专利名称：新除草剂抗性基因的制作方法
新除草剂抗性基因本申请是发明人于2005年5月2日提交的题为“新除草剂抗性基因”的中国专利 申请200580022066. X的分案申请。相关申请的交叉参考本申请要求2004年4月30日提交的U. S.临时申请序列No. 60/567, 052的优先权。
背景技术：
杂草可以迅速耗尽土壤中作物和其他目的植物所需的有价值的养分。目前有多种 类型的除草剂用于控制杂草。一种特别流行的除草剂是草甘膦。已经开发了对草甘膦具有抗性的作物，如玉米、大豆、芸苔、棉花、甜菜、小麦、草坪 和稻。因此可以例如对积极种植草甘膦抗性作物的田地喷洒草甘膦以控制杂草而不显著损 害作物植物。随着二十世纪九十年代中期遗传改造的草甘膦耐性作物(GTC)的引入，在农业中 前所未有地使种植者能够以简单、便利、灵活并廉价的工具控制广谱阔叶和禾本科杂草。因 此，生产者们迅速采用了 GTC，并在很多情况下放弃了公认最佳的农业实践，如作物轮作、除 草剂作用方式轮作、罐混、在化学和栽培杂草控制中掺入机械控制。目前在美国和西半球 其他地方可以购买到草甘膦耐性大豆、棉花、玉米和芸苔。取决于全球市场的接受度，更多 的GTC(如小麦、稻、甜菜、草坪等等)正准备引入。许多其他草甘膦抗性物种正在实验至开 发阶段(如苜蓿、甘蔗、向日葵、甜菜、豌豆、胡萝卜、黄瓜、莴苣、洋葱、草莓、西红柿和烟草、 林业物种如白杨、香枫和园艺物种如金盏花、牵牛花和秋海棠，参阅“isb. vt. edu/cfdocs/ fieldtestsl. cfm，2005”站点)。此外，近年来草甘膦的费用已经大幅降低至几乎没有常规 杂草控制程序能在价格和性能上与草甘膦GTC系统有效竞争。草甘膦已经在灭生(burndown)和其他非作物地区成功用于完全植被控制超过15 年。在许多情况下(如对于GTC)，可以在连续的3、5、10直至15年中每年使用草甘膦1-3 次。这些情况已经导致对草甘膦和GTC技术的过度依赖，并在天然杂草物种中对草甘膦天 然更具耐性或已经发展出对抗草甘膦除草剂活性的机制的植物施加了高选择压。仅用草甘膦的杂草控制程序的广泛使用正导致对草甘膦抗性植物的选择，并且 正在选择固有地比多数靶物种更能耐受草甘膦的杂草物种后代(即杂草演替)。(Ng等， 2003 ；Simarmata 等，2003 ；Lorraine-Colwi11 等，2003 ；Sfiligoj,2004 ；MiIlar 等，2003 ； Heap, 2005 ；Murphy等，2002 ；Martin等，2002)。尽管草甘膦已经在全球广泛使用超过 15年，但仅有少数杂草被报道已发展出对草甘膦的抗性(Heap，2005)，然而它们中的大 多数都鉴定于过去的3-5年。抗性杂草包括阔叶和禾本科杂草——瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、多花黑麦草(Lolium multiflorum)、牛筋草(Eleusineindica)、豚草(Ambrosia artemisiifolia)、/]、飞)$ (Conyza canadensis) >Sfijf^ (Conyza bonariensis)禾口i卩十$ 前(Plantago lanceolata)。此外，在广泛使用GTC之前并不是农业问题的杂草现在开始盛 行，并且难于用GTC(包括> 80%的美国棉花和大豆地区和> 20%的美国玉米地区)控制(Gianessi,200 。这些杂草演替主要与(但不仅与)难于控制的阔叶杂草一起出现。一些 实例包括药薯(ipomea)、苋属(Amaranthus)、藜属(Chenopodium)、蒲公英属(Taraxacum) 和鸭跖草科(Commelina)物种。在种植者要面对草甘膦抗性杂草或演替到更难于控制的杂草物种的地区，种植者 可以通过罐混或换用能控制遗漏杂草的其他除草剂来弥补草甘膦的弱点。在许多情况下控 制阔叶逃逸的一种流行且有效的罐混伴侣为2，4_ 二氯苯氧乙酸(2，4_滴)。2，4_滴已经 在农业和非作物条件下用于广谱阔叶杂草控制超过60年。