专利名称：一种金叶黄杨的组织培养方法
技术领域：
本发明涉及一种草本植物的组织培养方法，尤其是涉及一种金叶黄杨的组织培养方法。
背景技术：
金叶黄杨常绿灌木，株形紧凑，新叶亮黄色，繁茂成熟后变为深绿色具黄斑。喜光， 较耐寒，北京地区可陆地越冬，喜温暖湿润气候及肥沃排水良好大的土壤，是良好的花镜与庭院观赏灌木，也可做绿篱或做模纹材料。金叶黄杨为国外引进的品种，观赏性优良，但引种数量较少，其繁殖慢，市场需求量大，种苗供应受限制。通过组培技术，极大提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状。金叶黄杨在国内组培的报道尚未见。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可极大提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状的一种金叶黄杨的组织培养方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，该方法是摘取金叶黄杨上部的小芽依次进行无菌化处理、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养和炼苗与移栽得到金叶黄杨种苗。所述的无菌化处理是将摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，经无菌水冲洗5-6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于诱导培养基上；所述的芽的分化和增殖是小芽接种于诱导培养基上6周后，小芽基部开始膨大， 出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养；所述的不定芽壮苗培养是在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20天后可以长成2-3cm的小植株；所述的生根培养是取高度为2_3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，20 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm ；所述的炼苗与移栽是生根培养20-30天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。所述的小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的小芽诱导培养基的成分优选MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L0所述的增殖培养基的成分为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
所述的增殖培养基的成分优选MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L0所述的壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L，优选 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培养基的成分为MS+NAAO. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAAO. 2mg/L。所述的生根培养基的成分优选MS+NAAO. lmg/L。所述的小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为2446°C，光照为70-90 μ mol/ms，pH值为 5. 5-6. O。与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡30s，lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. lmg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为 100% ；(5)炼苗与移栽生根培养25天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。实施例2一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理
摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡20s，lwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. 05mg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。实施例3—种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡40s，lwt%。的升汞溶液浸泡20min，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. 2mg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养30天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。实施例4一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡30s，lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. lmg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm，根系粗壮，须根众多，生根率为 100% ；(5)炼苗与移栽继续生根培养25天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。所述的小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基成分还包括蔗糖 30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为M°C，光照为70μπιΟ1/πι8，ρΗ值为5. 5。实施例5一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡20s，lwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养
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在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. 05mg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽 继续生根培养20天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。所述的小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基成分还包括蔗糖 30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25°C，光照为SOymol/ms，pH值为5. 8。实施例6一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌化处理摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt% 的乙醇浸泡40s，lwt%。的升汞溶液浸泡20min，经无菌水冲洗5_6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L上；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上3周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月后，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA3. Omg/ L+NAA0. 3mg/L进行培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在增殖培养基上诱导出丛生芽，丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基MS+NAAO. 2mg/L中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养30天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可，移栽成活率为95%。所述的小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基成分还包括蔗糖 30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为^°C，光照为90μπιΟ1/πι8，pH值为6. 0。
权利要求
1.一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，该方法是摘取金叶黄杨上部的小芽依次进行无菌化处理、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养和炼苗与移栽得到金叶黄杨种苗。
2.根据权利要求1所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的无菌化处理是将摘取金叶黄杨上部的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为 75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，经无菌水冲洗5-6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长接种于诱导培养基上；所述的芽的分化和增殖是小芽接种于诱导培养基上6周后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，1周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养；所述的不定芽壮苗培养是在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20天后可以长成2-3cm的小植株；所述的生根培养是取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm ；所述的炼苗与移栽是生根培养20-30天，根系长至l-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外， 给予肥水管理即可。
3.根据权利要求2所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根据权利要求3所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的成分优选MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
5.根据权利要求2所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
6.根据权利要求5所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的成分优选 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
7.根据权利要求2所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L 或 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L，优选 MS+6-BA0· 5mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根据权利要求2所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的成分为 MS+NAA0. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAA0. 2mg/L。
9.根据权利要求8所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的成分优选MS+NAA0. lmg/L。
10.根据权利要求1所述的一种金叶黄杨的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为2446°C，光照为70-90μπιΟ1/πι8，ρΗ值为5. 5-6. 0。
全文摘要
本发明涉及一种金叶黄杨的组织培养方法，该方法是摘取金叶黄杨上部的小芽依次进行无菌化处理、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养和炼苗与移栽得到金叶黄杨种苗。与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量，移栽成活率可达95％。
文档编号A01H4/00GK102293150SQ20101020712
公开日2011年12月28日 申请日期2010年6月22日 优先权日2010年6月22日
发明者沈勤, 陈建华, 黄建荣 申请人:上海上房园艺有限公司