanic Solvents Physical Properties and Methods ofPurification,第 4版， John A. Riddick 等人编，第 II 卷，Techniques of Chemistry Series, John Wiley&Sons, NY, 1986。本文使用的术语“给质子有机溶剂，，或“质子溶剂，，是指倾向于提供质子的溶剂， 例如醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇等等。此类溶剂为本领域技术人员所 熟知，并且单独的溶剂或其混合物可优选用于特定的化合物和反应条件，这取决于以下因 素例如试剂的溶解性、试剂的反应性和优选温度范围。给质子溶剂的进一步讨论可以 在有机化学教科书或在专业专著中找到，例如Organic Solvents Physical Properties and Methodsof Purification, al 4 片反，John A. Riddick 等人编，第 II 卷，Techniques ofChemistry Series, John Wiley&Sons，NY,1986。可以从反应混合物中分离合成的化合物，并且进一步通过诸如柱色谱、高压液 相色谱或重结晶之类的方法进行纯化。另外，可以以改变的(alternate)次序或顺序进 行各种合成步骤，以得到所需要的化合物。另外，本文所描述的溶剂、温度、反应持续时 间等等，只是为了举例说明目的，反应条件的变化可以制备所需要的本发明桥连大环产 物。有用于合成本文所述化合物的合成化学转化和保护基方法学(保护和脱保护)包括 例如描述在下列文献中的那些:R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989) ；T. ff. Greene 禾口 P. G. M. ffuts, Protective Groups inOrganic Synthesis,第 2 版，John Wiley and Sons (1991) ；L. Fieser 禾口 M. Fieser, Fieser and Fieser ' s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1994)； 禾口 L. Paquette 编，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John ffileyand Sons(1995)。可通过本文所描述的合成方式加上各种官能团(functionalities)来修饰本发 明的化合物以增强其选择性生物学特性。此类修饰包括提高对给定生物系统(如血液、淋 巴系统、中枢神经系统)的生物渗透性、提高口服利用度、提高溶解度以允许注射给药、改 变代谢和改变排泄速率的那些修饰。药物组合物本发明的药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的治疗有 效量的本发明化合物。本文使用的术语“药学上可接受的载体”是指无毒的惰性固体、半固 体或液体填料、稀释剂、包胶囊物质或任何类型的制剂助剂。可以担当药学上可接受的载体 的物质的一些实例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤 维素和它的衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末黄蓍胶；麦芽； 明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄 榄油；玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓 冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸
26盐缓冲液；以及其它无毒的相容性润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；以及根据配制 者的判断，着色剂、释放剂、涂布剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存 在于组合物中。可以下列方式对人及其它动物给予本发明药物组合物口服、直肠给药、胃 肠外给药、脑池内给药、阴道内给药、腹膜内给药、局部给药(散剂、软膏剂或滴剂)、经颊给 药或经口或经鼻喷雾给药。本发明的药物组合物可以口服给药、胃肠外给药、吸入剂喷雾给药、局部给药、直 肠给药、经鼻给药、经颊给予、阴道给药或通过植入的储库给药，优选通过口服或注射给药。 本发明药物组合物可以含有任何常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂或赋形剂。在某些 情况下，可以用药学上可接受的酸、碱或缓冲液调节制剂的PH，以增强所配制化合物或其递 送形式的稳定性。本文使用的术语“胃肠外给药”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动 脉内、滑膜内(intrasynovial)、胸骨内、鞘内、损伤内和颅内注射或输注技术。口服用液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆和酏剂。 除了活性化合物之外，液体剂型可以含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如水或其它溶 剂；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、 1，3_ 丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝 麻油)、甘油、四氢慷醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯；和其混合物。除惰性稀释剂以 外，口服组合物还可以包含佐剂，例如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。可以按照本领域已知的方法，使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制注射制 剂，例如无菌注射水性或油性混悬剂。无菌注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀 释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂、混悬剂或乳剂，例如在1，3_ 丁二醇中的溶液。在可接受 的赋形剂和溶剂之中，可以使用的是水、林格氏溶液、U.S. P.和等渗氯化钠溶液。另外，无 菌的不挥发性油通常规用作溶剂或悬浮介质。对于这种目的，可以使用任何温和的不挥发 性油，包括合成的单或二甘油脂。此外，脂肪酸(例如油酸)用于注射制剂中。可以用以下方式将注射制剂灭菌例如通过截留细菌的过滤器 (bacterial-retaining filter)进行过滤，或通过向使用前可被溶于或分散于无菌水和其 它无菌注射用介质的无菌固体组合物形式中并入灭菌剂。为了延长药物效果，减缓皮下或肌内注射的药物的吸收常常是合意的。