已有关于更具耐性物种的个案 报道，但2，4_滴仍是全球最广泛使用的除草剂之一。对进一步使用2，4-滴的限制在于它 在双子叶植物(如大豆或棉花)中的选择性非常低，因此2，4_滴一般不用于(且一般不靠 近)敏感性双子叶作物。此外，2，4_滴在禾本科作物中的用途在某种程度上受限于可能出 现的作物损伤的性质。2，4_滴和草甘膦的组合已经用于在种植免耕大豆和棉花之前提供更 强的灭生处理，然而，由于这些双子叶物种对2，4_滴的敏感性，这些灭生处理必须在种植 前 14-30 天以前进行(Agriliance，2003)。和MCPA、2-甲-4-氯丙酸和2，4-滴丙酸一样，2，4-滴是苯氧酸类除草剂。2，4_滴 用于在许多单子叶作物(如玉米、小麦和稻)中选择性控制阔叶杂草而不严重损伤目的作 物植物。2，4_滴是合成的植物生长素衍生物，其作用为使正常的细胞激素内稳态失调，并阻 碍平衡的受控生长，然而，其确切的作用模式仍不了解。2,4-滴对某些植物具有不同水平的选择性(如双子叶植物比禾本科植物更敏 感)。不同植物对2，4_滴的不同代谢是不同水平选择性的一种解释。通常植物缓慢代谢2， 4-滴，因此靶位点的不同活性更可能解释植物对2，4_滴不同的应答(WSSA，20(^)。2，4_滴 的植物代谢一般通过两步代谢实现，一般是羟基化后接着与氨基酸或葡萄糖缀合(WSSA， 2002)。随着时间的发展，微生物种群已经发展出降解此特定外来物的有效的替代途径， 所述途径引起2，4_滴的完全矿化。对微生物连续应用除草剂选择了能利用除草剂作为碳 源用于生长(从而使其在土壤中具有竞争优势)的微生物。因为这个原因，目前将2，4_滴 配制为具有相对短的土壤半衰期，并且对其后的作物没有遇到明显的遗留效应(carryover effect) 0这促进了 2，4-滴的除草剂应用。已经广泛研究了其降解2，4_滴能力的一种生物是真养雷氏菌(Ralstonia eutropha) (Mreber等，1987)。编码矿化途径中第一个酶促步骤的基因为tfdA。参阅 U. S.专利No. 6，153，401和GENBANK登录号M16730。TfdA通过α酮戊二酸依赖性双加氧酶 反应催化2，4-滴酸转化成二氯苯酚(DCP) (Smejkal等，2001)。DCP与2，4-滴相比几乎不 具有除草剂活性。TfdA在转基因植物中用于向通常对2，4_滴敏感的双子叶植物(如棉花 和烟草)中输入 2,4-滴抗性(Streber 等(1989)，Lyon 等(1989)，Lyon (1993)和 U. S.专 利 No. 5，608，147)。已在环境中鉴定了大量编码能降解2，4_滴的蛋白质的tfdA型基因并已保存于 Genebank数据库。许多同系物与tfdA类似(氨基酸同一性> 85% )并具有与tfdA相似 的酶活性。然而，有大量同系物与tfdA具有显著更低的同一性05-50% )，但却具有与α 酮戊二酸依赖性双加氧酶F,双加氧酶相关的特征残基。因此这些不同的双加氧酶的底物 特异性是什么并不明确。
与tfdA具有低同源性(氨基酸同一性观％ )的独特实例是来自Sphingobium herbicidovorans 的 rdpA (Kohler 等，1999，Westendorf 等，2002)。已经显示此酶催 化(R)_2，4-滴丙酸(和其他(R)-苯氧丙酸)以及2，4_滴(苯氧乙酸)矿化的第一步 (Westendorf等，200 。尽管以前已经描述了降解苯氧丙酸的生物，但直至最近对此途径的 表征才取得进展(Horvath等，1990)。使2，4-滴丙酸降解复杂化的另一因素是与2，4-滴 丙酸摄取(Kohler, 1999)和初期氧化(Westendorf等，2003)相关的立体特异性(R与S)。 迄今仍没有在其他微生物中异源表达rdpA或将此基因转化进植物的报道。文献主要着眼 于主要降解非手性苯氧乙酸(如2，4-滴)的tfdA近亲同系物。新除草剂耐受作物(HTC)技术的开发很大程度上受到GTC的效力、低费用和便利 性的限制。