专利名称：一种热带无爪螨的长期维持培养方法
技术领域：
本发明属生物技术领域，涉及一种热带无爪螨的培养方法，尤其涉及一种热带无爪螨的长期维持培养方法。
背景技术：
当前，变应性疾病日趋严重，尘螨是重要的室内变应原，在热带和亚热带地区与人类过敏性疾病关系最密切的是热带五爪螨。近年来有文献报道热带无爪螨的变应原与户尘螨和粉尘螨的变应原具有明显的交叉反应性，研究显示，对户尘螨和粉尘螨过敏的患者中， 86%对热带无爪螨皮肤点刺试验呈阳性反应。作为重要的变应原种类，热带无爪螨排泄物、 蜕皮物、分泌物、虫卵等均可以引起过敏性哮喘、过敏性鼻炎、遗传性过敏性皮炎、荨麻疹等多种变应性疾病。研究显示，热带五爪螨的纯培养为实验室研究螨体或其排泄物的变应原性以及螨性变应性疾病的疫苗发展提供了物质基础。另外，目前广泛应用于临床的脱敏治疗所用制剂亦为稀释的天然抗原。目前对粉尘螨和户尘螨培养，各方面条件都比较成熟，国内亦有相关文献发表，但尚未见成功建立起热带无爪螨培养体系的报道。对于热带无爪螨的培养，其温度和湿度的控制与其他尘螨一致，对不同培养基的选择会有不同的结果。研究显示，一般的面粉、米粉不能满足其生长所需条件，而加入鱼粉、肝粉、人皮屑等物后不但成本很高，而且热带无爪螨生长速度很快，3-4周如不转种，螨虫在5-6周时就死亡殆尽。目前有关热带无爪螨的长期维持培养条件尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种热带无爪螨的培养方法，尤其涉及一种热带无爪螨的长期维持培养方法。本方法通过毛发针挑取热带无爪螨后初期小量培养和进行大瓶大量培养及培养后计数等，尤其是选用的培养基方便易得，配比合理，在可控的温度和湿度下，对热带无爪螨进行培养，能达到较好效果。具体而言，本发明的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，其包括步骤 1、初期小量培养，
传统方法挑取螨类，一般采用解剖针。但由于解剖针为钢性材质，螨类爬上以后，不易使其落下，易造成时间浪费；
本发明中，采用毛发针从保存的热带无爪螨中挑取单头孕螨至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶(底面积4cm2左右，高度Icm左右)中培养，保持培养物繁殖速度适中，1_2周后确定增长良好且无杂螨，可转入大瓶大量饲养；
本发明中，所述的毛发针选自人的头发或睫毛或眉毛或猪鬃，以棉线固定于竹签。本发明中，所述培养基含下述重量配比的组分酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)动物饲料(市售实验室动物饲料)为1:1，动物饲料磨碎后过100目网筛。
2、大量培养
将动物饲料和酵母粉按质量比1 1混合后140° C干热烘烤2小时，每天一次，连续3 天，装瓶备用，大量培养时，取50-100头螨放入含2-3克培养基的培养瓶内，充分摇勻进行培养。本发明的一个实施例中，小量培养1-2周后确定增长良好，挑取100头热带无爪螨转入2. 5g培养基，连续培养6个月(每0. 01克培养基内含40-80头热带无爪螨)与培养1 个月后虫体密度近似(每0. 01克培养基内含50-100头左右热带无爪螨)。3、称重少许含热带无爪螨的培养基并在解剖镜下检测计数。现有技术中，一般多采用开放式培养容器培养螨类，虽然培养过程培养容器加盖， 但需隔两三天取出透气，还是较难避免杂螨或其它昆虫进入培养系统，造成污染；或有采用棉花、纸塞塞堵瓶口，该方式虽可以保证空气的进出，但由于孔隙大小较难控制，仍然难以杜绝螨类进出。本发明中，选用玻璃材质培养瓶，瓶口光滑，高度大于Icm ；底面积Mem2’,Wattman 3MM滤纸封口，利于湿热消毒和易镜下观察。本发明中，采用培养温度为27° C，湿度为75%。本发明中，采用饱和食盐水或雾化器控制培养湿度，所述饱和食盐水溶液含 0. Γ0. 5%的新洁尔灭(苯扎溴铵)，能防止培养系统内霉菌生长。本发明方法与现有技术比较，具有如下优点
(1)避免了传统方法挑取螨类费事、费时及采用开放式培养容器易造成污染、培养物繁殖速度慢，纯度低的缺陷；
(2)采用的培养基方便易得，配比合理，培养物繁殖速度适中，适合热带无爪螨的长期培养保种。为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明的热带无爪螨的长期维持培养方法进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
具体实施例方式实施例1
