专利名称：蛹虫草的生产与深加工新技术的制作方法
技术领域：
本发明属于生物化工等新技术领域，尤其是一种蛹虫草的生产与深加工新技术。
背景技术：
百年来，中国中医药界一直流传着“中药三大宝，人参、鹿茸、冬虫草”。冬虫夏草是一种平补阴阻，具有很高养生、保健和药用价值的名贵中药材，它含有许多种人体需要的、其他任何动植物都无法替代的营养成分，药性温和，一年四季均可食用，老、少、病、弱、 虚者皆宜。近代医学研究发现虫草富含虫草酸、虫草素、氨基酸、留醇、甘露醇、生物碱、维生素Bi、B2、多糖及矿物质等，能提高机体免疫功能，不但对人体各种脏器的功能具有调节作用，还存在某些直接抗病功能。冬虫夏草也叫蛹虫草，属子囊菌亚门、麦角菌科、虫草属，是一种珍贵的药用菌。是我国特有的一类珍贵药材，具有极高的医疗保健价值加经济价值，在国内外享有盛誉，素有 “东方传奇式珍宝”之美称，是我国传统的出口创汇商品，所以，冬虫夏草是我国传统医药宝库中的一朵奇葩。冬虫夏草生长在我国西部与西南部的高寒地区，生长环境特殊，资源有限，随着多年来国内外的深入研究，进一步认识到冬虫夏草对人体的医疗和滋补研究，进一步认识到冬虫夏草对人体的医疗和滋补所具有的重要价值，需求不断增加，由于天然冬虫夏草资源本就不多，加上虫草资源数量锐减，产量不断下降，供求矛盾日益加剧，造成市场供求脱节， 价格昂贵，于是人们开始培育生产周期短，与天然冬虫夏草有相似医疗保健功效的蛹虫草满足消费需求，替代天然冬虫夏草的不足，为人工规模化培育的蛹虫草的发展提供了广阔的市场和良好的发展机遇。对冬虫夏草的人工引种驯化，栽培遗传及应用等方面的研究工作之中，作为一种有发展潜力的新技术新工艺，开辟药源生物发酵技术确实具有重大价值和发展前途。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以代替冬虫夏草入药、能代替天然冬虫夏草药源的蛹虫草的生产与深加工新技术。本发明的技术方案是蛹虫草的生产与深加工新技术，包括下列步骤(一)母种制备；(二)母种转原种和栽培种(三)悬浮液菌种的制备，(四)液体菌种的制备；(五) 蛹虫草菌种的人工栽培。详细步骤如下一、母种制备母种制备采用孢子分离法，属于有性繁殖法。它是在无菌条件下利用菌类子实体自行弹射孢子的原理，使孢子散落在人工培养基上，通过培养，得到原始菌系体，然后再移接入斜面试管进行培养。所述的母种制备包括(1)制作培养基( 试管母种制备(3)试管母种的扩大培养；出草试验；(5)组织分离制作母种。
二、母种转原种和栽培种原种和栽培种来源于母种的扩大，原种是天然虫草菌株，通过人工培训后，提出优质菌落转入固体培养基，经过各个阶段不同的温度、湿度、营养物得到一级母种。母种只能作菌种使用，不得直接栽培，所以必须作原种转管培养，一般原种也不易直接栽培，因为原种来源极少，代价高，需多次转管培养成栽培种。母种转原种和栽培种包括(1)培养基的配制、( 母种转管扩大。三、悬浮液菌种的制备悬浮液属液体菌种的范畴，但是悬浮在很大程度上只能是母种和原种的稀释，而液体菌种才是虫草的复壮繁殖，在相同的用量上悬浮液效果不如液体菌种，悬浮液菌种制作比较简单，投资较少，栽培经验不足者可以先用悬浮制作技术，只是栽培时菌种用量大些以提高感染成功率。所述的悬浮液菌种制备包括(1)培养基配制、⑵灭菌、⑶接种培养。