专利名称：香椿组培快繁技术及培养基的配比的制作方法
技术领域：
本发明涉及 一 种植物的组培快繁技术，确切地说是 一 种香椿的组 培快繁技术，以及繁育所用培养基的配比。
背景技术：
植物组织培养是指植物的所有器官、组织和细胞，在人为的控制 条件下，放入含有植物营养和调节剂等组成的培养基中，让其生长、 分化形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞的全能性。植物组 织培养与快繁技术近几年飞快发展，已广泛应用在花卉、林果、蔬菜 以及农作物上，并产生了巨大的经济效益。
培养基是植物快繁的关键，培养基的配比，是因作物的不同而异， 是随植物的不同生长和发育阶段而有区别。作物不同生长发育所需的 营养物质也不尽相同。每一种作物只有适应它自身的生长条件和环境 条件才能生存，反之则亡。因此，香椿各个生长发育阶段的培养基配 比，也就是说，香椿的诱导与分化培养、继代与增殖培养、壮苗与生 根培养中培养基的配比，只适宜香椿各个生长阶段，因此，筛选合适 的培养基是至关重要的。
过去生产香椿苗的常规方法是，①用根系进行繁殖，但由于根量
太少，育苗量较低，且每年只能繁育一次，发展迟缓；②用种子繁殖 幼苗，会使单株之间的内部形态和外部形状及生长速度呈现不一致 性，造成品质、营养含量相差太大。
作为食用型香椿，它菜、材兼用，鲜嫩的芽菜口感好，香味浓郁， 富含大量蛋白质、维生素等营养物质，是大众餐桌上的美味佳肴。由 于其本身是一个高度的杂合体，后代分离严重的原因，导致了品质的
4多异性和形态及特征的不一致性，所以只有采用无性组织快繁，才能
从根本上解决种质和纯度的 一 致性问题。
发明内容
本发明的目的是提供 一 种香椿的无性营养体组织培养与脱毒快 繁技术，并筛选出适宜该品种分化、增殖、生根的最佳培养基配比， 以实现不受季节限制，多次、快速、大量繁殖，并且保证原品种全部 的遗传性和该品种品质的 一 致性。
本发明的组培繁育方法是
1、 分化诱导培养
从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征 特性的植株，剪取当年生半木质化腋芽饱满的枝条，去掉可见叶，在 流动的自来水中冲洗，拮干水分。在无菌室内的超净工作台上，进行 灭菌后，再用无菌水冲洗，然后剪成1.0-1.5cm长含有l-2个腋芽的 茎段，快速接种到分化诱导培养基中，封口后作好标记，迅速转到培 养室内进行分化诱导培养。培养温度26±°C,湿度65-75%,光照强 度1800-"00LX,光照时间l2-:Uh/d。经过25-28天的分化培养，芽 长出3-5片叶，高度3-5cm时，可进行单株继代增殖快繁。
2、 增殖培养
将生长健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段，长1-1. 5cm, 转入增殖培养基中进行增值培养，在培养室内通过28天的增殖培养 的组培苗，此时可进行继代繁殖，继代周期为28-30天，如此反复， 短期内即可获得大量芽苗。培养温度26±°C,湿度65-75%,光照强 度1800-2200LX,光照时间12-14h/d。
3、 生根培养
选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长 1. 0-1. 5cm转入生根培养基中，25天左右，有95%以上的植株长出3-5条O. 3-3cm长的根，展开叶3-5片，待苗长至30-35天时，即可炼苗 移栽。培养温度"土。C,湿度65-75%,光照强度1800-2200LX，光照 时间12-14h/d。
4、炼苗与移栽
练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时间5-7天，练苗时在保 证温、湿度的条件下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，然后小 心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，并灭菌，然后移栽到已灭 过菌的腐殖质与碎炉渣以1: 2的比例混合的基质中，前期适当遮阴 并保持湿度在85_95%,逐步降至70%， 15天后去掉薄膜罩，定期杀 菌，7-IO天一次，共计2-3次。
本发明的培养基及配比
由基本培养基、生长调节剂附加蔗糖和琼脂组成分化诱导培养 基、增值培养基和生根培养基，基本培养基为MS,基本培养基MS的 配制方法为公知技术，生长调节剂分别由6-苄基腺嘌呤(6-BA)、 a-萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、赤霉素(GA3)组合而成。