这可以通 过使用具有差的水溶解性的晶体或无定形物质的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率取决 于它的溶解速率，溶解速率又取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将药物溶解或悬浮在 油性赋形剂中来实现胃肠外给予的药物形式的延迟吸收。可通过如下方式制备长效注射剂 型在可生物降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成药物的微胶囊基质。根据 药物与聚合物的比率和所使用具体聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其它可生物 降解的聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将药物包埋在可与身体 组织相容的脂质体或微乳液中来制备长效注射制剂。可以通过将本发明的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体混合来制备用于直 肠或阴道给药的组合物(优选栓剂)，所述赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡， 其在环境温度下是固体，但在体温下是液体，因此在直肠或阴道中熔化，并释放活性化合 物。口服用固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性
27化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合，所述赋形剂或载体例如柠檬 酸钠或磷酸氢钙和/或下列物质a)填料或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇 和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶； c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸 盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如链烷烃；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)湿润剂，例 如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，例如高岭土和膨润土 ；和i)润滑剂，例如滑石粉、 硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况 下，所述剂型还可以包含缓冲剂。相似类型的固体组分也可在采用诸如乳糖或奶糖(milk sugar)以及高分子量聚 乙二醇等之类的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中用作填充剂。活性化合物还可以是与一种或多种如上所述赋形剂的微胶囊形式。可以用包衣和 包壳(shell)(例如肠溶包衣、控制释放包衣及药物配制领域众所周知的其它包衣)来制备 固体剂型片剂、糖锭、胶囊、丸剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可以与至少一种 惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。如同在正常实践中，此类剂型还可以包含不同于惰 性稀释剂的另外物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶 囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可以包含缓冲剂。它们可以任选含有遮光剂，还可以 是任选以延迟方式仅仅在肠道的某一部分或优先在肠道的某一部分释放一种或多种活性 成分的组合物。可以使用的包埋组分的例子包括聚合物和蜡。用于局部或透皮给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝 胶剂、散剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性组分与药学上可接受的载体和任何需要 的防腐剂或可能需要的缓冲剂在无菌条件下混合。眼科制剂、滴耳剂、眼膏、散剂和溶液剂 也考虑在本发明的范围之内。除了本发明的活性化合物之外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可含有赋形剂， 例如动物和植物脂肪、油、蜡、链烷烃、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润 土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。除了本发明化合物之外，散剂和喷雾剂还可以包含赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅 酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常用的推进 剂，例如氯氟烃。透皮贴剂具有以控制递送方式向身体提供化合物的额外优点。可以通过将化合物 溶解或分散在适当介质中来制备此类剂型。吸收增强剂还可以用于增加化合物穿过皮肤的 通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中，来控制速率。抗病毒活性本发明化合物的抑制量或剂量可以为大约0. 01mg/Kg至大约500mg/Kg，或者从大 约1至大约50mg/Kg。抑制量或剂量还将根据给药途径以及与其它药剂共同使用的可能性 而变化。根据本发明的治疗方法，通过给予受治疗者抗丙型肝炎病毒有效量或抑制量的本 发明化合物，以获得所需要的结果所必需的量和时间，在受治疗者(例如人或低级哺乳动 物)中治疗或预防病毒感染。本发明的另外方法是用抑制量的本发明化合物或组合物，以 获得所需要的结果所必需的量和时间，来处理生物样品。
