专利名称：一种用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法
技术领域：
本发明涉及一种生产环链拟青霉菌剂方法，具体地说是涉及一种用啤酒废渣生产 环链拟青霉菌剂的方法。
背景技术：
环链拟青霉(ecilomyces cateniannulatus)能够防治多种农作物害虫，利用环链 拟青霉的真菌制剂进行农作物害虫的防治具有巨大的潜力。已经进行了哺乳动物急慢性毒 理试验，对哺乳动物安全，多名学者研究指出林间的环链拟青霉的存在量较大，对多种林间 田间的害虫有生物防治作用。啤酒废渣的主要成分是麦壳和残留的淀粉、蛋白质等。啤酒废水主要是啤酒厂的 偏碱性的洗瓶、洗灌水，含有多种营养物质和微量元素，适宜微生物生长。据有关统计资料， 我国啤酒年产已达4000万t，按每生产1万t啤酒产干渣280t计，啤酒行业每年的啤酒干 渣产出量达112万t以上，目前国内啤酒厂家的啤酒废渣大多数没有进行深加工利用，较多 情况是出售给农户成为饲料使用，而根据研究指出，家禽甚至猪等动物食用啤酒渣后可能 会出现“啤酒渣中毒”现象。所以导致大量的啤酒渣被废弃，污染环境，甚至成为多种有害 微生物滋长的温床。在现在的农作物生产中，广泛使用化学农药，虽然防治效果较好，但是化学农药制 剂高毒性、高残留的特性污染环境，污染农产品，农产品中农药超标造成中毒，农产品被勒 令退回甚至罚没销毁的事件时有发生。农药的生产又大量使用社会紧缺的资源和能源，造 成了大量的温室气体的排放。鉴于此，采用生物方法防治农作物害虫代替传统的化学防治 成了必然趋势。由于啤酒渣中含有大量的没有被完全利用的碳源氮源物质，且碳氮比较高，故被 微生物利用后前期产酸性就十分严重，严重抑制真菌的生长，故国内外均较少利用啤酒渣 作为培养基主体培养真菌等微生物。迄今尚未见有用啤酒废渣作为原料生产环链拟青霉菌的相关报导。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法，解决了以啤 酒渣作为主体培养生防真菌的问题。该方法既可以提供高效无毒的生物防治菌剂，又可以 解决啤酒废渣排放的问题。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种用啤酒废渣生产环链拟青霉菌 剂的方法，包括如下步骤步骤一一级培养，用马铃薯_葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，装成试管斜面，接种 环链拟青霉菌种，在20-25°C培养7-14天；得到纯种斜面培养物；步骤二 二级培养，培养液按重量百分比计5-25%啤酒废渣、75-95%啤酒废水， 配比混合，调PH值5-9 ；经高压灭菌后接种一级培养的纯种斜面培养物，通气震荡培养，于
3在12-28°C下培养6-14天；得到纯种液体培养物；步骤三三级培养，按重量百分比计，培养基组分为85-99%的啤酒废渣、1-5%的 氯化钠、5-15%的废酵母泥提取物与2%碳酸钙混合，湿度在RH40-75之间，接种二级培养 的纯种液体培养物，于在12_28°C下培养6-14天；干燥后成为饼块状或颗粒状固体培养物。优选技术方案是，所述的一级培养是在24°C _26°C培养7-9天；所述的二级培养中 培养液是啤酒废渣啤酒废水的重量比为20 80 ；培养条件为24°C-26°C、PH 7-7.5，震 荡培养7-9天；所述的三级培养是重量比为90%啤酒废渣、氯化钠和9%啤酒酵母泥培 养基，在湿度RH60-70培养10-12天。所述的步骤三中干燥方法为自然晾干或低于40°C低温烘干。与已有技术相比，本发明有益效果体现在本发明的最大特点在于对啤酒废渣中的营养成分的综合利用，且由于采用三步法 培养，解决原本不适宜用在生产环链拟青霉菌剂的啤酒废渣的问题。试验表明，用此法生产的环链拟青霉菌剂，每克样品含3X 108-9.5X 109孢子，按 照每平方米3克的使用量播撒到农田中，可有效降低虫口密度。环链拟青霉菌剂作为一种 新型生物防治菌剂，可用于温带，亚热带、热带田间和寒带、温带，亚热带、热带的温室或大 棚的农作物害虫防治中。有效的降低虫口密度，提高农作物产量，减少化学农药的使用，提 高农产品在国际市场的竞争力。并用啤酒的废料制造该菌剂，使废料资源化，减少环境污染 压力，提高啤酒废渣利用率，增加其附加价值。下面通过具体实施例来进一步说明本发明。
具体实施例方式实施例1 用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂将纯化的环链拟青霉菌种接种到马铃薯-葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，在 20-25 °C培养8天。用5克啤酒废渣，95克啤酒废水，盐酸和氢氧化钠调PH值至6. 5-7. 5，高 压灭菌后接种一级培养的环链拟青霉，25°C培养8天。再取85克榨干的啤酒废渣、5克废酵 母泥提取物、1克氯化钠和1克碳酸钙接种等量二级培养物，于25°C培养10天，湿度RH50。 风干后成饼块状，干燥方法为自然晾干或低于40°C低温烘干。称取1克菌剂，于组织捣碎机内加水搅散，定容至100ml，用血球计数板法计算得 出，每克含孢子3. 5X108个。实施例2 用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂将纯化的环链拟青霉菌种接种到马铃薯-葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，在 20-25°C培养8天。用20克啤酒废渣，80克啤酒废水，盐酸和氢氧化钠调PH值至6. 5-7. 