专利名称：一种抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高齿瓣石斛移栽成活率的方法，更具体的说涉及一种抗性处理
提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法。
背景技术：
石斛属(Dendrobium)是兰科第二大属，全球约有1500种，我国有74种2个变种， 其中可供药用的有40多种，主要分布于我国的华南和西南地区。其中，主要有铁皮石斛，紫 皮石斛，金钗石斛，齿瓣石斛、霍山石斛，密花石斛；石斛为名贵中药材，在我国有悠久的历 史，药用始载于《神农本草经》，列为上品，"味甘，平。主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳赢瘦， 强阴。久服厚肠胃，轻身延年。"其有效成分主要是石斛碱和多糖，目前广泛用于加工成保健 品、药品及石斛汤、石斛酒等饮品。药用植物栽培是保护、扩大、再生利用药用植物资源的最 直接、有效的手段。石斛属植物对生态条件的要求较高，栽培难度大，其栽培面积和规模受 到很大限制。通过在栽培的过程中进行炼苗是一种有效的提高种苗存活率的方法。中国专 利申请(200810195801.2)公开了一种铁皮石斛组培实生苗的炼苗方法，其主要是在组培 的瓶苗分别在瓶盖密封时、松盖时、揭盖、分别光照由若到强炼苗；并且在移栽是光照由弱 到强、湿度由大到小炼苗；上述专利期望通过炼苗达到提高铁皮石斛抗性的目的；但是效 果并不理想。
发明内容
本发明提供了一种抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，该方法包括 以下步骤 1)配制生根培养基在基本培养基加入香蕉提取液和蔗糖，香蕉提取液在生根培 养基中的重量百分比为15 30%，蔗糖在生根培养基中的重量百分比为1.5 3% ;每L 培养基加入激素0. 1 1. 0mg、琼脂2 4g，调pH5. 6 6. O，得到生根培养基;
2)前期培养试管苗有3 5条根、根长度> 2cm、植株高度〉3cm时移栽到生根
培养基上。 3)抗性处理将移栽到生根培养基上的试管苗置于可控温的环境中，升温至40 50。C或降温至2 8°C ，培养24 48小时； 4)后期培育将试管苗移栽到培养室大棚里培养20 40天，观察植株的变化，判 断是否达到抗性处理标准，未达到移栽标准则重复进行抗性处理；
5)幼苗移栽至苗床。 步骤1)所述的基本培养基为MS、1/2MS、N6、KC、KS或SH中的一种。
步骤1)所述的激素为NAA或IAA的一种。 步骤4)所述的判断是否达到抗性处理标准为期间观察，植株是否减缓伸长生长 并茎条长粗，若是则已达到处理标准；若仍保持旺盛的生长，则需要重新进行处理。保证培 育20天后，茎条变粗，部分叶片变黄或脱落为正常现象。
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步骤5)所述的苗床为床高10 15厘米、床宽1 1. 2米、支架0. 8 1. 0米，苗 床上的底料为木材加工的边皮废料或石棉瓦为下层，上层为碎树皮铺垫，厚度为5 10厘 米。 本发明的有益技术效果本发明通过植株在极端温度条件下，降低植株的生长代 谢速度，促进茎干的纤维化，增强强植株对环境的适应能力；使其在人工创造的逆境下尽快 茎条膨大，叶片脱落，抗性增强，进而提高移栽成活率，为一种较为简单的抗性处理工艺，可 操作性强，成本较低。
具体实施例方式
增殖培养基的制备在1L的KC加入1毫克NAA，制成固体培养基。 生根培养基的制备在MS加入香蕉提取液和蔗糖，香蕉提取液浓度为15 30%，
蔗糖浓度为1. 5 3% ;每L培养基加入NAAO. 1 1. 0mg、琼脂2 4g，调pH5. 6 6. 0制
成升根培养基。 苗床的制备利用木材加工的边皮废料或石棉瓦作底，做成床高10 15厘米、床
宽1 1. 2米、床长因地而定、支架0. 8 1. 0米的种植床。以碎树皮作为基质铺于苗床上，
厚度5 10厘米。碎树皮在使用前最好选用高温或药物消毒。 外植体的采集与灭菌，其操作步骤为 1)选择生长健壮的3cm 6cm长的新芽作外植体。 2)用消了毒的利刃将新芽从从母体切下。 3)经自来水冲洗30分钟后，剥去最外面一层叶鞘，在75%的酒精中迅速蘸一下， 立即放入15%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟，或放入0. 1%的升荥溶液中8 10分钟，并不 时用手轻摇。 4)取出后再剥去多余的组织，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5 10分钟，取出 后用无菌水冲洗数次，然后在无菌条件下剥去叶苞片，以顶芽或侧芽作为外植体接种于装 有增殖培养基的试管中进行增殖培养。 待到试管苗有3 5条根、根长度> 2cm、植株高度〉3cm时移栽到生根培养基上。