1、 分化诱导培养基的配比是基本培养基1升、6-节基腺喋呤 (6-BA) 0. 5-3. Omg, a-萘乙酸(NAA ) 0. 5-3. 0mg，赤霉素(GA3 )
0. 5-3. (kg,蔗糖30g，琼脂6-8g;
2、 增值培养基的配比是基本培养基l升、6-节基腺嘿呤(6-BA)
1. 0-5. Omg, a-萘乙酸(NAA)O. 5-2. 5mg, 口引噪丁酸(IBA)O. 5-3. 0mg, 赤霉素(GA3) 0. 5-3. Omg，蔗糖30g,琼脂6-8g;
3、 生根培养基的配比是1/2基本培养基1升、a-萘乙酸(NAA) l-3mg，蔗糖20g，琼脂6-8g;
本发明的积极效果是利用香椿的茎尖、茎段进行无性组织快繁 和脱毒，改变了常规繁育方法用香椿种子繁殖后代出现严重分离的多 样化现象，保持了原品种的优良种性，确保了种质纯度，脱毒后使其
6抗性增强，品质和感官变优，芽菜产量提高30%以上，且香味浓郁， 无病虫害发生。克服了传统的用种子和扦根繁殖速度慢的弊端，l年
内]个生长点或1个茎段可增殖600000-700000万个与母体生理特征 完全一致的小植株，可实现工厂化育苗、高效率生产；可人为的控制 培养生长条件，不受自然条件的影响，取材量小，培养材料经济，生 长周期短，繁殖系数大，管理方便，利于自动化生产和产业化生产。
具体实施例方式
本实施例是用河南省命名的"红香椿一号"菜、材兼用香椿，进 行组培快繁的实例。
1、 分化诱导培养
从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征 特性的植株，剪取当年生半木质化腋芽饱满的技条，去掉可见叶，在 流动的自来水中冲洗20-30 mis,拮干水分。在无菌室内的超净工作 台上，用75。/。酒精处理30S,用0. 1%的升汞灭菌8-12min后，用无 菌水冲洗5_7次，然后，剪成l. 0-1.5cm长含有l-2个腋芽的茎段， 快速接种到分化诱导培养基中，封口后作好标记，迅速转到培养室内 进行分化诱导培养。
分化诱导培养基是由1升基本培养基MS、 1.5 mg6-苄基腺嘌呤 (6-BA) 、 l.Omg a-萘乙酸(NAA ) 、 3mg赤霉素(GA3 )加入30g 蔗糖、6g琼脂配制而成。用氢氧化钠和盐酸调整PH值，控制PH值在 5.6-5.8,培养温度26土。C,湿度65-75%,光照强度1800-2200LX, 光照时间12-14h/d。接种到分化诱导培养基中的外植体，7天后有芽 萌动，15天后芽出现，在此培养基中苗分化早、快，且集中，芽长势 好，15天左右芽分化形成率达70%以上。经过25-28天的培养，芽 长至3-5cm高时，可进行单株快繁。
2、 增殖培养将生长健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长1-1. 5cm, 转入增殖培养基中进行培养，增值培养基是由1升基本培养基(MS)、 2mg6-苄基腺嘌呤(6-BA)、 Q. Smga-萘乙酸(NAA )、 0. 5mg吲哚丁酸 (IBA)、 1. 5mg赤霉素(GA3)加入30g蔗糖、6g琼脂配制而成。用 氢氧化钠和盐酸调整PH值，控制PH值在5. 6-5. 8,培养温度26 ± °C , 湿度65-75%,光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。 3-7天有 愈伤组织形成，7-10天有芽萌动，随着丛芽的形成愈伤组织也随之减 少到消失，10-20天长出丛生芽4-6个。在该增值培养基中茎分化苗 增殖率高达100%,增殖倍数6以上，在接种后的l-10天增殖率占23%, 增殖最快的时间是在11-20天之间高达70%,且芽勻而壮。继代周期 为28-30天，如此反复，短期内即可获得大量芽苗。
3、 生根培养
选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长 1.0-1. 5cm转入生根培养基中，生根的基本培养基是分化和增殖培养 基本培养基的一半，即1/2MS。生根培养基由1升1/2MS l-3mg a-萘 乙酸(NAA)、 20g蔗糖、6g琼脂配制而成。用氢氧化钠和盐酸调整PH 值，控制PH值在5.8,培养温度26±°C,湿度65-75%,光照强度 1800-2200LX,光照时间12-14h/d。该生根培养基生根率达100%,生 根倍数5以上，在根分化形成过程中，l-10天内无根形成，10-20天 内根形成增长率占30%,集中在20-30天为70%。 7-10天在茎基部出 现白色突起，15-20天有2-3个根尖萌出，25天左右，有95%以上的 植株长出3-5条0. 3-3cm长的根，展开叶3-5片，待苗长至30-35天 即可炼苗移栽。
4、 炼苗与移栽