四、液体菌种制作采用单级培养法又叫液体制种速成法，逐步实现多级培养方法，来实现高产稳产周期短，无感染的高效菌种。单级培养生产周期短，8-10天即可培养出第一批虫草液体菌种，生产量较大，根据需要1次可生产1000-2000毫升液体菌种，并可连续生产，栽培方便， 只要把液体菌种喷到培养基表面即可发菌快，是固体发菌时间一半，产量高，是固体菌产量的2倍，并从根本上解决了感染时间，成功率高，用特制的过滤器完全杜绝了杂菌，酵母菌的感染，成功率高达95%以上，用传统方法种植虫草需要6-8个月的时间，采用液体菌种， 只需50-60天，极大的缩短了虫草生产周期。所述的液体菌种制作包括(1)液体菌种培养基配方、(2)接种培养。五、蛹虫草人工栽培，所述的蛹虫草菌种人工栽培包括(1)按培养基配方制作培养基，(2)拌料装瓶；(3)灭菌；(4)接种；(5)培养室培养(6)后期管理；(7)采收。本发明的效果是通过本发明的蛹虫草的生产与深加工新技术，能够增加冬虫夏草的产量，从根本上降低冬虫夏草的价格，为广大患者减轻疾病的痛苦发挥作用，为我国传统医药宝库中又增加另一朵奇葩。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明做进一步的说明。蛹虫草的生产与深加工新技术，包括下列步骤一、母种制备，包括下列步骤(一)制作培养基培养基可以选择下列两种配方进行制作燕麦片加水，在沸腾水浴中加热1小时用两层纱布滤后加水补足到配制量，加琼脂深化后装入培养器灭菌即成。( 二)试管母种制备1、一直径25厘米左右的搪瓷盆，上衬4层纱布，在纱布上放一中号培养器(器内装有培养基)，并在器内放一不锈钢三角架，供插虫草子座用，在培养器上方加盖一个玻璃钟罩，连同瓷盘一起用纱布包好，在147千帕压力下灭菌1小时，冷却后备用。2、选取新鲜、优质、成熟、尚未散发孢子的正常虫草子座用清水冲洗干净、晾干。
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3、将上述灭过菌的整套装置去掉纱布，连同虫草子实体0. 升汞液(或75%酒精)无菌水等一起放入接种箱内严格消毒，消毒之后，在无菌条件下，用0.1%升汞液(或 75%酒精)对虫草子实体表面消毒，并用无菌水清洗表面残留药液，然后拆开钟罩，将虫草子实体插放于三角架上，再盖好钟罩。用纱布将钟罩底部周围塞好，并往纱布上倒0. 升汞水，最后将整套孢子采集装置从接种箱取出放入恒温箱中(25摄氏度左右)，使孢子下落，待培养基上有虫草菌落出现时，在无菌条件下挑取单个或多个菌落移接至试管斜面培养基上培养(15摄氏度一 20摄氏度恒温条件下避光培养)培养成功后。即可移接、扩制。(三)、试管母种的扩大培养经用分离方法制成试管母种后，还需进一步转管移植，扩大培养。母种种植扩繁除了能大大增加菌种数量外，还能有效避免菌种老化或生长不良，防止或消除杂菌感染。试管母种扩大培养基配方1、蛋白胨10克，葡萄糖10克，含脂蚕蛹10克、全脂奶粉10克磷酸二氢钾15克， 琼脂2克，水1000毫升。2、葡萄糖10克，蛋白胨10克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0. 5克，琼脂 20克，生长素5毫升，水1000毫升。3、去皮土豆200克(煮汁)，葡萄糖20克(或蔗糖40克)，磷酸二氢钾1. 5克，琼脂20克，维生素BlO克，增长灵0. 