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本文使用的术语本发明化合物的“抗丙型肝炎病毒有效量”是指足以降低生物样 品或受治疗者中的病毒载量(例如导致病毒载量降低至少10%，优选至少50%，更优选至 少80%，最优选至少90%或95% )的化合物的量。如医学领域所充分理解的，本发明化合 物的抗丙型肝炎病毒有效量将处于适用于任何医学治疗合理的益处/风险比率。术语本发明化合物的“抑制量”是指足以降低生物样品或受治疗者中的丙型肝炎 病毒载量(例如导致病毒载量降低至少10%，优选至少50%，更优选至少80%，最优选至 少90%或95%)的量。应理解，当给予受治疗者所述抑制量的本发明化合物时，该量将处 于适用于由医生确定的任何医学治疗的合理的益处/风险比率。本文使用的术语“生物样 品”是指有意给予受治疗者的生物来源的物质。生物样品的例子包括但不限于血液及其组 分，例如血浆、血小板、血细胞亚群等等；器官，例如肾脏、肝脏、心脏、肺等等；精子和卵子； 骨髓及其组分；或干细胞。因此，本发明的另一个实施方案是通过使所述生物样品与抑制量 的本发明的化合物或药物组合物接触来处理生物样品的方法。一旦受治疗者的病症得到改善，如果需要，可给予维持剂量的本发明的化合物、组 合物或组合。随后可随着症状变化而将给药剂量或频率或两者降低至保持症状改善的水 平，当症状已经减轻至所需要的水平时，应停止治疗。然而，一旦疾病症状出现任何复发，受 治疗者可能需要基于长期的间歇治疗。然而，应理解，本发明化合物和组合物的总的日用量将由主治医师在合理的医学 判断范围内决定。用于任何特定患者的具体抑制剂量取决于各种因素，包括所治疗的病 症和该病症的严重性；所使用的具体化合物的活性；所使用的具体组合物；患者的年龄、体 重、一般健康情况、性别和饮食；所使用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄速度； 治疗持续时间；与所使用的具体化合物联合或同时使用的药物；和医学领域众所周知的类 似因素。以单剂量或分次剂量形式给予受治疗者的本发明化合物的总的每日抑制剂量可 以是例如0. 01至50mg/kg的量，或更通常是0. 1至25mg/kg体重的量。单剂量组合物可以 含有构成日剂量的此类量或其约数。通常，根据本发明的治疗方案包括每天以单剂量或多 剂量给予需要此类治疗的患者大约10mg至大约lOOOmg的本发明化合物。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本领域普通技术人员通常已知 的含义一致。本文中提及的所有的出版物、专利、公开的专利申请及其它参考文献通过引用 整体并入本文。MM在方案和实施例的描述中所用的缩写如下ACN表示乙腈；BME表示2-巯基乙醇；B0P表示苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)鳞六氟磷酸盐；COD表示环辛二烯；DAST表示二乙氨基三氟化硫；DABCYL表示6-(N-4'-羧基_4_ ( 二甲氨基)偶氮苯)-氨基己基-1_0_ (2-氰基 乙基)-(N, N- 二异丙基)-亚磷酰胺；DCM表示二氯甲烷；
DIAD表示偶氮二羧酸二异丙酯；DIBAL-H表示二异丁基氢化铝；DIEA表示二异丙基乙胺；DMAP表示N，N- 二甲基氨基吡啶；DME表示乙二醇二甲醚；DMEM 表示 Dulbecco' s 改进的 Eagle 培养基；DMF表示N，N_ 二甲基甲酰胺；DMS0表示二甲亚砜；EDANS表示5- (2_氨基-乙氨基)_萘磺酸；EDCI或EDC表示1- (3- 二乙基氨基丙基)_3_乙基碳化二亚胺盐酸盐；EtOAc表示乙酸乙酯；HATU表示0-(7_氮杂苯并三唑-1-基)_N，N，N' , N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HoVeyda' s Cat.表示二氯(0_异丙氧基苯基亚甲基)(三环己基膦)钌(II)；KHMDS是二(三甲基甲硅烷基)氨基钾；Ms表示甲磺酰基；NMM表示N-4-甲基吗啉；PyBrOP表示溴-三-吡咯烷基-鳞六氟磷酸盐；Ph表示苯基；RCM表示闭环复分解；RT表示逆转录；RT-PCR表示逆转录-聚合酶链式反应；TBAF表示四丁基氟化铵；TEA表示三乙基胺；TFA表示三氟乙酸；THF表示四氢呋喃；TLC表示薄层色谱；TPP或PPh3表示三苯基膦；tBOC或Boc表示叔丁氧基羰基；和Xantphos表示4，5-双-二苯基膦烷基_9，9- 二甲基-9H-咕吨(4， 5-Bis-diphenylphosphanyl-9,9-dimethyl-9H-xanthene)。合成方法结合下列举例说明可制备本发明化合物的合成方案和方法可以更好地理解本发 明的化合物和方法。方案1
30 从共同的中间体丄-6制备所有喹喔啉类似物。方案1中概述了化合物丄_6的合成。 用HC1在二噁烷中将市售的Boc-羟脯氨酸丄-1脱保护，然后使用HATU与酸丄_2偶合，得到 中间体丄-3。可以使用其它含有末端烯烃的氨基酸衍生物来代替丄_2，以便生成各种大环结 构(关于进一步细节，参见W0/0059929)。用LiOH将丄_3水解，然后使随后的肽与含有环 丙基的胺丄-4偶合，得到三-肽丄-5。最后，用基于钌的催化剂(例如二氯(0-异丙氧基苯 基亚甲基)(三环己基膦)钌(II))进行闭环复分解，得到所需要的关键中间体丄_6(关于 闭环复分解的进一步细节，参见最近的综述Grubbs等人，Acc. Chem. Res.，1995，28，446 ； Shrock 等人，Tetrahedron 1999，55,8141 ；Furstner, A. Angew. Chem. Int. Ed. 2000，39， 3012 ；Trnka 等人，Acc. Chem. Res. 2001，34，18 ；和 Hoveyda 等人，Chem. Eur. J. 2001，7，945)。方案2 经由一些不同的合成路线制备本发明的喹喔啉类似物。示于方案2中的一种方法 是通过使用三信(Mitsimobu)条件将市售的2-噻吩基-1H-喹喔啉-2-酮缩合。关于三信反 应的进一步细节，参见 0. Mitsunobu, Synthesis 1981，1-28 ；D. L. Hughes, Org. React. 29， 1-162(1983)。某些合成步骤的替代方法描述在序列号为12/271，144的美国专利申请中， 通过引用将其内容整体并入本文。方案3
31 可以通过如下方法制备游离胺中间体2-1 用合适的酸(例如HC1)处理化合物 2-1，然后通过在RT或高温下将酸置于偶合试剂(即⑶I、HATU、DCC、EDC等等)中进行酰 胺偶合，随后在碱的存在下加入相应的磺酰胺R-C0-0H，其中R如前面所定义。在不存在偶 合试剂的情况下，可以使用酰基氯代替R-C0-0H。随后用试剂(例如LiOH)将乙酯水解，提 供化合物2-1。方案4 通过如下方式，从相应的酸2-1制备磺酰胺1-1 在RT或在高温下，将酸置于 偶合试剂(即CDI、HATU、DCC、EDC等等)中，随后在碱的存在下加入相应的磺酰胺环丙 基-S (0) 2-NH2，其中R如前面所定义。本文引用的所有参考文献，无论是印刷品、电子形式、计算机可读性存储介质形式 (computer readable storage media)或其它形式，都通过引用将以其整体明确并入本文， 包括但不限于摘要、文章、期刊、出版物、教科书、论文、国际互连网网址、数据库、专利和专 利出版物。结合下列实施例将更好地理解本发明的化合物和方法，这些实施例只是为了举例 说明而并非为了限制本发明的范围。所公开的实施方案的各种变化和修饰对于本领域技术 人员是显而易见的，可在不偏离本发明的精神和所附权利要求的范围的情况下做出此类变 化和修饰，其非限制性地包括与本发明的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法有关 的那些。按照共同待审的美国申请no. 11/768，723中所描述的类似程序制备化合物1_50。