因此，GTC在生产者中的采用率非常高。这很难刺激开发新的HTC技术。芳氧基链烷酸酯化学亚结构是许多商品除草剂(包括苯氧基生长素(如2，4_滴 和2，4_滴丙酸)、吡啶氧基生长素(如氟草烟和绿草定)、芳氧基苯氧丙酸酯(AOPP)乙酰 辅酶A羧化酶(ACC酶)抑制剂(如吡氟氯禾灵(haloxyfop)、喹禾灵(quizalofop)和禾草 灵(f lumiclorac))和5取代苯氧乙酸初卟啉原氧化酶IX抑制剂(如霸草灵和氟胺草酯)) 的通用实体。然而，这些除草剂类别的差别都很大，目前的文献中没有这些化学品类别中共 有的降解途径的证据。发现涵盖除草剂降解多种模式的多功能酶将是独一无二的，并且具 有作为HTC性状的价值。发明概述本发明提供不仅对2，4_滴具有抗性，而且还对AOPP除草剂具有抗性的新植物。迄 今还没有预期或提出可通过引入单个基因产生具有这两种有利特性的植物。本发明还包括 这样的植物其产生与一种或多种其他除草剂抗性基因(包括但不仅限于草甘膦、咪唑啉 酮和草铵膦抗性基因)“叠加”的一种或多种本发明的酶，以提供与更广更多的强杂草控制 和除草剂抗性管理选择相容的除草剂耐性植物。本发明还包括利用本文示例的基因和蛋白 质的同系物的方法和组合物。在一些实施方案中，本发明提供对2，4_滴、AOPP和一种或多种市售除草剂(如草 甘膦、咪唑啉酮、草铵膦、磺脲类、二氯甲氧苯酸、溴草腈等等)具有耐性的单子叶和双子叶 植物。还公开了含有负责这些除草剂耐性的核酸序列的载体以及将这些耐性植物和除草剂 组合用于杂草控制和防止杂草种群演替的方法。本发明提供以新的方法使用除草剂的新组 合。此外，本发明提供预防产生并控制对一种或多种除草剂(如草甘膦)具有抗性的杂草 株系的新方法。本发明赋予除草剂和作物的新组合的新用途，包括在种植对该除草剂(如 2,4-滴)敏感的植物的种子之前对将种植的地区进行的种植前应用。本发明部分涉及酶的鉴定，所述酶不仅能降解2，4_滴，而且还令人吃惊地具有例 如使本发明的酶区别于先前已知的tfdA蛋白的新特性。更具体的，本发明涉及能以对映体 特异性方式降解2，4-滴和AOPP除草剂的酶的用途。先前已报道的α酮戊二酸依赖性双 加氧酶均不具有降解不同化学类别或作用模式的除草剂的能力。本发明使用的优选酶和基 因在本文中称为AAD-I (芳氧基链烷酸酯双加氧酶)。这一高度新颖的发现是重要的HTC性 状和选择标记可能性的基础。之前没有动机产生含有AAD-I基因(优选如本文所示例的具有为了在一种或多种 植物中表达而优化的序列的AAD-I多核苷酸)的植物，也没有期望这些植物能有效的产生AAD-I酶以使植物不仅对苯氧酸除草剂(如2，4-滴)具有抗性，而且还对AOPP除草剂 (如喹禾灵、吡氟氯禾灵等)具有抗性。因此，本发明提供了许多本领域迄今未曾设想过的 优点。本发明还部分涉及编码能降解苯氧基植物生长素和芳氧基苯氧丙酸酯除草剂的 芳氧基链烷酸酯双加氧酶的基因的鉴定和用途。筛选蛋白质的这些活性的方法也在本发明 的范围内。因此，本发明包括通过重组表达的AAD-I酶降解2，4-二氯苯氧乙酸、其他苯氧 基链烷酸酯生长素除草剂和芳氧基苯氧丙酸酯除草剂。本发明还包括控制杂草的方法，其 中所述方法包括对含有AAD-I基因的植物应用一种或多种Α0ΡΡ、苯氧基生长素或其他芳氧 基链烷酸酯除草剂。本发明还提供使用AAD-I基因作为鉴定转化了 AAD-I的植物细胞和完 整植物的选择标记物的方法，所述植物细胞或完整植物任选地包含同时插入靶植物细胞的 一个、两个或更多外源基因。本发明的方法包括选择对适当水平的除草剂具有抗性的转化 细胞。本发明还包括通过培养本发明的植物和/或细胞制备具有芳氧基链烷酸酯双加氧酶 生物活性的多肽的方法。附图简述
