专利名称：一种经猴股静脉导管长期给药方法
技术领域：
本发明提供了一种食蟹猴经股静脉导管长期给药方法，属药物领域。
背景技术：
为了能够在数天或数十天内反复给药，许多实验需要在动物身上建立一条长期的 静脉通路，在动物清醒时进行给药以及采血等操作，常用的有鼠、猪、牛等动物。然而，由于 在生理上具有和人类极大的相似性，灵长类动物越来越多地被应用于新药安全性评价及药 效学实验中，随着现代生物器械产品层出不穷，在灵长类动物上进行的静脉插管(venous cannula)技术也随之出现并不断发展。[肖恩年，王静.恒河猴长期保留性静脉插管装 置的研制.复旦学报(医学版)，1992. (05) :392-394.，王卫平等.恒河猴固定比率自身 给药实验动物模型的建立.中国药物依赖性杂志，1995. (02) =96-100. ；KinsoraJ J Jr, Christoffersen C L, Swalec J M et al. The novel use of v ascular access ports forintravenous self-administration and blood withdrawal studies in squirrel monkeys. J Neurosci Methods，1997，75 :59 68.；王卫平，哈鹰，蔡志基.关于恒河猴自身 给药实验动物模型的建立与评价.中国药物依赖性杂志，1993. (02) =80-81.]
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种经猴股静脉导管长期给药方法。本发明提供了一种食蟹猴经股静脉导管长期给药方法，它包括如下步骤a、术前准备术前一周为食蟹猴穿上背心进行适应性训练，术前禁食12h ；b、手术麻醉后将静脉导管植入腹股沟部；C、术后维护；d、生理值检测测定血常规、血凝、血生化值；e、给药将输液泵固定于背心上，输液泵的输液管与导管通道末端对接，设定输注 速度和时间，进行输液。其中，所述的导管为聚氨酯材料导管。其中，b步骤所述的静脉导管植入方法是(1)在猴大腿中部内侧作一平行于股静脉的4-5cm长的切口，暴露股鞘，分离一段 长2-3cm的股静脉，结扎股静脉的远心端，近心端；(2)将静脉导管前段削尖，放入手术用留置针内；持留置针以近平行于血管的角 度刺入，刺入后，以手术线将导管和静脉系紧，松开远心端结扎线，将注射器连于导管向外 抽血；(3)向导管内注入肝素钠，松开近心端结扎线；将猴侧卧，在肩胛下区背部正中线 处作一 2-3cm的切口，用套管针从股部切口到背部小口打皮下隧道，插管从隧道穿出猴背 部；把通道置于背部皮下并将其与静脉导管相连；(4)固定导管；向通道内注入肝素钠以防止堵塞；持续观察两分钟，若无明显出血则缝合背部切口，手术完成。
步骤(2)中留置针刺入时，左右旋转留置针，同时向前推进。其中，e步骤所述的给药步骤给药时，在猴穿戴的背心上连接恒速输液泵，通过 输液泵持续地以固定速率给药；在不给药时用肝素充满导管。本发明给药方法具有以下优点第一，可以在数小时内持续给药；第二，以恒定的 速率给药，从而可以保证血药浓度持续稳定于最低有效浓度之上；第三，可以在动物清醒的 状态下给药，不影响动物自身活动，比较人性化；另外，也使得实验人员易于操作。
具体实施例方式实施例1本发明食蟹猴经股静脉导管长期给药方法1实验材料1. 1实验动物普通级成年食蟹猴20只，雄性，体重1. 8 2. 3Kg，结核菌素试验 (_)。由海南金港实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(琼)2004-0001。 饲养条件饲养于国家成都中药安全性评价中心普通动物房，不锈钢笼单只饲养，室温 21 士5°C，相对湿度55士 15%。以实验动物颗粒饲料(由四川省医学科学院提供)喂养，灭 菌自来水自由饮用。1. 