5， 高压灭菌后接种一级培养的环链拟青霉，25°C培养8天。再取95克榨干的啤酒废渣、15克废 酵母泥提取物、1克氯化钠和1克碳酸钙接种等量二级培养物，于25°C培养10天湿度RH50。 风干后成饼块状。称取1克菌剂，于组织捣碎机内加水搅散，定容至100ml，用血球计数板法计算得 出，每克含孢子5. 5X109个。实施例3 用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂将纯化的环链拟青霉菌种接种到马铃薯-葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，在20-25 °C培养8天。用25克啤酒废渣、75克啤酒废水，盐酸和氢氧化钠调PH值至6. 5-7. 5， 高压灭菌后接种一级培养的环链拟青霉，25°C _26°C培养8天。再取85克榨干的啤酒废渣、 15克废酵母泥提取物、1克氯化钠和2克碳酸钙接种等量二级培养物，于25°C培养10天。 风干后成饼块状。称取1克菌剂，于组织捣碎机内加水搅散，定容至100ml，用血球计数板法计算得 出，每克含孢子8. 5X109个。实施例4 用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂对蚜虫的致病性试验。用纯化的环链拟青霉菌种集中到一级培养斜面，25°C培养7天，接种到二级培养， 再在25-27°C培养7天，接种到三级培养，26°C培养10天。风干后成饼状。经此培养后的1 克菌剂经血球计数板计数，每克含菌剂孢子9 X109个。将本实施例的菌剂1克倒入适量的 0. 05%土温-80溶液，震荡后稀释成各浓度备用。人工饲料饲养得到2、3、4龄幼虫。准备新鲜的离体甘蓝叶片，并以吸足标准十字 花科营养液的棉球包裹叶柄，将20°C下饲养10日龄的桃蚜无翅成蚜移到叶片上，繁殖24h 后移去，保留若蚜饲养至2，3，4龄时供生物测定。
拟青霉菌丝包围的虫数
致死率(％) =- X 100%
总虫数摘取长有蚜虫的甘蓝叶柄用浸湿加营养液的脱脂棉球包裹叶柄，然后将叶片(叶 柄不浸入)浸入含有菌悬液的烧杯中2-3S立即取出，室温下将蚜虫和叶片晾干，置于铺滤 纸的培养皿内。每皿一片叶每片叶上15-40头虫，26°C恒温培养。每3d给棉球加一次无菌 水，每日光照10h，镜检死亡率，连续8d。致死效果如表1所示。表一、环链拟青霉对不同蚜龄的蚜虫致死率 本实验表明，利用本实施例生产的环链拟青霉菌剂，对农作物害虫中为害较为严 重的蚜虫防治效果较好，其致死率和校正致死率均较高。实施例5 环链拟青霉菌剂的田间防治试验将通过实施例1或2或3生产的环链拟青霉菌剂，于田间取地头土按照生防菌和 土重量比1 5进行混合，碾碎，于播种前1-2天犁耕后撒播于田间，能有效防治田间蚜虫， 白粉虱、小菜蛾、菜青虫等害虫。利用此法进行田间防治，其防治效果可持续90天。实施例6 环链拟青霉菌剂的田间防治试验将通过实施例1或2或3生产的环链拟青霉菌剂，碾碎后直接拌种，播撒至田间， 然后可直接进行其他标准的田间后续操作，本方法可有效防治地老虎等啮根茎害虫。
权利要求
一种用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法，包括如下步骤步骤一一级培养，用马铃薯 葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，装成试管斜面，接种环链拟青霉菌种，在20 25℃培养7 14天；得到纯种斜面培养物；步骤二二级培养，培养液按重量百分比计5 25％啤酒废渣、75 95％啤酒废水，配比混合，调PH值5 9；经高压灭菌后接种一级培养的纯种斜面培养物，通气震荡培养，于在12 28℃下培养6 14天；得到纯种液体培养物；步骤三三级培养，按重量百分比计，培养基组分为85 99％的啤酒废渣、1 5％的氯化钠、5 15％的废酵母泥提取物与2％碳酸钙混合，湿度在RH40 75之间，接种二级培养的纯种液体培养物，于在12 28℃下培养6 14天；干燥后成为饼块状或颗粒状固体培养物。
2.如权利要求1所述的用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法，其特征是所述的一 级培养是在24°C _26°C培养7-9天；所述的二级培养中培养液是啤酒废渣啤酒废水的重 量比为20 80;培养条件为24°C-26°C、PH 7-7. 5，震荡培养7_9天；所述的三级培养是重 量比为90%啤酒废渣、氯化钠和9%啤酒酵母泥培养基，在湿度RH60-70培养10-12天。
3.如权利要求1或2所述的用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法，其特征是所述 的步骤三中干燥方法为自然晾干或低于40°C低温烘干。
全文摘要
本发明公开了一种用啤酒废渣生产环链拟青霉菌剂的方法，先将纯化后的环链拟青霉菌种接种在真菌培养基斜面上，经培养后再接种到由啤酒废渣、啤酒废水配成的液体培养基，震荡培养扩繁后再接种到由啤酒废渣为主要原料的固体培养基上，在12℃-28℃下培养6-14天，即得。制成的环链拟青霉固体菌剂作为一种杀虫剂，可用于多种农作物的害虫防治。有效地降低虫口密度，提高农作物产量，减少化学农药的使用。并且用啤酒的废料制造该菌剂，使废料资源化，减少环境污染，提高啤酒废渣利用率，增加其附加价值。
文档编号A01N63/04GK101892161SQ20101016899
公开日2010年11月24日 申请日期2010年5月12日 优先权日2010年5月12日
发明者吴卫东, 张俊, 李丰伯, 杜继龙, 鲁超 申请人:黄山市迎客松生物科技有限公司;李丰伯