采用人头发以棉线固定于竹签制成毛发针，用毛发针挑取一头保存的热带无爪螨孕螨至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶中培养，所述玻璃瓶底面积km2，高度1cm，1_2周后确定增长良好且无杂螨，转入大瓶大量饲养，所述培养瓶选用玻璃材质，瓶口光滑，Wattman 3MM滤纸封口。培养温度为27° C，有利于湿热消毒和易镜下观察。所述培养基含酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)和实验室动物饲料 (市售)，动物饲料磨碎后过100目网筛。使用前，将动物饲料和酵母粉按质量比1 1混合后140° C干热烘烤2小时，每天一次，连续3天，装瓶备用；大量培养时，取50-100头螨放入含2-3克培养基的培养瓶内，充分摇勻进行培养。本方法中，采用饱和食盐水控制培养湿度在75%，溶液含0. 1 0. 5%的新洁尔灭(苯扎溴铵)，能防止培养系统内霉菌生长。本方法中，保持培养物繁殖速度适中，小量培养1-2周后确定增长良好，挑取100 只热带无爪螨转入2. 5g培养基，4周后检测计数，结果显示，每0. 01克培养基中含50-100 头左右热带无爪螨；对周后再次检测计数，每0. 01克培养基内含40-80头左右热带无爪螨，虫体密度近似，活力无减弱。
实施例2
采用猪鬃以棉线固定于竹签制成毛发针，用制得的毛发针挑取一头保存的热带无爪螨孕螨至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶中培养，所述玻璃瓶底面积4cm2，高度1cm，1-2周后确定增长良好且无杂螨，转入大瓶大量饲养。所述培养基含酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)和实验室动物饲料(市售)，动物饲料磨碎后过100目网筛。使用前，将动物饲料和酵母粉按质量比1 1混合后140° C干热烘烤2小时，每天一次，连续3天，装瓶备用。大量培养时，取50-100头螨放入含2-3克培养基的培养瓶内， 充分摇勻进行培养即可。为利于湿热消毒和易镜下观察，本方法所述培养瓶选用玻璃材质，瓶口光滑， Wattman 3MM滤纸封口。培养温度为27° C。采用雾化器控制湿度在75 %。培养物繁殖速度适中，小量培养1-2周后确定增长良好，挑取100只热带无爪螨转入2. 5g培养基，4周后检测计数，结果显示每0. 01克培养基中含50-100头左右热带无爪螨；对周后再次检测计数，结果显示，每0. 01克培养基内含40-80头左右热带无爪螨，虫体密度近似，活力无减弱。
权利要求
1.一种热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，其包括步骤1)初期小量培养，采用毛发针挑取单头孕螨至盛有培养基的小号玻璃瓶中培养，保持培养物繁殖速度， 1-2周后确定增长良好且无杂螨，转入大瓶大量饲养；所述培养基含有重量配比为1:1的酵母粉和动物饲料；2)大量培养将动物饲料和酵母粉按质量比1:1混合后140° C干热烘烤2小时，每天一次，连续 3天，装瓶备用，大量培养时，取50-100头螨放入含2-3克培养基的培养瓶内，摇勻进行培养；3)称重含热带无爪螨的培养基并在解剖镜下检测计数。
2.按权利要求1所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，所述的毛发针选自人的头发或睫毛或眉毛或猪鬃，以棉线固定于竹签制得。
3.按权利要求1所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，所述的动物饲料磨碎后过100目网筛。
4.按权利要求1所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，所述的玻璃培养瓶采用Wattman滤纸封口。
5.按权利要求1所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，所述的培养温度为27° C，湿度为75%。
6.按权利要求5所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，该方法采用饱和食盐水或雾化器控制培养湿度。
7.按权利要求6所述的热带无爪螨的长期维持培养方法，其特征在于，所述的饱和食盐水溶液含ο. Γ0. 5%的新洁尔灭。
全文摘要
本发明属生物技术领域，具体涉及一种热带无爪螨的长期维持培养方法。本方法通过毛发针挑取热带无爪螨后初期小量培养和进行大瓶大量培养及培养后计数等步骤，在可控的温度和湿度下培养热带无爪螨，达到较好效果。本方法避免了传统方法挑取螨类费事、费时及采用开放式培养容器易造成污染、培养物繁殖速度慢，纯度低的缺陷；采用的培养基方便易得，配比合理，培养物繁殖速度适中，适合热带无爪螨的长期培养保种。
文档编号A01K67/033GK102461481SQ20101054597
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月16日 优先权日2010年11月16日
发明者杨彬, 程训佳 申请人:复旦大学