2iW^fflit (implanted ports, with open-ended catheters) _ 自美国BARD公司，其中静脉导管为聚氨酯管(Polyurethane catheter)，内径1. 2mm，这 种规格的聚乙烯管管壁较厚，可抵抗一定强度的外力撕扯。输液设备购自美国S0RENS0N MEDICAL 公司，包括输液栗(Ambit continuousinfusion pump)禾口暗盒(cassette),暗盒中 内置一可自动旋转的装置，它可以将液体以精确、可控的速度泵出。1.3检验仪器CELL-DYN 3700SL全自动血液细胞分析仪(美国雅培)，美国雅培原 装试剂；Cobas Integra 400Plus全自动血液生化分析仪(瑞士罗氏)，瑞士罗氏原装试剂； CA-530型全自动血凝分析仪(日本SYSMEX)，试剂由日本Dade Behring公司生产；R-500型 网织红细胞分析仪(日本SYSMEX)，试剂由日本Dade Behring公司生产。1. 4统计学方法统计处理采用SPSS 11. 0软件。数据结果以无± 8表示，手术前后 比较采用t检验。P < 0. 05认为差异有统计学意义。2实验方法2. 1手术过程2. 1. 1术前准备于手术前一周为食蟹猴穿上背心，放回实验笼中进行适应性训练， 使猴能逐渐习惯穿戴背心的生活环境。术前禁食12h，静脉推注戊巴比妥钠(pentobarbital sodium)(初始剂量30mg/Kg，维持剂量15mg/Kg)，麻醉后从笼中取出，右腿内侧和背部区域
备皮，按常规消毒。2. 1. 2手术本实验采用股静脉导管植入术(catheterization)。将备好皮的猴仰 卧于手术台上，选任一上肢造静脉通路，四肢呈“大”字型固定，常规消毒，铺巾。于大腿中 部内侧作一平行于股静脉的4-5cm长的切口，分离肌肉层，暴露股鞘(股动脉、股静脉、股神 经)，用止血钳(hemostat)钝性分离一段长约2-3cm的股静脉，注意不要损伤周围血管及其 他组织，用三根2-0或3-0的不可吸收线结扎股静脉的远心端(distal ligature)，稍用力 提起手术线，同时结扎近心端。将静脉导管前段削尖，放入手术用留置针内。助手提起两侧手术线，术者持留置针以近平行于血管的角度刺入，为保证顺利进入血管可轻轻左右旋转 留置针，同时将其向前推进，待进入5cm左右后，以手术线将导管和静脉系紧，松开远心端 结扎线，将注射器连于导管向外抽血，若有血液表示通畅性良好。向导管内注入约Iml肝素 钠(heparin sodium)，松开近心端结扎线，在导管静脉连接处再系一根7号线，确保固定牢 固，注意不可过紧，以免堵塞导管。将猴侧卧，在肩胛下区背部正中线处作一 2-3cm的切口，用套管针(tunneling trocar)从股部切口到背部小口打皮下隧道(tunnel)，插管从隧道穿出猴背部。把通道 (vascular access port)置于背部皮下并将其与静脉导管相连。在股静脉处将导管盘曲成 一小圆环，缝合固定，关闭股静脉切口。在通道处作一同样大小的小圆环，固定，以备动物活 动时留下足够的伸展性。将通道缝合于肌肉上，确保静脉导管与之连接紧密，用注射器检查 畅通性。向通道内注入肝素钠以防止堵塞。持续观察两分钟，若无明显出血则缝合背部切 口。手术完成，全部手术过程严格无菌操作。2. 1. 3术后维护手术完成后立即为食蟹猴穿戴背心以防止其苏醒后搔挠背部通 道，由于麻醉时猴身体较软，背心不可穿是过紧，以防窒息。为预防感染静脉滴注0. 5%的头 孢噻肟钠100ml。手术过程及术后注意保温。