图1显示苯氧基生长素或AOPP除草剂的双加氧酶裂解的一般方案。图2显示用AAD-I处理的2，4_滴溶液的除草剂活性的丧失。图3显示用AAD-I处理的吡氟氯禾灵溶液的除草剂活性的丧失。图4显示用AAD-I催化代表性的除草剂预计产生的酚。图5显示重组AAD-I产生的2，4_ 二氯苯酚。图6A和6B显示由重组AAD-I从多种除草剂底物产生的酚。图7显示对四种除草剂底物的底物浓度的AAD-I反应速率。图8A和8B显示AAD-I (v3)在不同时期的拟南芥叶中等量表达，但在25天的实 验中持续积累。未喷洒除草剂2，4_滴(图A)的植物比经喷洒(图B)的植物表达稍多的 AAD-I (v3)。条柱代表来自5株不同植物的5片叶的平均值士SEM和用可溶性蛋白总量标 准化的AAD-I (v3)表达百分数。浅色条代表采自顶端的第三幼的叶(N-3)，深色条代表采 自底部的第五老的叶。图9々、98和9(显示2，4-滴处理后拟南芥植物的损伤。用四种不同剂量的2，4_滴 处理四个不同株系，在处理后4天(图A)和14天(图B)对其损伤分级。还使用ELISA测 定其叶中AAD-I (v3)的表达(图C)。结果为来自接受同一处理的5株不同植物的5片叶的 平均值士 SEM。
图10展示在第7天，与野生型和经转化的对照拟南芥株系相比，转化了 PDAB3230 的拟南芥(AAD-1+EPSPS)显示出> 14倍水平的草甘膦耐性。
图11显示愈伤组织玉米悬液对R-吡氟氯禾灵的剂量应答。
图12显示在1 μ M cyhalofop phenol下，生长仍然高达无cyhalofopphenol的对 照的76%。
图13展示一个转基因事件3404-006对吡氟氯禾灵的剂量应答数据。
图14显示若干转化AAD-I (v3)和非转化事件克隆对一周前以出苗后喷洒应用的 两种致死剂量的AOPP除草剂(吡氟氯禾灵和喹禾灵)的应答。
图15显示用Liberty 除 去无效从3404个转化中预筛选的三个不同T2谱系，选择它们用来相对于其AAD-I的表达
6而比较其对喹禾灵的耐性。在第14天(数据未显示)和第30天测量表达。
图16显示在大田条件下，转化了 AAD-I (v3)的玉米对《(大田用量的喹禾灵 (Assure II)具有耐性。
图17展示在含有cyhalofop的培养基上培养的未成熟玉米胚。
图18显示转化了 AAD-I (V3)基因的大豆愈伤组织的Western印迹分析表明愈伤 组织细胞表达AAD-I (V3)蛋白。
图19显示AAD_2(vl)与AAD-1 (vl)的2，4_滴降解率拟合曲线。图20显示转化了 AAD_lv3 (植物优化)或AAD_1 (v2)(天然)、AAD_2 (vl)(天然) 或AAD-2(v2)(植物优化)的T1拟南芥对一系列出苗后应用的2，4_滴用量的反应。每盆 代表T1家族每个基因内的单个转化事件。图21显示转化了天然AAD-2 (v2)的单个T1拟南芥植物的western印迹分析。其 显示200g ae(酸当量)/ha 2，4-滴处理对表达AAD-2 (vl)的植物造成严重的损伤，而一般 对转化天然AAD-I (W)或植物优化的AAD-I (U)的拟南芥很少造成损伤。在凝胶上鉴定 AAD-2蛋白。在转化AAD-2和转化I^t/CrylF的样品中检测到了若干背景条带。图22显示AAD-2 (vl)对底物的相对活性为2，4_滴=2，4_滴丙酸> (R，S)-吡氟 氯禾灵>> (R)-吡氟氯禾灵。序列简述SEQ ID NO 1为用于扩增rdpA/AAD-1 (vl)基因的正向引物。SEQ ID NO 2为用于扩增rdpA/AAD_l (vl)基因的反向引物。SEQ ID NO :3 为来自 Sphingobium herbicidovorans 的 AAD-1 (vl)的核苷酸序 列。SEQ ID NO 4为去除了内部Not I限制性位点的天然AAD-1基因的核酸序列。此 基因命名为AAD-I (v2)。DNA测序证实产生了正确的PCR产物，但是在氨基酸#212处无意 地造成了由精氨酸到半胱氨酸的改变。SEQ ID NO 5 为“植物优化”的 DNA 序列 AAD-I (v3)。此“基因”编码 SEQ ID NO 11，它除了在第二个位置加入了丙氨酸残基以外均与SEQ ID N0:9相同。包含额外的丙氨 酸密码子(GCT)以编码跨越ATG起始密码子的Nco I位点(CCATGG)以便进行其后的克隆操作。SEQ ID NO :6 ("rdpA(ncol) ”)和 SEQ ID NO 7("3' sacI")用于使用 Fail Safe PCR System(Epicenter)扩增 DNA 片段。SEQ ID NO :8为与“3' SacI，，引物一起使用的另一PCR引物(“BstEII/DelNotI，，)。SEQ ID NO 9 为来自 Sphingobium herbicidovorans 的 AAD-1 (vl)基因所编码的