5克，水1000毫升。有性虫草菌丝生长较慢，在20摄氏度的恒温下，一般需要经3-4个月的培养才能长满斜面，当见到试管斜面培养基有卜2厘米大的菌落，菌凸起且表面曲折不平，颜色为桔黄色即说明试管用母已经培养完成。(四)、出草试验虫草有性分离的菌种必须在种植前做出草试验，虫草新分离的菌种不一定都能出草，因此必须经过严格的出草试验，菌丝的有性生殖性状稳定以后方可投入生产，对于出草试验中表现位出草较早、产量较高的菌种要及时进行扩繁和保藏。(五)、组织分离制作母种选用优良、纯净、健壮、适龄的天然虫草作无性菌组织分离，是实现高产、优质的关键。蛹虫草无性培育代数分为母种、原种和栽培种3级，母种是组织分离培育成的菌丝体， 原种和栽培种是在试管母种的基础上扩大培育而成菌种，母种通常不宜直接栽培，而主要用于转管扩大和制作原种，以及用作菌种保存，原种则可以用于栽培生产，也可以继续扩大繁殖成栽培种主要用于栽培生产。二、母种转原种和栽培种，包括下列步骤(一)、培养基的配制1、蔗糖10克，蛋白胨10克，琼脂15克，硫酸镁0。5克，维生素B5片1000毫升。2、葡萄糖20克，琼脂20克，土豆200克(煮汁)，维生素B. 3片，蛋白胨5克，磷酸二氢钾(试剂)0. 5克。配制方法现将各种营养料称取等量，合起调勻。再将1000毫升水加热使琼脂融化，然后将营养料倒入，煮沸时间为5-10分钟，尔后调节值为PH5-6，趁热分装试管，经过高压灭菌后摆成斜面备用。( 二)母种转管扩大接种箱及一切用具。事先要进行严格消毒，接种人员在接种前必须用肥皂或2%的来苏儿溶液洗手以防杂菌带入。转管操作，将母种试种口在酒精灯火焰上灼烧，同时拔出棉塞，然后将所有工具也在酒精灯灼烧，等冷却后进行母种切取转管，转管时工具勿碰到管壁，在火焰旁迅速转入试管中央，注意不要把培养基划破，也不能使菌种粘到试管壁上，抽出接种工具，将棉塞旋紧。一支母种试管一次可扩接25支一 35支试管，接种完毕将接好的试管贴上标签，注明菌名年月日，接种人，7-10支为一捆用牛皮纸扎紧试管上部，结束后放入培养箱中培养， 为了避免温度突变，影响菌丝生长发育，最好在恒温箱中培养，一般在20摄氏度 观摄氏度下，保温培养10天左右，即成二级母种(可以作培养栽培种，也可以直接种植)。用上法移接扩制的蛹虫草二级母种，也可以直接用来生产培种，还可以直接种植。 一般来说1支原菌种扩繁次数不宜太多，则易引起菌种退化。即可以作纯菌种保存，一般不得超过3次。三、悬浮液菌种的制备，包括下列步骤(一)、培养基配制1、磷酸二氢钾3克，食盐3克，维生素B5片，葡糖糖15克，硫酸镁0. 5克，味精0. 2 克，黄豆粉15克，水1000毫升。2、玉米粉12克，酵母粉3克，磷酸二氢钾1克，葡萄糖22克，黄豆粉10克，维生素 B，180-200毫，硫酸镁0. 5克，水1000毫升。3、葡糖糖35克，蛋白胨25克，磷酸二氢钾1克，食盐2. 5克，维生素B3片。配制方法按上述等量称取放入锅内煮沸10-15分钟，然后倒入量杯中沉淀15-20 分钟后，把上层液装入500毫升盐水瓶中，每瓶装量为200-250毫升。( 二 )灭菌用手提式高压灭菌锅，将悬浮液瓶装锅后拧紧螺旋，升温火力应该逐渐加大，气压达49千帕(0.5千克/厘米。)时打开排气阀排出冷气。待压力表回零时，再关上排气阀重新升温，当气温升到147 (1. 5千克/厘米。)