专利名称：中国蕙兰组织培养的培养基及培养方法
技术领域：
本发明涉及植物的组织培养领域，具体涉及一种中国蕙兰组织培养的培养基配 方，以及利用该培养基培养原球茎或根状茎的方法。
背景技术：
蕙兰新品种主要依赖于野生植株中筛选，迄今为止，蕙兰野生资源在江、浙、皖三 省已濒临灭绝。在2001年底正式启动的全国野生动植物保护及自然保护区建设工程中， 兰科植物被作为15个野生动植物类群之一，被列入工程建设的重点，兰科植物全部被列入 《国家重点保护野生植物名录(第二批)》，从而纳入《中华人民共和国野生植物保护条例》 的保护范围。规定对野生来源的兰花，禁止商业性的国际贸易。单一依靠从蕙兰野生植株中选择优良品种和利用传统分株方法繁殖扩大蕙兰规 模已成为制约我国国兰产业发展的瓶颈。解决这一问题的根本途径就是通过现代生物技术 克服蕙兰种子在天然条件下几乎不能萌发成苗的技术问题，为杂交育种和种苗快繁提供技 术支撑，建立人工培植基地，这是解决好保护与利用的矛盾，实现蕙兰可持续发展的行之有 效的途径，对于保持和促进中国兰花产业的健康发展具有重要意义。与大花蕙兰、蝴蝶兰等洋兰相比，国兰组织培快繁技术难度相对较大，目前尚未建 立成熟的组培快繁生产体系。蕙兰是我国五大国兰之一，根据前人的研究报告，种子萌发形成原球茎已经成功， 将原球茎继续分化成芽或根，也已成功。但在实际工作中，如按照前人报导的配方从事生 产，重复性并不理想。在已查阅的3篇经典论文中，以Yongqin Chen的技术最为成熟，但是 母液配方较为复杂，原球茎组培成苗需要分两步实施。在CN101622955《一种适宜蕙兰种子无菌萌发培养基组合物及其方法》专利中，公 开的配方为改良基本培养基+6-BA0. 5 1. Omg/L+NAA 0. 5 1. Omg/L，活性碳lg/L，椰子 汁50-100m/L。但是，这只是一种适于种子无菌萌发形成原球茎的培养基，而对生芽生根情 况未有说明。(注兰花种子萌发后，先形成原球茎，然后再分化芽或根，一般需要在不同的 培养基上分化)。现有文献(杨宁生，杨柏云，钟青萍.蕙兰Cymbidium faberi rolfe种子无菌培 养的研究[J].江西科学，1994，6 (2) :80 84)还显示原球茎MS培养基+NAA 0. 5mg/L+6-BA lmg/L 5个月部分原球茎能诱导成苗。但是不足之处在于成苗率情况没有数据显示。在另一 艮道中(Yongqin Chen, Xiao Liu, Youqi Liu. In vitro plant regeneration from the immature seeds of Cymbidium faberi[J]. Plant Cell, Tissue and Organ Culture，2005，81 :247 251)，对杨宁生文献的配方改进为，①蕙兰原球茎在改 良MS培养基+NAA 0. 5-1. Omg/L+6-BA 2_5mg/L培养60天诱导芽；②转至改良MS培养基 +Ac (活性碳)lg/L中培养50天后生根。但是，该方法仍然存在改良MS培养基母液的配制 较为复杂，生芽与生根需要分两步进行，增加药品成本与人工成本的不足。
发明内容
为了克服现有蕙兰组培配方复杂，生芽与生根需要分步进行，以及药用成本与人 工成本高的不足，本发明提供一种蕙兰原球茎或根状茎组织培养一步成苗的配方，利用该 配方可以实现一步成苗，有效地解决了问题。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种中国蕙兰组织培养的培养基，是在花宝1号基本培养基中添加吲哚丁酸 (IBA)O. 5mg/L，萘乙酸(NAA)O. 2mg/L,蔗糖 30g/L,琼脂 4g/L，活性炭 lg/L，椰乳 10% (V/ V)，pH 为 5.6。本发明还公开了使用上述配方进行组织培养的方法，其步骤是1)选材选生长健康的绿色原球茎或根状茎；2)按以下配方配制培养基花宝1号基本培养基+IBA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗 糖 30g/L+ 琼脂 4g/L，活性炭 lg/L+ 椰乳 10% (V/V)，pH 为 5. 6 ；3)接种培养将原球茎或根状茎接入到上述步骤2)的培养基中，放在25士2°C、光 照2000-30001x的培养室内培养至生根成苗。本发明的有益效果体现在1)该方法操作简便。步骤减少后，药品成本与人工成本降低，污染率降低。2)实用效果好。在接种后2个月开始发芽，3个月开始生根，5个月80%的原球茎 生根成苗，可进行炼苗移栽，缩短了蕙兰种苗生产和育种周期。