天然氨基酸序列。SEQ ID NO 10为SEQ ID NO 4的AAD-1 (v2)DNA序列所编码的氨基酸序列。SEQ ID NO 11为SEQ ID NO 5的AAD-1 (v!3)植物优化DNA序列所编码的氨基酸序列。SEQ ID NO 12 为天然 AAD-2 (vl)基因的 DNA 序列。SEQ ID NO 13为AAD-2 (vl)蛋白的氨基酸序列。SEQ ID NO :14为扩增用于克隆的AAD-2 (vl)DNA所使用的正向引物。
SEQIDNO:15为扩增用于克隆的AAD-2 (Vl)DNA所使用的反向引物。
SEQIDNO:16为M13正向引物。
SEQIDNO:17为M13反向引物。
SEQIDNO18为扩增用于克隆的AAD-2 (Vl)DNA所使用的正向引物。
SEQIDNO19为扩增用于克隆的AAD-2 (Vl)DNA所使用的反向引物。
SEQIDNO20为天然大豆EPSPS蛋白。
SEQIDNO21为含有残基183 (用异亮氨酸替换天然蛋白质的苏氨酸)187(用丝氨画I替换天然蛋白质的脯氨酸)处突变的双突变大豆EPSPS蛋白序列。
SEQIDNO22为编码SEQ ID NO 21的EPSPS蛋白的大豆偏好DNA序列。
SEQIDNO23 为引物 I^at 5-3。
SEQIDNOJ4 为引物 I^at 3-3。
SEQIDNO25为正向引物AAD-1PTU。
SEQIDNO26为反向引物AAD-1PTU。
SEQIDNO27为用于AAD-I编码区PCR的正向引物。
SEQIDNO28为用于AAD-I编码区PCR的反向引物。
SEQIDNO29为AAD-2 (v2)核苷酸(植物优化)。
SEQIDNO30为翻译的AAD-2 (v2)蛋白序列。
SEQIDNO31为AAD-ISouthern片段PCR的正向引物。
SEQIDNO:32为AAD-ISouthern片段PCR的反向引物。发明详述本发明开发的2，4_滴抗性基因及其后的抗性作物提供用于在作物中控制草甘膦 抗性(或高耐性和演替的)阔叶杂草物种的优良选择。2，4-滴是广谱、相对便宜且强力的 阔叶除草剂，如果在双子叶和单子叶中同样能提供更强的作物耐性，则可为种植者提供优 良的效用。2，4_滴耐性转基因双子叶植物还可在应用时间和用量上具有更高的灵活性。2， 4-滴除草剂耐性性状的另一用途是它可用于预防2，4_滴漂移、挥发、转化(inversion)(或 其他远距离的移动现象)、误用、破坏等等对正常敏感性作物的损害。AAD-I基因的另一益 处是，与目前已表征的所有tfdA同系物不同，AAD-I除了能降解非手性苯氧基生长素(如 2,4-滴、MCPA和2-甲-4-氯丙酸)以外，还能降解手性苯氧基生长素(如2，4-滴丙酸和 2-甲-4-氯丙酸)的R-对映体(除草剂活性异构体)。见表1。已经广泛使用不同苯氧基 生长素组合的多种混合来处理不同地区特定的杂草谱和环境条件。在植物中使用AAD-I可 以提供对更广谱的苯氧基生长素除草剂的防护，从而提高灵活性和可控制的杂草谱，提供 对全范围市售苯氧基生长素的漂移或其他远距离苯氧基除草剂损伤的防护。表1.市售的苯氧基生长素。对于苯氧基生长素除草剂通常制成活性酸，但也有一 些商品化配制为多种相应酯制剂之一，由于一般的植物酯酶在植物中将这些酯转换成活性 酸，因此这些也同样认为是在植物中AAD-I酶的底物。类似的还可以是相应酸的相应有机 或无机盐。当表示手性丙酸、丙酸盐或丙酸酯除草剂时，即使不同的CAS号可能对应于光学 纯的化合物，在命名这些除草剂时仍认为外消旋(R，S)或光学纯化的(！？或幻对映体是同 一除草剂。可能的用量范围可以是作物或非作物用途中单独处理或与其他除草剂组合。