时保持40 — 60分钟断火冷却待压力表回零时，打开排气阀，排出残留蒸汽掀开锅盖，取出灭菌液冷却后待用。(三)接种培养全过程都在无菌条件下进行，有关操作办法请参阅固体菌种，每只二级试管菌可接4-6瓶悬浮液。将接好的悬浮液放在黑暗处，在20- 下培养5天，见瓶内悬浮液表面有白色菌丝时摇晃瓶体，使瓶内菌丝与液体均勻，悬浮液大多都是在自然温度下，培养，不是在恒温箱种，大多数出现白色菌丝摇晃不开，这是正常现象，在摇晃时表面结块的虫草菌的分生孢子就像花粉一样肉眼看不到却已进入悬浮液，在此种现象出现后再经4-5天后即可栽培使用。四、液体菌种制作，包括下列步骤(一 )、液体菌种培养基配方1、蛋白胨12克、酵母粉25克、玉米粉10克、黄豆粉10克、磷酸二氢钾0. 5克、硫酸镁0.3克、味精0. 1克、葡萄糖20克、食盐0.3克、维生素B :100毫克、水1000毫升。2、葡萄糖10克、磷酸二氢钾0. 1克、硫酸镁1克、氯化钙1克、氨基酸复合粉5克、 去皮土豆250克(煮汁)、蝉蛹20克、水1000毫升。3、磷酸二氢钾0. 05克、维生素B，1150毫克、蛋白胨15克、葡萄糖25克、酵母粉10克、硫酸镁0. 05克、食盐8克、水1000毫升。装瓶灭菌。选用上述配方，按所需要量(此处以1000毫升培养料为例)称好各种原料，放入锅内，加水1 300毫升加热煮沸5-10分钟，冷却，沉淀1小时，取上层清夜装入广口瓶内，装量为瓶的7/10，加入3-6滴食用油为消泡剂，防止通气时培养液产生气泡沫，将瓶口用代替棉塞塞好，放在锅内，进行高压灭菌，高压1 47千帕下灭菌40-60分钟，灭菌结柬自然冷却到30°C以下，准备接种。(二)、接种培养按无捆操作要求，在接种箱内接入二级种和栽培种即可，具体操作要领与母种制作相同。接种后放在20°C — 25°C的条件下静止培养2天，观察液基表面无异色，清晰即可通气，先启动小通气量，吹氧3天，再启动大气量吹氧3-4天，这样通氧搅拌较好，培养过程中，每天至少检查一次，观察液基是否出现混浊，如出现混浊说明被感染，应废掉，如果液基内清晰有，菌丝片出现为正常，待菌丝片直径达0. 3-1毫米货菌丝球充满液基，说明液体菌种制作完成。五、蛹虫草人工栽培，包括下列步骤(一 )、按培养基配方制作培养基1、炒大米93%，葡萄糖2 %，蛋白胨2 %，柠檬酸0.3%，硫酸镁0.2%，蚕蛹粉 2.5%，另加维生素B，0.01%。2、高粱米85%，蚕蛹粉川^，蔗糖？^，蛋白胨？^，磷酸二氢钾化丨^，硫酸镁 0. 1%，酵母粉0.8%，另加维生素B，0.01%。3、小米95%，葡萄糖3.5%，酵母膏1.2%，磷酸二氢钾0. 1%，硫酸镁0. 2%，另加维生素B，0.01%。4、高粱米45%，玉米渣40%，小米10%，蔗糖2%，蛋白胨2%，酵母粉0.8%，磷酸二氢钾0. 1%，硫酸镁0. 1%。5、大米50%，麦麸25%，玉米粉10%，葡萄糖(或蔗糖)2%，木屑(阔叶树木为宜)10 %，蚕蛹粉(可用中药店僵蚕代替12 %，尿素0. 1 %，硫酸镁0. 9 %，另加维生素B， 0. 01%。(二)、拌料装瓶上述培养基任选一种，称取等量拌料均勻，含水量必须保持在60% — 65%，PH值 5-7、分别装入500毫升罐头瓶中，每瓶可装干料50克左右，营养料水分另计，尔后可用聚乙稀或聚丙稀薄膜封口。(三)、灭菌灭菌有两种方法一种是高压灭菌；一种是常压灭菌。