练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时在保证温、湿度的条件 下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，练苗时间5-7天，然后小
8心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，用多菌灵浸泡5-10min后， 移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以1: 2的比例混合的基质中，前 期适当遮阴并保持湿度在85-95 %,逐步降至70%左右，15天后去掉 薄膜罩，定期喷洒40%多菌灵800倍液杀菌，7-IO天一次，共计2-3 次，成活率90%以上，15天后生长加快。
"红香椿一号"是香椿中的极品，该香椿生长快、材质好、芽 菜品质优良、营养价值高。"红香椿一号"是菜、材兼用型树种，它 鲜嫩的芽菜蛋白质含量9. 7%,比一般香椿(5. 7%)高40%,维生素C含 量比一般香椿高7. 1%。
权利要求
1.香椿的组织培养与快繁技术，其具体方法步骤是①选取香椿一年生半木质化的茎段或茎尖，去掉可见叶，在流动的自来水中进行冲洗；②在无菌室内的超净工作台上，进行消毒与灭菌，先用75％的酒精消毒处理，用0.1％的升汞灭菌后，再用无菌水冲洗干净，然后剪成1.0-1.5cm长含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到已灭好菌的分化诱导培养基中；③将接种到各个分化诱导培养基中的外植体，放在温度26±2℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d的环境中进行分化诱导培养，通过28-35天长成完整的植株；④再利用分化诱导培养出的植株，剪成小段放入增殖培养基中，在上述同等环境中进行增殖快繁；⑤扩繁到一定数量时，待生产种植以前，需放入生根培养基中进行生根培养，生根培养在上述同等环境中进行，壮苗生根后，转入练苗；首先打开封口膜时间5-7天，然后小心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，以防感染，用多菌灵浸泡灭菌，移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以1∶2的比例混合的基质中进行炼苗，前期适当遮阴并保持湿度在85-95％，逐步降至70％，15天后去掉薄膜罩，定期喷洒40％多菌灵800倍液杀菌，7-10天一次，共计2-3次。
2. 香椿组培快繁用培养基是由基本培养基、生长调节剂附加蔗 糖和琼脂配制成的分化诱导培养基、增值培养基和生根培养基；基本 培养基为MS，生长调节剂分别由6-苄基腺嘌呤(6-BA)、 a-萘乙酸(NAA)、 口引噪丁酸(IBA)、赤霉素(GA3)组合而成(1 )、分化诱导培养基的配比是基本培养基1升、6-节基腺嘌 呤(6-BA) 0, 5-3. Omg, a-萘乙酸(NAA) 0. 5-3. Omg,赤霉素(GA3) 0. 5-3. 0mg,蔗糖30g，琼脂6-8g;(2 )、增殖培养基的配比是基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤(6-BA)(1. 0-5. Omg, a-萘乙酸(NAA)O. 5-2. 5mg， 口引噪丁酸(IBA) 0. 5-3. Ong， 赤霉素(GA3) 0. 5-3.0mg,蔗糖30g,琼脂6-8g;(3)、生根培养基的配比是1/2基本培养基1升、a-萘乙酸(NAA) 1-3mg,蔗糖20g,琼脂6-8g。
全文摘要
香椿的组织培养与快繁技术，是从正在生长的植株中，剪取当年生半木质化腋芽饱满的枝条，经杀菌、消毒，剪成含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到分化诱导培养基中，进行分化培养；再利用分化培养出的植株，放入增殖培养基中进行增殖快繁；扩繁到一定数量时，放入生根培养基中进行壮苗生根培养，壮苗生根后，转入练苗。该方法利用香椿的茎尖、茎段进行无性组织快繁和脱毒，繁殖的后代保持了原品种的优良种性，确保了种质纯度，且无病虫害发生；克服了传统的用种子和扦根繁殖速度慢的弊端，可人为的控制培养生长条件，不受自然条件的影响，取材量小，可实现工厂化育苗、高效率生产。
文档编号A01H4/00GK101491215SQ20091006425
公开日2009年7月29日 申请日期2009年2月19日 优先权日2009年2月19日
发明者任德超, 余慧琳, 刘广卿, 周玉玲, 姜曙光, 孙凤岭, 孟宪政, 张家玉, 张福娟, 伟 李, 石红梅, 肖召杰, 振 谢 申请人:周玉玲