向化合物 A(30. 0mg，0. 044謹ol)、5-甲基异噁唑 _3_ 羧酸(5. 6mg，0. 044mmol) 和HATU(21.9mg，0. 057mmol)的二氯甲烷(1. lmL)溶液中加入二异丙基乙胺(8. 9mg， 0. 069mmol)。在25°C下搅拌反应混合物2小时，然后在1NHC1和乙酸乙酯之间分配。用无水 硫酸镁干燥有机层，过滤，蒸发。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(22. lmg，64% 产率)。 MS (ESI) :m/z = 788. 0 [M+H]。 实施例2.式B的化合物,其中
(化合物19)使用实施例1的程序制备标题化合物，用1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸替代5-甲基 异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(64%产率)。MS (ESI) :m/z = 797. 1 [M+H]。 实施例3.式B的化合物，其中 使用实施例1的程序制备标题化合物，用异烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用 反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(39%产率)。MS (ESI) :m/z = 751. 1 [M+H]。实施例4.式B的化合物,其中^
R= s使用实施例1的程序制备标题化合物，用噻唑-4-羧酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(66%产率)。MS (ESI) :m/z = 789. 9 [M+H]。
(化合物5)
33 实施例5.式B的化合物，其中 |f J /使用实施例1的程序制备标题化合物，用吡嗪-2-羧酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(44%产率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。实施例6.式B的化合物,其中 NT / (化合物了) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用6-甲基烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(65%产率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。 实施例7.式B的化合物,其中J 、…(化合物6) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用2，4-二甲基噻唑-5-羧酸替代5-甲基 异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(60%产率)。MS (ESI) :m/z = 817.9[M_H]。 实施例8.式B的化合物，其中/T^V (化合物1)
n- 、N
iV一u使用实施例1的程序制备标题化合物，用1H-吡唑-4-羧酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(24%产率)。MS (ESI) :m/z = 773. 1 [M+H]。
O实施例9.式B的化合物，其中 N^(化合物3)使用实施例1的程序制备标题化合物，用哒嗪-4-羧酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(38%产率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。
O实施例10.式B的化合物，其中(化合物2)
R= ,使用实施例1的程序制备标题化合物，用5-甲基吡嗪-2-羧酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(38%产率)。
34
MS (ESI) :m/z = 799. 0 [M+H]。实施例11.式B的化合物,其中jf^f ^ (化合物24)
R= F使用实施例1的程序制备标题化合物，用4-氟苯甲酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(40%产率)。MS (ESI) :m/z = 801.0 [M+H]。实施例12.式B的化合物,其中YT > (化合物23) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用4-氟苯甲酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(45%产率)。 实施例13.式B的化合物,其中 [p^p / (化合物22)使用实施例1的程序制备标题化合物，用2-氟苯甲酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(65%产率)。 实施例14.式B的化合物，其中 JrX ^ (化合物27) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用3-甲基异噁唑-4-羧酸替代5-甲基异 噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(23%产率)。
实施例15.式B的化合物,其中 N化合物32)使用实施例1的程序制备标题化合物，用1，3，5_三甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代 5_甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(54%产率)。 实施例16.式B的化合物,其中 )r\y (化合物25) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用3，5-二甲基异噁唑-4-羧酸替代5-甲 基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(73%产率)。
MS (ESI) :m/z = 802. 0 [M+H]。实施例17.式B的化合物,其中
(化合物8)使用实施例1的程序制备标题化合物，用6-甲基吡啶甲酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(62%产率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。实施例18.式B的化合物,其中
(化合物30)使用实施例1的程序制备标题化合物，用3，5_ 二甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代 5_甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(66%产率)。MS (ESI) :m/z = 800. 9 [M+H]。实施例19.式B的化合物,其中
(化合物13)使用实施例1的程序制备标题化合物，用嘧啶-4-羧酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(63%产率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。 实施例20.式B的化合物,其中