这里只谈常压灭菌，常压灭菌有利于大行生产，容量大，灭菌时间必须保持在8-10小时即可，开始低温在50°C下进行 3-4小时(如升温快，温度过高会引起瓶子暴破)，尔后进行高温100°C大火烧至4-6小时， 灭菌完后进行出锅冷却，冷却后准备接种，接种温度不得超过20°C。(四)、接种在无菌的条件下进行操作，首先具备一个煤球火炉把火烧旺，用消过毒的注射器在火焰上方抽取液体菌种，以每瓶5-10毫升均勻地注射入灭过菌的培养瓶种，接种完毕， 将培养瓶转入培养室内培养。
(五)、培养室培养培养瓶进室前，必须先提前进行消毒，消毒之后，即可把接过种的瓶子放在床架上，每个瓶稍留一点空间，以利于通风散热，同时室内必须保持适宜温度，一般情况下15-25 天菌丝可以长满培养基，并形成子实体原基，45天一 60天即可成熟，虫草培养管理可分为两个阶段。1、温度北冬草菌丝在6°C — 30°C均可生长，6°C以下停止生长，30°C以上生长停滞，甚是死亡，适宜温度为5°C — 25°C，菌丝发育初期阶段，室温为15°C — 20°C，后期为23°C 一 25°C，超过25°C不易形成子座。2光线菌丝阶段，管线黑暗菌丝发育较快，但光强则不易生出子座，而且生长缓慢，过早进入生殖生长阶段，影响产量和质量，必须等菌丝长满瓶面扎到瓶底才能见光。3、湿度虫草在瓶内密封生长，空气湿度影响不大，但长时间干燥，也会使瓶内水分慢慢蒸发，影响后期菌丝生长和子实体形成，为此，要适当在室内地面喷水加湿，前期湿度保持在65%左右，过湿易生杂菌，不易形成子座。4、氧气北虫草菌丝阶段呼吸量较小，室内无需通风，无需特殊条件管理，在 15-25天菌丝即可长满培养基，北虫草的生长也即将由营养生长进入生殖生长阶段，此阶段放瓶的位置不能乱动，因为一动温度变化影响生长。5、长势菌丝长满瓶后，并出现鼓包突起，开始见光转色出草转色期，每天旱上 6-8点钟通风见光，待菌丝全部由白色转为黄色后，每天可以适当增加散射光，转色初期，温度以21°C左右为好，转色完成后，温度保持在23°C左右，湿度保持在85%以上，转色期每天光照不得少于10小时。见黄即止，光不能连续照，转色期需2-8天，转色后即开始在料面上形成小米状原基(即菌蕾)。(六)、后期管理1、当大部分料面形成原基时，温度可保持在2 3°C左右，湿度为85-90%，湿度太大易诱发培养基产生过多气生菌丝对子实体生长不利，湿度太小容易使培养基过早失去水份而影响产量，为保持适宜湿度，可喷雾水于地面，每天3-4天。2、子实体生长阶段管理(1)温度形成虫草子实体的最佳温度为20°C — 25°C，因此，本阶段尽能控温，以利于子实体形成与生长，控温在25°C以下，超过2 8°C不能长处子座。(2)光线当菌丝长满后即可增加自然光照，菌丝见光后由白色逐渐变为桔黄色或桔黄色，菌丝分泌色素后培养基表面即会出现米粒状桔黄色菌蕾，菌蕾伸长后即为子实体，转身后不能连续光照，连续光照不能生成子实体。(3)空气湿度子实体生长阶段要把室内空气湿度加大到85% — 90%，以减少瓶内水分散发，虫草子实体形成要靠水份吸收营养，使细胞膨大，从原基形成之后直到成熟虫草的细胞总数并没有增加，其整个子实体的增大是每个细胞吸收水份及营养而增大的结果，为此，必须在营养料中加足水份，才能使虫草高产。(4)氧气虫草即使在密封的瓶中仍能正常生长。也就是说，它对氧气的需求量较小，为此，在整个生长过程中，尽量减少瓶内水份散发，无需去掉封口薄膜，当瓶中子实体长到2厘米高左右时，用粗针在封口薄膜上扎几个孔即可。按上述条件再经15天左右，虫草子座即可成熟，当高达8厘米左右，子实体表面有黄色粉末物出现即可采收。(七)、采收当虫草子座长到5-8厘米长，即成熟，去掉封口薄膜，蒋子实体拔出，晾干或烘干均可，如需保存，水份低于3 %以防止发霉变质，干后用薄膜袋密封。