图1是原球茎接入本发明培养基；图2是原球茎在培养基中发芽生根；图3是组培苗生根成苗。
具体实施例方式在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常 理解的含义。下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本发 明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相 同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。花宝1号购于北京康倍斯科技有限公司。实施例1 将蕙兰品种‘老极品’ X ‘泰素’后，获得种子，在萌发培养基上培养8-10个月，获 得原球茎或根状茎后，按本发明方法培养1)选择健康的绿色原球茎或根状茎为材；2)配培养基用花宝1号做为基本培养基，添加0. 5mg/L IBA+0. 2mg/L NAA附加 蔗糖30g · L—1，琼脂4g · ΙΛ活性炭Ig · L—1，椰乳10 % (V/V)，PH为5. 6，分装到三角瓶中121 °C 灭菌 20min ；3)接种将步骤1)选好的材质接种在步骤2)的培养基上，尽量带块接不要切开 或掰开；每瓶接6-8个原球茎(图1)；4)培养条件放在25士2°C培养室内培养，光照2000-30001x ；在接种后2个月左右部分发芽，3个月芽长高、绽开叶，有的部分生根，根数2-3条， 根长0. 8-4cm不等(图2)，4个月左右根苗变粗壮，5个月左右大部分生根成苗(图3)，生 根率达80%左右，生根数4-6条。有的可进行炼苗移栽。有的再放几个月根系和苗继续变 粗壮。本发明不限于这些公开的实施方案，本发明将覆盖在专利书中所描述的范围，以 及权利要求范围的各种变型和等效变化。
权利要求
一种中国蕙兰组织培养的培养基，是以花宝1号为基本培养基，其特征在于，在基本培养基中添加吲哚丁酸0.5mg/L，萘乙酸0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂4g/L，活性炭1g/L，椰乳10％(V/V)，pH为5.6。
2.一种中国蕙兰组织培养的方法，包括选材、培养基配制、接种培养的步骤，其特征 在于，所说的培养基的配方为以花宝1号为基本培养基，在基本培养基中添加吲哚丁酸 0. 5mg/L，萘乙酸 0. 2mg/L,蔗糖 30g/L,琼脂 4g/L，活性炭 lg/L,椰乳 10% (V/V)，pH 为 5. 6。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，具体步骤为1)选材选生长健康的绿色原球茎或根状茎；2)按以下配方配制培养基花宝1号基本培养基+IBA0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖 30g/L+ 琼脂 4g/L，活性炭 lg/L+ 椰乳 10% (V/V)，pH 为 5. 6 ；3)接种培养将原球茎或根状茎接入到上述步骤2)的培养基中，放在25士2°C、光照 2000-30001x的培养室内培养至生根成苗。
全文摘要
本发明涉及植物的组织培养领域，具体涉及一种中国蕙兰组织培养的培养基配方，以及培养方法。本发明的培养基是以花宝1号为基本培养基，在基本培养基中添加吲哚丁酸0.5mg/L，萘乙酸0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂4g/L，活性炭1g/L，椰乳10％(V/V)，pH为5.6。在进行组织培养时，将选好的健康原球茎或根状茎接种到上述培养基中培养至成苗。该方法操作简便，一步成苗，药品成本与人工成本降低，污染率降低，实用效果好，缩短了蕙兰种苗生产和育种周期。
文档编号A01H4/00GK101889550SQ201010244860
公开日2010年11月24日 申请日期2010年8月4日 优先权日2010年8月4日
发明者俞丽琴, 孔芬, 陶俊 申请人:扬州大学