(化合物19) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代5-甲基 异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(70%产率)。MS (ESI) :m/z = 797. 1 [M+H]。实施例21.式B的化合物，其中
化合物33)使用实施例1的程序制备标题化合物，用3-异丙基异噁唑-5-羧酸替代5-甲基 异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(54%产率)。MS (ESI) :m/z = 816. 0 [M+H]。
实施例22.式B的化合物,其中 J \ \ (化合物34)使用实施例1的程序制备标题化合物，用4，5，6，7-四氢苯并[d]异噁唑_3_羧酸 替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(51%产率)。MS (ESI) :m/z = 828. 0 [M+H]。 实施例23.式B的化合物,其中V^N (化合物18) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用3-甲基吡啶甲酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(63%产率)。MS (ESI) :m/z = 798. 1 [M+H]。 实施例24.式B的化合物,其中I ^ (化合物10) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用2-甲基烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(54%产率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。 实施例25.式B的化合物，其中1 . ^ (化合物21) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用反 相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(75%产率)。MS (ESI) :m/z = 784. 0 [M+H]。实施例26.式B的化合物,其中(\ i ^ (化合物20) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用吡啶甲酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。 用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(66%产率)。MS (ESI) :m/z = 784. 0 [M+H]。
实施例27.式B的化合物，其中 n^ , ^ (化合物12)
R=使用实施例1的程序制备标题化合物，用6-羟基吡啶甲酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(52%产率)。MS (ESI) :m/z = 800. 0. 0 [M+H]。 实施例28.式B的化合物,其中^ t Z (化合物15) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用4-甲基烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧 酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(68%产率)。MS (ESI) :m/z = 798. 1 [M+H]。实施例29.式B的化合物,其中\\(化合物11) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用2-氟烟酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸t 用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(71%产率)。MS (ESI) :m/z = 802. 0 [M+H]。 实施例30.式B的化合物,其中 { VN 1 ^ (化合物31) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用3，5- 二甲基-1-苯基-IH-吡唑_4_羧 酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(43%产率)。MS (ESI) :m/z = 876. 8 [M+H]。 实施例31.式B的化合物，其中 NI) ^ (化合物9) 使用实施例1的程序制备标题化合物，用2-苯基噻唑-4-羧酸替代5-甲基异噁 唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(63%产率)。
MS (ESI) :m/z = 866. 9 [M+H]。其中噻吩被取代的喹喔啉化合物的制备程序。
实施例32.式D的化合物，其中 实施例32a.将化合物C(4. Og, 5. 6Immol ；在碱的存在下，通过相应的羟脯氨酸 衍生物与对溴苯磺酰氯的反应来制备)、3_氯喹喔啉-2-醇(1. 22g，6. 74mmol)和碳酸铯 (4. 57g，14. Ommol)在NMP(HmL)中的混合物在70°C下加热18小时。然后将反应混合物倾 入IN HCl溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠洗涤合并的有机层，用无水硫酸镁干 燥，过滤，蒸发。对残余物进行硅胶色谱纯化，得到所需要的产物32a(l. 8g，49%产率)。实施例32b.将实施例32a中制备的化合物(25mg，0. 038mmol)、2_(三丁基甲锡烷 基)噻唑(28. 5mg，0. 076mmol)、四(三苯基膦)钯(4. 4mg，0. 0038mmol)和二噁烷(0. 24mL) 的混合物用氮气流脱气，然后在微波反应器(300W)中，于110°C加热1小时。然后将反应混 合物冷却至室温，用氯仿稀释，通过硅藻土过滤，减压蒸发。用硅胶色谱纯化残余物，得到所 需要的产物32b (24mg, 89%产率)。实施例32c.在50°C下，将实施例32b的产物(24mg，0. 034mmol)和氢氧化锂 (5. 7mg，0. 136mmol)在THF (0. 2mL)、乙醇(0. ImL)和水(0. ImL)的混合物中的溶液搅拌1
39小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用IN HCl洗涤。用无水硫酸镁干燥有 机层，过滤，减压蒸发。残余物未经进一步纯化而使用。实施例32.在40°C下，将实施例32c的产物(28. Omg,0. 041mmol)和羰基二咪唑 (10. Img, 0. 062eq)在二氯乙烷(0. 5mL)中的混合物搅拌2小时。向该混合物中加入环丙磺 酰胺(7. 5mg，0. 062讓01)，而后加入08^9. 5mg，0. 062mmol)。在40°C下搅拌混合物1小时， 然后冷却至室温。将混合物在氯仿和IN HCl之间分配，并将所得有机层用饱和氯化钠水溶 液洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。用硅胶色谱纯化残余物，得到标题化合物(12mg， 37%产率)。MS (ESI) :m/z = 780. 1 [M+H]。实施例33.式D的化合物,其中