2. 2生理值检测分别于术前一周、术后一周及术后两周测定血常规、血凝、血生 化值及一般生命体征，其中术后采血时把注射器针头直接插入背部通道，血液通过静脉导 管流出，采血量约为5ml。血细胞检测指标红细胞总数(RBC)、血红蛋白(Hb)、白细胞总 数(WBC)、血小板总数(PLT)、网织红细胞计数(RET)；血液生化检测指标天冬氨酸转氨 酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆红素(TBIL)、血糖(GLU)； 血凝检测项目凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)；脉搏(pulse)、摄食量 (food consumption)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。2. 3给药给药时，首先用带有非取心针(non-coring needle)的注射器吸出保留 在导管内的肝素钠，打开通道末端，注入IOml生理盐水。把输液泵固定于背心上，将输液泵 的输液管与通道末端对接，确认无误后打开输液泵，设定输注速度和时间，进行输液。期间 将猴放回笼中。输液结束后，关闭通道末端，取出输液泵，向通道内注入IOml生理盐水以避 免输入药物与肝素之间的药物反应，最后注入5ml肝素钠(100U/ml)，使其锁定于导管内， 防止管道堵塞。3 结果3. 1血液学指标由表1可见，与术前相比，术后一周WBC、RBC、Hb降低；PLT、RET 升高，差异均有统计学意义(P < 0. 05)；术后两周WBC、PLT差异无统计学意义(P > 0. 05)， 其余有统计学意义(P < 0. 05)。表1食蟹猴术前和术后血液指标^〒士 s η = 20 *P>o．05，与术前比较
3．2血生化指标由表2可见，与术前相比，术后一周ALT、Cr差异无统计学意义(P>o．05)，其余有统计学意义(P<o．05)；术后两周各项指标均无统计学意义(P>o．05)。
表2食蟹猴术前和术后血清化学指标．一天士s．n一20 *P > 0. 05，与术前比较3. 3血凝及生命体征由表3可见，与术前相比，术后一周APTT、foodconsumption、 pulse、SBP, DBP差异无统计学意义(P > 0. 05)，其余有统计学意义(P < 0. 05)；术后两周 各项指标均无统计学意义(P > 0. 05)。表3食蟹猴术前和术后血凝及生命体征_〒± s, η = 20 *Ρ > 0. 05，与术前比较4 讨论4. 1国内外在实验研究中通过安置静脉导管为动物进行输液已有三十多年的历 史，但这些报道均采用了颈静脉作为导管插入口，并且存在个别不妥之处。比如留置的静脉 插管均为医用硅胶管，口径也不尽相同，有内径0.8mm、1.0mm等。硅胶管能有效减轻排斥 反应，但材料过于柔软，如果全程采用，则固定插管至静脉内时不能用力过紧，否则易扎闭 管道，过松又易使导管滑脱。另外，将输液装置的联动轴固定于动物笼顶不能移动，这使得 动物在实验过程中活动受限。由于颈部的活动度较大且容易被猴时常挠抓致导管脱落，本 实验选用股静脉作为导管插入口，采用聚氨酯材料静脉导管，其排斥反应与硅胶管类似，但 比硅胶管坚固，可无需顾虑用力过紧的问题；将输液泵置于猴背部，并由穿戴的背心将其固 定，这样动物就可在给药的同时随意活动；手术切口位于腹股沟部，不易被抓到且活动度较 小，从而降低了导管滑脱的几率。4. 2 检测结果显示，术后一周只有 APTT、ALT、Cr、food consumption、pulse 这五 项指标与术前相比无统计学差异(P > 0.05)，说明只有这五项指标基本恢复到术前状态，这一现象可能是由于手术造成失血，而血细胞在一周时间里未能完全恢复正常以及术后短 期内机体仍然处于应激状态有关。术后两周除RBC、Hb和RET与术前比较仍有统计学差异 (P < 0. 05)外，其余均无统计学差异(P > 0. 05)，这说明经过短暂的适应期后，动物主要生 理指标基本恢复到术前状态，从而有效避免了试验给药前就影响动物生理状态的情况。而 RBC、Hb和RET这三项指标未能复原可能与红细胞生理恢复时间较长有关。另外，我们在动 物清醒后进行了笼旁观察，除1只因失血较多精神稍显萎靡外，其余动物精神及行为状态 均与术前无明显差异。因此，可以认为通过本方法造出的模型对动物造成的创伤极小。