试管苗置于可控温的环境中，相对湿度控制为70 90 % ，光照强度2000 4000lx，升温至40 50°C ，培养36小时； 抗性处理后，用镊子或筷子轻轻取出幼苗，用自来水将根系上琼脂冲洗干净以防 止微生物的滋生。洗净后的试管苗用0.01%高锰酸钾或0. 1%的多菌灵或百菌清等杀菌 剂浸泡3 5分钟，稍微晾干后再栽入大棚里已准备好的苗床中。在大棚里(保证温度在 20 3(TC之间)培养20 40天。期间观察，植株是否减缓伸长生长并茎条长粗，若是则 已达到处理标准；若仍保持旺盛的生长，则需要重新进行上述的升温抗性处理。保证培育 20天后，茎条变粗，部分叶片变黄或脱落。 试管苗移栽前期要适当遮阴，并加强水分管理，一般用玻璃或塑料薄膜覆盖以保 持较高的空气湿度，但注意基质不宜过湿积水，以防烂苗。刚移栽成活的试管苗，可施用 1/2MS营养液补充营养促进小苗生长。此外，温度对成活率影响也很大，一般以23t: 28t: 最适宜，夏季温度过高、冬季温度过低时均较难管理，水少生长受影响，水多又易腐烂，成活 率下降。试管苗在移栽4 6周后，新梢开始生长，可用0. 1%的尿素和磷酸二氢钾作根外追肥，此时小苗即可转入正常管理。
权利要求
一种抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，其特征在于该方法包括以下步骤1)配制生根培养基在基本培养基加入香蕉提取液和蔗糖，香蕉提取液在生根培养基中的重量百分比为15～30％，蔗糖在生根培养基中的重量百分比为1.5～3％；每L培养基加入激素0.1～1.0mg、琼脂2～4g，调pH5.6～6.0，得到生根培养基；2)前期培养试管苗有3～5条根、根长度＞2cm、植株高度＞3cm时移栽到生根培养基上；3)抗性处理将移栽到生根培养基上的试管苗置于可控温的环境中，升温至40～50℃或降温至2～8℃，培养24～48小时；4)后期培育将试管苗移栽到培养室大棚里培养20～40天，观察植株的变化，判断是否达到抗性处理标准，未达到移栽标准则重复进行抗性处理；5)幼苗移栽至苗床。
2. 根据权利要求1所述的抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，其特征在 于步骤1)所述的基本培养基为MS、l/2MS、Ne、KC、KS或SH中的一种。
3. 根据权利要求1所述的抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，其特征在 于步骤1)所述的激素为NAA或IAA的一种。
4. 根据权利要求1所述的抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，其特征在于步骤4)所述的判断是否达到抗性处理标准为期间观察，植株是否减缓伸长生长并茎条长粗，若是则已达到处理标准；若仍保持旺盛的生长，则需要重新进行处理。保证培育20 天后，茎条变粗，部分叶片变黄或脱落为正常现象。
5. 根据权利要求1所述的抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，其特征在 于步骤5)所述的苗床为床高10 15厘米、床宽1 1. 2米、支架0. 8 1. 0米，苗床上 的底料为木材加工的边皮废料或石棉瓦为下层，上层为碎树皮铺垫，厚度为5 10厘米。
全文摘要
本发明公开了一种抗性处理提高齿瓣石斛试管苗移栽成活率的方法，包括前期培育，抗性处理，后期培育，幼苗移栽四个步骤，其有益技术效果是通过植株在极端温度条件下，降低植株的生长代谢速度，促进茎干的纤维化，增强强植株对环境的适应能力；使其在人工创造的逆境下尽快茎条膨大，叶片脱落，抗性增强，进而提高移栽成活率，为一种较为简单的抗性处理工艺，可操作性强，成本较低。
文档编号A01H4/00GK101695282SQ20091019121
公开日2010年4月21日 申请日期2009年10月26日 优先权日2009年10月26日
发明者孙年喜, 明兴加, 王昌华, 秦松云, 蒋渝, 钟国跃 申请人:重庆市中药研究院;