(化合物45)实施例33a.按照实施例32b的程序制备标题化合物，用2_(三丁基甲锡烷基)噁 唑替代2-(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例33b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例33a的产物替代实 施例32b的产物。实施例33.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例33b的产物替代实施 例32c的产物。MS(ESI) :m/z = 764. 2 [M+H]。实施例34.式D的化合物,其中
(化合物47)实施例34a.按照实施例32b的程序制备标题化合物，用2_(三丁基甲锡烷基)呋 喃替代2-(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例34b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例34a的产物替代实 施例32b的产物。实施例34.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例34b的产物替代实施 例32c的产物。MS(ESI) :m/z = 763. 2 [M+H]。实施例35.式D的化合物，其中
(化合物46)实施例35a.按照实施例32b的程序制备标题化合物，用1_甲基_2_(三丁基甲锡 烷基)-IH-吡咯替代2-(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例35b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例35a的产物替代实 施例32b的产物。实施例35.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例35b的产物替代实施 例32c的产物。MS (ESI) :m/z = 776. 1 [M+H]。 实施例36.式D的化合物,其中 实施例36a.按照实施例32b的程序制备标题化合物，用2_(三丁基甲锡烷基)苯 并[d]噻唑替代2-(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例36b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例36a的产物替代实 施例32b的产物。实施例36.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例36b的产物替代实施 例32c的产物。MS (ESI) :m/z = 830. 0 [M+H]。 实施例37.式D的化合物,其中V^N夕(化合物50) 实施例37a.按照实施例32b的程序制备标题化合物，用2_(三丁基甲锡烷基)吡 啶替代2-(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例37b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例37a的产物替代实 施例32b的产物。实施例37.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例37b的产物替代实施 例32c的产物。MS(ESI) :m/z = 774. 2 [M+H]。实施例38.式D的化合物,其中L II (化合物39)
R=实施例38a.将实施例32a中制备的化合物(50mg，0. 076mmol)、4_叔丁基苯基硼 酸(48. 8mg，0. 274mmol)、钯催化剂 FC1007(63. 5mg，0. 36mmol/g,0. 023mmol)、1M 碳酸钾水 溶液(0.084mL，0.084mmol)和乙腈(0. 7mL)的混合物用氮气流脱气，然后在微波反应器 (300W)中，于130°C加热30分钟。然后将反应混合物冷却至室温，用氯仿稀释，通过硅藻土 过滤，减压蒸发。用硅胶色谱纯化残余物，得到所需要的产物38a(29mg，51%产率)。实施例38b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例38a的产物替代实 施例32b的产物。实施例38.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例38b的产物替代实施 例32c的产物。MS (ESI) :m/z = 829. 1 [M+H]。 实施例39.式D的化合物,其中V"^^ (化合物38)
R= 实施例39a.按照实施例38a的程序制备标题化合物，用4_氟苯基硼酸替代2_ (
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丁基甲锡烷基)噻唑。实施例39b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例39a的产物替代实 施例32b的产物。实施例39.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例39b的产物替代实施 例32c的产物。MS (ESI) :m/z = 791. 1 [M+H]。 实施例40.式D的化合物,其中V"^^ (化合物40) 实施例40a.按照实施例38a的程序制备标题化合物，用吡啶_4_基硼酸替代 2_(三丁基甲锡烷基)噻唑。实施例40b.按照实施例32c的程序制备标题化合物，用实施例40a的产物替代实 施例32b的产物。实施例40.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例40b的产物替代实施 例32c的产物。MS (ESI) :m/z = 774. 1 [M+H]。
,Vv^ A实施例41.式B的化合物,其中O ^oJ^J (化合物4)
也0使用实施例1的程序制备标题化合物，用(R)-4-(苄氧基)-2-(苄氧基羰基氨 基)-4-氧代丁酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产 物(69%产率)。MS(ESI) :m/z = 1017. 4[M+H] 实施例42.式B的化合物,其中(化合物16)
赵。T使用实施例1的程序制备标题化合物，用(S)-4_氨基_2-(叔丁氧羰基氨 基)-4_氧代丁酸替代5-甲基异噁唑-3-羧酸。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产 物(12%产率)。MS (ESI) :m/z = 892. 9 [M+H]。
/^-S O实施例43.式B的化合物,其中(化合物36)