4. 3本实验采用了若干创新性方法。首先，往静脉插入导管时，边左右旋转留置针 边向前推进，这样就能迅速而准确地进入静脉内。其次，在不给药时用肝素充满导管，这就 使得导管堵塞的概率大大降低，但如果长期不使用导管及通道，则肝素畅 通至少应每四个 星期一次。最后，给药时，在猴穿戴的背心上连接恒速输液泵，通过输液泵持续地以固定速 率给药。采用此方法的原因是输液泵具有以下优点第一，可以在数小时内持续给药；第 二，以恒定的速率给药，从而可以保证血药浓度持续稳定于最低有效浓度之上；第三，可以 在动物清醒的状态下给药，不影响动物自身活动，比较人性化；另外，也使得实验人员易于 操作。4. 4静脉插管术常见的并发症有感染、导管堵塞、自行脱落、皮下隧道脓肿形成等。 本实验在术后为期三个月的给药过程中，有1只导管堵塞，1只猴麻醉清醒后将腹股沟部导 管拔出导致输液时出现局部肿胀，重新手术后问题均得到解决；另有2只发生感染，表现为 背部通道处皮肤红肿并有白色粘性液体流出，给予0. 5%的加替沙星后红肿消失。手术未造 成一例动物死亡，所有动物都能顺利完成为期三个月的实验。综上所述，食蟹猴静脉长期给药方法对手术及输液设备的要求均很高，任何细微 的操作都可能影响整个实验结果。本实验采用的方法安全有效，适用可靠且易于操作，可广 泛用于药理学及毒理学灵长类动物长期给药实验。
权利要求
一种食蟹猴经股静脉导管长期给药方法，其特征在于它包括如下步骤a、术前准备术前一周为食蟹猴穿上背心进行适应性训练，术前禁食12h；b、手术麻醉后将静脉导管植入腹股沟部；c、术后维护；d、生理值检测测定血常规、血凝、血生化值；e、给药将输液泵固定于背心上，输液泵的输液管与导管通道末端对接，设定输注速度和时间，进行输液。
2.根据权利要求1所述的给药方法，其特征在于所述的导管为聚氨酯材料导管。
3.根据权利要求1所述的给药方法，其特征在于b步骤所述的静脉导管植入方法是(1)在猴大腿中部内侧作一平行于股静脉的4-5cm长的切口，暴露股鞘，分离一段长 2-3cm的股静脉，结扎股静脉的远心端，近心端；(2)将静脉导管前段削尖，放入手术用留置针内；持留置针以近平行于血管的角度刺 入，刺入后，以手术线将导管和静脉系紧，松开远心端结扎线，将注射器连于导管向外抽 血；(3)向导管内注入肝素钠，松开近心端结扎线；将猴侧卧，在肩胛下区背部正中线处作 一 2-3cm的切口，用套管针从股部切口到背部小口打皮下隧道，插管从隧道穿出猴背部；把 通道置于背部皮下并将其与静脉导管相连；(4)固定导管；向通道内注入肝素钠以防止堵塞；持续观察两分钟，若无明显出血则缝 合背部切口，手术完成。
4.根据权利要求3所述的给药方法，其特征在于步骤(2)中留置针刺入时，左右旋转 留置针，同时向前推进。
5.根据权利要求1所述的给药方法，其特征在于e步骤所述的给药步骤是在给药时， 在猴穿戴的背心上连接恒速输液泵，通过输液泵持续地以固定速率给药；在不给药时用肝 素充满导管。
全文摘要
本发明提供了一种经猴股静脉导管长期给药方法，它包括如下步骤a、术前准备术前一周为食蟹猴穿上背心进行适应性训练，术前禁食12h；b、手术麻醉后将静脉导管植入腹股沟部；c、术后维护；d、生理值检测；e、给药将输液泵固定于背心上，输液泵的输液管与导管通道末端对接，设定输注速度和时间，进行输液。本发明给药方法具有以下优点第一，可以在数小时内持续给药；第二，以恒定的速率给药，从而可以保证血药浓度持续稳定于最低有效浓度之上；第三，可以在动物清醒的状态下给药，不影响动物自身活动，比较人性化；另外，也使得实验人员易于操作。
文档编号A61D7/00GK101843528SQ20091005868
公开日2010年9月29日 申请日期2009年3月24日 优先权日2009年3月24日
发明者匡林峰, 叶雪飞, 张琰艳, 扈正桃, 李宏霞, 李尤, 段嘉川, 王莉, 程峰, 蒋星 申请人:四川大学华西医院;成都华西海圻医药科技有限公司;国家成都中药安全性评价中心