专利名称：一种快速繁殖紫龙角的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种快速繁殖紫龙角的培养基，属植物細胞与组织培养生物技术领域。
背景技术：
紫龙角是萝蘑科水牛掌属中的ー种多年生草本肉质植物，既有观赏价值，也是珍贵的药用植物。特別是紫龙角肉厚、产量高、留类成分丰富，具有极大的商业开发价值。国内外对萝蘑科植物的研究主要集中在其化学成分、药理、临床等方面。基于细胞的全能性，任何植物的离体細胞在人工培养下同样具有它们“母体”植物合成药用成分的能力。因此，可通过改变和调节离体培养条件，将有效地提高其含量和质量，再利用物理和化学方法对培养物进行药用成分提取，生产各类药物或药物前体。但是紫龙角常规繁殖效率低，组织培养还未曾有过研究报道。那么采用細胞工程手段，在适当的生长条件下使細胞、 组织生长并不断増殖，达到人工优良育种和大量制备各次生代谢产物的目的。例如，可通过植物器官(根尖、茎尖、叶质基、花药等)的离体培养，再生成新植株(试管苗)。这种方法能快速、大量繁殖ー些有价值的苗木、花卉、药材和濒危的植物。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供ー种快速繁殖紫龙角的培养基，将组织培养过程分为四步，每ー步对应配有相应的培养基；具有准确定量、エ艺简单、成本低、扩繁快、生产效率高的特点。本发明是通过如下技术方案来实现上述目的的。本发明所提供的ー种快速繁殖紫龙角的培养基包括四个部分(1)诱导愈伤组织培养基；(2)直接诱导丛生芽培养基；(3)复壮増殖不定芽培养基；(4)生根培养基； 所述的诱导愈伤组织培养基，其組成为以“麦基一号”培养基为基本营养，每IL“麦基一号”培养基中加入水解酪蛋白(CH)300mg；6-苄基嘌呤(6-BA) 1. 0—1. 8mg ；2，4-ニ氯苯氧乙酸(2,4-D)0. 5—2. Omg ；所述的直接诱导丛生芽培养基，其組成为以“H”培养基为基本营养，每IL “H”培养基中加入苯基噻ニ唑基脲(TDZ) 4mg ；α -萘乙酸(NAA) 0. 4mg ；所述的复壮增殖不定芽培养基，其組成为以“改良H”培养基为基本营养，每IL“改
3良H”培养基中加入苯基噻ニ唑基脲(TDZ) 4mg ；α -萘乙酸(NAA) 0. 4mg ；所述的生根培养基，其組成为以“1/2MS”培养基为基本营养，每IL “1/2MS”培养基中加入α -萘乙酸(NAA) 2—5mg ；将上述培养基的PH值调整为6—6. 2。本发明与现有的技术相比具有如下有益效果1、可对紫龙角进行快速繁殖及育种。2、可建立完整的再生体系，实现エ厂化生产。3、可为新留类药物的开发与生产提供离体培养技术，提高工艺效率。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进ー步说明。利用本发明快速繁殖培养紫龙角的过程为1、培养基的配制分別将四种培养基按比例进行配制，将配制好的培养基加热溶解后调整其PH值为6-6. 2，装入洗净的圆柱瓶中，封ロ后高压灭菌15分钟左右，待用。2、外植体的处置选择生长健壮，以带有紫褐色斑纹和不带紫褐色斑纹的植株，分別取带腋芽茎块、 不带腋芽茎块、刺突共6种外植体，在饱和洗衣粉溶液中摇动5-10分钟转入清水漂洗后进入接种室。先用75 %酒精灭菌5秒，立即用0. 1 % HgCl2灭菌8分钟，无菌水冲洗5次，浙干后备用。3、诱导愈伤组织培养将不带腋芽的外植体切成0. 5cm厚的茎块接种在诱导愈伤组织培养基上，每瓶2 块。培养条件为先暗室培养6天之后再转入光下培养；温度25士2°C，光周期14h，光强为 2000Lx，光质为日光灯。培养6天后出愈。30天后统计诱导率高达90%以上。4、直接诱导丛生芽培养将带腋芽的茎块、刺突茎块接种在直接诱导丛生芽培养基上，每瓶2块。培养条件为25士2°C，光周期12h，光强2000Lx，30天左右即长许多丛生小芽(平均每个外植体四周着生15个左右)。5、复壮増殖不定芽培养将丛生芽分切开转入复壮増殖不定芽培养基中，每瓶接种8-12个。培养条件为 25士2°C，光周期12h，光强2000Lx。培养30天后再切割分离，转接。6、生根培养将复壮増殖培养的苗转入生根培养基中。培养条件为光周期12h，光强2000LX。 20天左右后，长出6—8个根，转入炼苗。7、试管苗的移植移植前先将培养瓶在通风的房间内敞ロ 3—5天，再洗去根部培养基，稍晾干后移植到大棚的苗床中，稍作遮盖，一周后去除遮盖，进行正常管理。
权利要求
1.ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于培养基包括四个部分(1)诱导愈伤组织培养基；(2)直接诱导丛生芽培养基；(3)复壮増殖不定芽培养基；(4)生根培养基。
2.根据权利要求1所述的ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于所述的诱导愈伤组织培养基，其組成为以“麦基一号”培养基为基本营养，每IL “麦基一号”培养基中加入水解酪蛋白(CH)300mg;6-苄基嘌呤(6-BA) 1. 0—1. 8mg ；2，4-ニ氯苯氧乙酸(2，4-D)0. 5—2. Omgo
3.根据权利要求1所述的ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于所述的直接诱导丛生芽培养基，其組成为以“H”培养基为基本营养，每IL “H”培养基中加入苯基噻ニ唑基脲(TDZ) ^ig; α-萘乙酸(NAA)O. 4mgo
4.根据权利要求1所述的ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于所述的复壮増殖不定芽培养基，其組成为以“改良H”培养基为基本营养，每IL “改良H”培养基中加入苯基噻ニ唑基脲(TDZ) ^ig; α-萘乙酸(NAA)O. 4mgo
5.根据权利要求1所述的ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于所述的生根培养基，其組成为以“1/2MS”培养基为基本营养，每IL “1/2MS”培养基中加入α-萘乙酸(NAA) 2—5mg。
6.根据权利要求2、3、4、5所述的ー种快速繁殖紫龙角的培养基，其特征在于将所述培养基的PH值调整为6—6. 2。
全文摘要
本发明涉及一种快速繁殖紫龙角的培养基，属植物细胞与组织培养生物技术领域，其特征在于培养基包括四个部分诱导愈伤组织培养基、直接诱导丛生芽培养基、复壮增殖不定芽培养基、生根培养基；将所述培养基的pH值调整为6--6.2；将组织培养过程分为四步，每一步对应配有相应的培养基；具有准确定量、工艺简单、成本低、扩繁快、生产效率高的特点；应用本发明可建立完整的再生体系，实现工厂化生产，对紫龙角进行快速繁殖及育种，为新甾类药物的开发与生产提供离体培养技术。
文档编号A01H4/00GK102577943SQ20111002063
公开日2012年7月18日 申请日期2011年1月7日 优先权日2011年1月7日
发明者杨德良, 董社琴 申请人:长江大学