R=H r^将化合物A (30. Omg, 0. 044mmol)和 2-异氰酰-4-甲基噻吩(6. 8mg，0. 049mmol) 的在二氯甲烷(l.lmL)中的溶液于25°C搅拌2小时，然后在水和乙酸乙酯之间分配。用无 水硫酸镁干燥有机层，过滤，蒸发。用反相色谱纯化残余物，得到所需要的产物(9. 6mg,27%
产率)。
42
MS (ESI) :m/z = 817. 9 [M+H]。 实施例44.式D的化合物,其中
(化合物48) 实施例44a.在50°C下，将实施例32a中制备的化合物(110mg，0. 168mmol)和氢氧 化锂(28. 2mg，0. 671mmol)在THF(ImL)、甲醇(0. 5mL)和水(0. 5mL)中的混合物搅拌1小 时。然后将混合物在乙酸乙酯和IN HCl之间分配，并将有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤， 用无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发。残余物未经进一步纯化而使用。(100mg，96%产率)。实施例44.按照实施例32的程序制备标题化合物，用实施例44a的产物替代实施 例32c的产物。MS(ESI) :m/z = 727. 2 [M+H]。实施例45.下列方案用于制备实施例45 (化合物48)。 实施例45b.将化合物 45a (1. 25g, 1. 725mmol)溶于 THF (5. 75mL)、EtOH(2. 87mL) 和水(2.87mL)中。加入氢氧化锂一水合物(0. 217g，5. 17mmol)，并在室温下搅拌该溶液过 夜。用水稀释反应混合物，通过加入HCl (2N)进行酸化。将所得油状固体超声处理，并将所 得粉末过滤，用水冲洗，干燥。该物质(0. 908g，76%产率)未经进一步纯化而在下一步中使用。实施例45c.将实施例45b的产物(908mg, 1. 303mmol)溶于二氯乙烷(13mL)中， 用羰基二咪唑(317mg，1.955mm0l)处理，并加热到50°C，保持1小时。加入环丙磺酰胺 (395mg，3. 26mmol)，而后加入 DBU(0. 295mL, 1. 955mmol)。将反应混合物加热到 50°C，保持 1 小时，然后在室温下搅拌过夜。将反应混合物用2N HCl稀释，用乙酸乙酯萃取。用无水硫 酸镁干燥有机层，过滤，浓缩。用硅胶色谱纯化残余物，得到化合物45c (0. 94g，90%产率)。实施例45d.将7-溴喹喔啉-2-醇(100mg，0. 444mmol)、2_氟苯基硼酸(124mg， 0. 889mmol)、二环己基(2'，6' - 二甲氧基联苯 _2_ 基)膦(7. 30mg，0. 018mmol)和二乙酰 氧基钯(1.995mg，8.89ymol)加入到微波管瓶中，并用乙醇(400 μ 1)稀释。将该混合物用2M碳酸钠(222μ 1,0. 444mmol)处理，并在微波反应器(300W)中加热到100°C，保持1. 5小 时。将反应混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取。用无水硫酸镁干燥有机层，过滤，减压蒸发。 用硅胶色谱纯化残余物，得到化合物45d(0. 030g，28%产率)。实施例45e.将实施例45c的产物(30mg，0. 038mmol)溶于DMF (375 μ 1)中，并用 碳酸铯(13. 44mg，0. 041mmol)和 7-(2-氟苯基)喹喔啉 _2 (IH)-酮(18. 02mg，0. 075mmol， 实施例45d)处理。将反应混合物加热至80°C，保持2小时。使反应混合物冷却至室温，在 氮气流下蒸发溶剂。用反相色谱纯化残余物，得到标题化合物(7.0!1^，23%产率)。MS (ESI) :m/z = 803. 1 [M+H]。实施例46.式D的化合物,其中R = H(化合物42)使用实施例45的程序制备标题化合物，用喹喔啉_2 (IH)-酮替代7_(2_氟苯基) 喹喔啉-2(1H)_酮。用反相色谱纯化残余物，得到标题化合物(5mg，28%产率)。MS(ESI) :m/z = 709. 2 [M+H]。本发明化合物显示出对抗HCV NS3蛋白酶的有效抑制性能。下列实施例描述了其 中可测试本发明化合物的抗HCV效果的试验。实施例47. NS3/NS4a蛋白酶试骑使用内部猝灭的荧光底物来试验HCV蛋白酶活性和抑制。将DABCYL和EDANS基 团连接于短肽的相反末端。用蛋白酶剪切解除由DABCYL基团对EDANS荧光的猝灭。使用 355nm的激发波长和485nm的发射波长，用Molecular Devices Fluoromax (或等效物)测 定荧光。本试验在Corning 白色半区域(half-area)96 孔板(VffR 29444-312[Corning 3693])中进行，使用NS4A辅因子束缚的全长NS3HCV蛋白酶Ib (最终酶浓度1到 15nM)。试验缓冲液补充有10 μ MNS4A辅因子P印4Α (Anaspec 25336或内部制备 的(in-house), Mff 1424.8)。RET Sl (Ac-Asp-Glu-Asp (EDANS)-Glu-Glu-Abu-[C00] Ala-Ser-Lys-(DABCYL) -NH2, AnaSpec 22991, MW 1548. 6)用作荧光肽底物。试验缓冲液含 有50mMfepes (pH7. 5)、30mM NaCl和IOmM BME。然后在不存在和存在抑制剂的条件下，在室 温下进行酶反应超过30分钟的时程。肽抑制剂HCV Inh 1 (Anaspec 25345,MW 796. 8) Ac-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-O H[-200C ] ^P HCV Inh 2 (Anaspec 25346,MW 913. 1) Ac-Asp-Glu-Dif-Cha-Cys-OH用作参考 化合物。使用ActivityBase (IDBS)中的 XLFit，使用方程式 205，计算 IC50 值y = A+((B-A)/(1+((C/X)"D)))。实施例48-基于细胞的复制子试验使用Huh 11-7细胞系来实现HCV复制子RNA的定量(基于HCV细胞的试验(Cell Based Assay)) (Lohmann 等人，Science 285:110-113,1999)。以 4x103 个细胞 / 孔将细 胞接种在96孔板中，并加入含有DMEM(高糖)、10%胎牛血清、青霉素-链霉素和非必需氨 基酸的培养基。将细胞在7. 5% CO2培养箱中于37°C孵育。在孵育期结束时，使用Ambion RNAqueous 96试剂盒(目录号AM1812)从细胞中提取总RNA，并纯化。为了扩增HCV RNA 从而得到可以用HCV特异性探针(下面)检测到足够的物质，使用TaqMan One-StepRT-PCR Master Mix试剂盒(Applied Biosystems目录号4309169)，使HCV特异性引物(下面)通
44过聚合酶链式反应(PCR)介导HCV RNA的逆转录和cDNA的扩增两者。位于HCV基因组的 NS5B区域的RT-PCR引物核苷酸序列如下
