专利名称：蛋白酶体抑制剂mg132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及蛋白酶体抑制剂MG132的一种新功能，具体是蛋白酶体抑制剂 MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。
背景技术：
使用有机杀虫剂是消灭农林、卫生害虫，保证农林作物增产和人民身体健康的 重要手段。然而，随着有机杀虫剂的广泛使用和剂量增加，导致了害虫抗药性的发生及 发展，增大了利用杀虫剂消灭害虫的难度，加剧了对环境的破坏和对人类健康的威胁。 因此，寻找有效方法，提高害虫对有机杀虫剂的敏感性是目前迫切需要解决的问题。
蛋白酶体是生物体内的一种巨型蛋白质复合物，主要作用是降解细胞不需要的 或受到损伤或折叠错误的的蛋白质。蛋白酶体也是一类抗原递呈系统(Class I Antigen Presentation)的重要成员。MG132是一种蛋白酶体抑制剂，它可以与蛋白酶体的催化亚 基结合从而抑制蛋白酶体的功能。发明内容
本发明的目的是提供蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途。
本发明的技术方案是蛋白酶体抑制剂MG132可以作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。
上述技术方案中所说的菊酯类杀虫剂可以是但不仅限于溴氰菊酯。
上述技术方案中所说的蛋白酶体抑制剂可以是但不仅限于MG132.发明人使用蛋白酶体抑制剂MG132抑制抗溴氰菊酯蚊细胞的蛋白酶体功能，随后用 CCK-8法对细胞存活率进行检测。结果显示，使用蛋白酶体抑制剂MG132处理抗溴氰 菊酯蚊细胞后，细胞在溴氰菊酯作用下的存活率较对照组明显降低(P<0.05),表明蛋白 酶体抑制剂MG132增加了蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。
参照世界卫生组织蚊幼虫生物测定的标准方法，进一步用蛋白酶体抑制剂 MG132和溴氰菊酯共同对蚊的四龄幼虫进行生物测定。结果显示，用蛋白酶体抑制剂 MG132处理的蚊四龄幼虫的存活率较对照组明显降低(p<0.05),表明蛋白酶体抑制剂 MG132增加了蚊幼虫对溴氰菊酯的敏感性。该实验使用了 3种不同抗性水平的蚊幼虫进 行检测，3次结果一致。
体内和体外的实验结果均表明，蛋白酶体抑制剂MG132可以增加蚊对溴氰菊酯 的敏感性。
蛋白酶体抑制剂MG132已经作为商品化试剂被应用于科学研究及其他领域。由 于其可以增加蚊虫对溴氰菊酯的敏感性，其作为溴氰菊酯杀虫剂的增效剂的应用可以理 解。具体的应用可以是但不仅限于以下方式，如将蛋白酶体抑制剂MG132添加到溴氰菊 酯中，可以增强杀虫剂的功效。
本发明的有益效果体现在，提供了蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途，为研 制新型高效的有机杀虫剂，提供了新途径。
图1是不同浓度的MG132对蚊抗性细胞存活率的影响。
图2是MG132处理后蚊抗性细胞对溴氰菊酯抗性的改变。
图3是不同浓度的MG132对蚊幼虫存活率的影响。
具体实施方式
实施例中所用的MG132购自美国Santa craz公司，溴氰菊酯购自美国Sgma公司。
除非特别说明，本发明中所使用的术语，一般为本领域普通技术人员通常理解 的含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只 是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方 法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其 后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例1蛋白酶体抑制剂MG132增加抗溴氰菊酯蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。
正常蚊C6/36细胞购自中国典型培养物保藏中心，在本实验室用溴氰菊酯逐代 筛选70余代，建立抗溴氰菊酯蚊C6/36细胞系,LC50为1256.8mg/ml，是正常蚊细胞的 8.9 倍。
发明者先设置一系列浓度梯度的MG132 (OuM-4 uM)作用于抗溴氰菊酯蚊细 胞，检测细胞存活率以确定合适的MG132实验浓度。如图1所示，选择IuM作为MG132在 实验中的浓度。
实验分对照组和实验组。实验组蚊细胞用IuM蛋白酶体抑制剂MG132处理， 对照组细胞则不做处理(DMSO对照)。在细胞培养液中加入一系列浓度梯度的溴氰菊 酯(10°·5,10, 101·5, 100,1025mg/L) 72小时后，用CCK-8法检测细胞的存活率。
实验结果(图2)在1(^,10,1015, 100,1025mg/L的溴氰菊酯浓度下，实验组 的细胞存活率依次为90% , 76% , 74% , 59%和50%，对照组的细胞存活率依次为97% , 93%, 85%, 75%和74% (P<0.05)。实验组细胞存活率较对照组相比显著降低，表明 蛋白酶体抑制剂MG132可以提高抗溴氰菊酯蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。
实施例2蛋白酶体抑制剂MG132增加抗溴氰菊酯蚊四龄幼虫对溴氰菊酯的敏感 性。
淡色库蚊敏感品系由中国军事医学科学院提供，从未暴露于任何杀虫剂，其对溴 氰菊酯的LC50为O.OOSppm;在本实验室经过不同浓度的溴氰菊酯数十代筛选，得到了 不同水平的抗性蚊，分别用0.05ppm和0.56ppm的溴氰菊酯维持培养。实验分MG132对 照组，溴氰菊酯对照组和MG132+溴氰菊酯实验组，每组20只蚊四龄幼虫，分别在3种品系蚊中进行实验。
为了确定合适的MG132工作浓度，我们将蚊四龄幼虫暴露于一系列浓度梯度的 MG132 (OuM —8 uM)中，观察幼虫存活。结果如图3，选择1 uM作为MG132在实 验中的浓度。
MG132对照组用IuM MG132处理蚊四龄幼虫M小时，计数幼虫存活数。
溴氰菊酯对照组将幼虫暴露于溴氰菊酯M小时后，计数幼虫存活数。
MG132+溴氰菊酯实验组先用luMMG132处理蚊四龄幼虫，将幼虫暴露于溴氰 菊酯M小时后，计数幼虫存活数。
实验结果存活0.56ppm 0.05ppm 0.008ppmMG132 对照组202019溴氰菊酯组对照组131715MG132+溴氰菊酯实验组 51211结果表明，使用蛋白酶体抑制剂MG132后可以增加蚊幼虫对溴氰菊酯的敏感性。
权利要求
1.蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。
2.如权利要求1所说的应用，其特征在于，所说的菊酯类杀虫剂是溴氰菊酯。
全文摘要
本发明涉及蛋白酶体抑制剂MG132的一种新功能，具体是蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。本发明提供了蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途，为研制新型高效的有机杀虫剂，提供了新途径。
文档编号A01P7/04GK102017965SQ20101054875
公开日2011年4月20日 申请日期2010年11月18日 优先权日2010年11月18日
发明者于婧, 孙林春, 孙海波, 孙艳, 朱昌亮, 沈波, 焦健华, 贺骥, 马磊 申请人:南京医科大学