权利要求
1.控制地区中至少一种杂草的方法，其中所述地区中包含至少一种来自转基因植物细 胞的植物，其中所述方法包括对所述地区应用第一种除草剂，其选自苯氧基生长素除草剂 和芳氧基苯氧丙酸酯除草剂，所述转基因植物细胞含有编码AAD-I蛋白的多核苷酸，所述 AAD-I蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO :9，或通过一个或几个氨基酸的取代、添加或缺失而 衍生自SEQ ID NO :9，且具有芳氧基链烷酸酯双加氧酶活性的氨基酸序列。
2.权利要求1的方法，其中所述方法包括将所述第一种除草剂应用于所述植物。
3.权利要求1的方法，其中所述第一种除草剂是包含以下化学式的苯氧基生长素除草 剂及其盐οIpY0W^OHcr人^-CI。
4.转基因植物细胞，其含有编码AAD-I蛋白的多核苷酸，所述AAD-I蛋白的氨基酸序列 为SEQ ID NO :9，或通过一个或几个氨基酸的取代、添加或缺失而衍生自SEQ ID N0:9，且具 有芳氧基链烷酸酯双加氧酶活性的氨基酸序列，其中所述细胞进一步包含一个或多个其他 除草剂抗性基因。
5.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含一个或多个其他除草剂抗性基因。
6.权利要求4的植物细胞，其中所述植物细胞包含草甘膦抗性性状。
7.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含草甘膦抗性性状，且所述方法包括对 所述地区应用2，4-D和草甘膦。
8.权利要求4的细胞，其中所述除草剂抗性基因给予对草甘膦和草铵膦的抗性。
9.权利要求1的方法，其中所述方法包括对所述植物应用2，4-D、草甘膦和草铵膦。
10.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含二氯甲氧苯酸抗性基因。
11.权利要求4的植物细胞，其中所述植物细胞包含二氯甲氧苯酸抗性基因。
12.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含是乙酰乳酸合酶抑制剂的除草剂抗 性基因。
13.权利要求4的植物细胞，其中所述植物细胞包含是乙酰乳酸合酶抑制剂的除草剂 抗性基因。
14.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含草铵膦抗性基因。
15.权利要求4的植物细胞，其中所述植物细胞包含草铵膦抗性基因。
16.权利要求1的方法，其中所述植物进一步包含磺脲类除草剂抗性基因。
17.权利要求4的植物细胞，其中所述植物细胞包含磺脲类除草剂抗性基因。
18.权利要求1的方法，其中所述植物是玉米植物。
19.权利要求4的细胞，其中所述植物是玉米植物。
20.权利要求1的方法，其中所述除草剂种植前、种植时、出苗前或出苗后应用于所述 植物。
全文摘要
本发明提供不仅对2，4-滴和其他苯氧基生长素除草剂具有抗性，而且还对芳氧基苯氧丙酸酯除草剂具有抗性的新植物。本发明还包括这样的植物其产生单独或与其他除草剂抗性基因(优选草甘膦抗性基因)“叠加”的一种或多种本发明的酶，以提供更广更强的杂草控制、提高的处理灵活性和改进的除草剂抗性管理选择。更具体的，本发明用途中优选的酶和基因在本文中称为AAD(芳氧基链烷酸酯双加氧酶)基因和蛋白。本发明还包括控制杂草的相关方法。本发明使得可以以新的方式使用除草剂的新组合。此外，本发明提供预防形成对一种或多种除草剂(如草甘膦)具有抗性(或天然更具耐性)的杂草或控制这些杂草的方法。
文档编号A01H5/00GK102094032SQ20101055205
公开日2011年6月15日 申请日期2005年5月2日 优先权日2004年4月30日
发明者D·J·默洛, J·M·里拉, N·霍普金斯, T·R·莱特 申请人:美国陶氏益农公司