HCV 正向引物“ RBNS5bfor ”5，GCTGCGGCCTGTCGAGCT(SEQ ID NO 1)HCV 反向引物 “ RBNS5Brev ”5， CAAGGTCGTCTCCGCATAC(SEQ ID NO 2)。使用Applied Biosystems (ABI)Prism 7500 序列检测系统(SDS)来实现 RT-PCR 产物的检测，所述检测系统检测用荧光报道基因染料和猝灭剂染料标记的探针在PCR反应 期间分解时所发射的荧光。在PCR的每个循环期间测定荧光量的增加，其反映了 RT-PCR产 物的增加量。具体地说，定量基于阈值循环，其中扩增图穿过定义的荧光阈值。将样品与 已知标准品的阈值循环进行比较，提供对不同样品中的相对模板浓度的高灵敏度测定(ABI UserBulletin#2,1997年12月11日)。使用ABI SDS程序版本1. 7分析数据。可通过使 用具有已知拷贝数的HCV RNA标准品的标准曲线，将相对模板浓度转化为RNA拷贝数(ABI User Bulletin#2,1997 年 12 月 11 日)。使用下列标记的探针来检测RT-PCR产物5' FAM-CGAAGCTCCAGGACTGCACGATGCT-TAMRA(SEQ ID NO 3)FAM =荧光报道基因染料。TAMRA =猝灭剂染料。在48°C下进行RT反应30分钟，而后进行PCR。在ABI Prism 7500序列检测系统 上，用于PCR反应的热循环仪参数是在95°C下一个循环，10分钟，而后40个循环，每个循 环包括在95°C下持续15秒的一次孵育，和在60°C下持续1分钟的第二次孵育。为了将数据归一化为细胞RNA内的内部对照分子，在细胞信使RNA甘油醛_3_磷 酸脱氢酶(GAPDH)上进行RT-PCR。在所用的细胞系中，GAPDH拷贝数十分稳定。在相同 RNA样品上进行GAPDH RT-PCR，并从中测定HCV拷贝数。GAPDH引物和探针包含在ABI Pre-Developed TaqMan试验试剂盒(目录号4310884E)中。HCV/GAPDH RNA的比率用于计 算用来评价对HCV RNA复制的抑制作用的化合物活性。作为HCV复制的抑制剂的化合物在含有Huh-7细胞系的复制子中的活性(基于细 胞的试验)。通过比较暴露于化合物的细胞与暴露于DMSO赋形剂的细胞(阴性对照)中归 一化为GAPDH的HCV RNA的量(例如HCV/GAPDH的比率)，来测定特异性抗病毒化合物对 Huh-11-7细胞中HCV复制子RNA水平的影响。具体地说，以4xl03个细胞/孔将细胞接种在 96孔板中，并用下列培养基孵育1)含有DMS0(0%抑制对照)的培养基，或2)培养基 /含有固定浓度化合物的1 % DMS0。然后将上述96孔板在37°C下孵育4天(EC50测定)。 抑制百分比定义为% 抑制=100-100 * S/C1其中S =样品中HCV RNA拷贝数/GAPDH RNA拷贝数的比率；Cl = 0%抑制对照(培养基/1 % DMS0)中HCV RNA拷贝数/GAPDHRNA拷贝数的比率。
通过以下方式产生抑制剂的剂量反应曲线向孔中加入经三个对数级(three logs)三倍连续稀释的化合物，从具体化合物的最高浓度1. 5uM开始，以最低浓度0. 23nM 结束。如果EC50值在曲线上的位置不合适，则进行进一步的连续稀释(例如500nM至 0. 08nM)。以使用 4-参数的非线性回归拟合的 IDBS Activity Base program"XL Fit，，(#205 型，版本 4.2. 1，build 16)测定 EC50。在上述试验中，发现本发明的代表性化合物具有HCV复制抑制活性和HCV NS3蛋 白酶抑制活性。这些化合物也有效抑制不同HCV基因型的HCVNS3蛋白酶，包括基因型1、2、 3 禾口 4。在上述试验中，试验了化合物1-50。发现本文公开的示例性化合物具有< = 0. 2nM-IOOnM的活性(在NS3/NS4a蛋白酶试验中)，和< =0. 2nM-IOOnM的活性(在基于 细胞的复制子试验中)。虽然关于各种优选实施方案描述了本发明，但本发明无意局限于其中，相反本领 域技术人员将认识到，在本发明的精神范围和所附加权利要求的范围之内，可以对其进行 变化和修改。
权利要求
式I或II的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药其中R选自Ar选自Z是叔丁基或环戊基；表示碳 碳单或双键。FPA00001188867100011.tif,FPA00001188867100012.tif,FPA00001188867100021.tif,FPA00001188867100022.tif,FPA00001188867100023.tif
2.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药，所述化合物由式III或 IV表示 其中R、Z和Ar如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1的化合物，其由式V表示，其中Ar和R描述于表1中
4.药物组合物，其包含抑制量的权利要求1所述的化合物以及药学上可接受的载体或 赋形剂。
5.治疗受治疗者中的病毒感染的方法，其包括给予受治疗者抑制量的权利要求4所述 的药物组合物。
6.权利要求5的方法，其中所述病毒感染是丙型肝炎。
7.抑制丙型肝炎病毒复制的方法，所述方法包括提供丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量 的权利要求4所述的药物组合物。
8.权利要求5的方法，其进一步包括同时给予另外的抗丙型肝炎病毒药剂。
9.权利要求8的方法，其中所述另外的抗丙型肝炎病毒药剂选自α-干扰素、干扰素、利巴韦林和金刚化合物。
10.权利要求8的方法，其中所述另外的抗丙型肝炎病毒药剂是丙型肝炎病毒解旋酶、 聚合酶、金属蛋白酶或IRES的抑制剂。
11.权利要求4的药物组合物，其进一步包含另一种抗HCV药剂。
12.权利要求4的药物组合物，其进一步包含选自下列的药剂干扰素、利巴韦林、金刚 烷胺、另一种HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、或内部核糖体进入 位点抑制剂。
13.权利要求4的药物组合物，其进一步包含聚乙二醇化的干扰素。
14.权利要求4的药物组合物，其进一步包含另一种抗病毒、抗细菌、抗真菌或抗癌药 剂或免疫调节剂。
全文摘要
本发明涉及式I或II的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药其抑制丝氨酸蛋白酶活性，尤其丙型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶的活性。因此，本发明化合物干扰丙型肝炎病毒的生命周期，并且还用作抗病毒药剂。本发明进一步涉及包含上述化合物的药物组合物，用于给予患有HCV感染的受治疗者。本发明还涉及通过给予包含本发明化合物的药物组合物来治疗受治疗者中HCV感染的方法。
文档编号A01N57/00GK101932242SQ200880126164
公开日2010年12月29日 申请日期2008年12月3日 优先权日2007年12月5日
发明者J·D·穆尔, 刘 东, 唐大同, 孙颖, 柯日新, 牛德强, 王喆, 盖永华, 许国友 申请人:益安药业