权利要求
1.蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是采用的技术方案是蛹虫草的生产与深加工新技术，包括下列步骤(一)母种制备；(二)母种转原种和栽培种(三)悬浮液菌种的制备，(四)液体菌种的制备；(五)蛹虫草菌种的人工栽培。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是母种制备采用孢子分离法，在无菌条件下利用菌类子实体自行弹射孢子的原理，使孢子散落在人工培养基上，通过培养，得到原始菌系体，然后再移接入斜面试管进行培养；所述的母种制备包括(1)制作培养基(2)试管母种制备C3)试管母种的扩大培养；(4)出草试验；(5)组织分离制作母种。
3.根据权利要求1所述的蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是原种和栽培种来源于母种的扩大，原种是天然虫草菌株，通过人工培训后，提出优质菌落转入固体培养基，经过各个阶段不同的温度、湿度、营养物得到一级母种；母种只能作菌种使用，不得直接栽培，所以必须作原种转管培养，一般原种也不易直接栽培，因为原种来源极少，代价高，需多次转管培养成栽培种，母种转原种和栽培种包括(1)培养基的配制、( 母种转管扩大。
4.根据权利要求1所述的蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是所述的悬浮液菌种制备包括(1)培养基配制、( 灭菌、(3)接种培养。
5.根据权利要求1所述的蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是液体菌种制作为采用单级培养法又叫液体制种速成法，逐步实现多级培养方法，来实现高产稳产周期短，无感染的高效菌种，单级培养生产周期短，8-10天即可培养出第一批虫草液体菌种，生产量较大，根据需要1次可生产1000-2000毫升液体菌种，并可连续生产，栽培方便，只要把液体菌种喷到培养基表面即可发菌快，是固体发菌时间一半，产量高，是固体菌产量的2倍，并从根本上解决了感染时间，成功率高，用特制的过滤器完全杜绝了杂菌，酵母菌的感染，成功率高达95%以上，用传统方法种植虫草需要6-8个月的时间，采用液体菌种，只需50-60天， 极大的缩短了虫草生产周期，所述的液体菌种制作包括(1)液体菌种培养基配方、( 接种培养。
6.根据权利要求1所述的蛹虫草的生产与深加工新技术，特征是，所述的蛹虫草菌种人工栽培包括⑴按培养基配方制作培养基，⑵拌料装瓶；⑶灭菌；⑷接种；(5)培养室培养(6)后期管理；(7)采收。
全文摘要
蛹虫草的生产与深加工新技术，属于生物化工等新技术领域，尤其是一种蛹虫草的生产与深加工新技术。采用的技术方案是蛹虫草的生产与深加工新技术，包括下列步骤(一)母种制备；(二)母种转原种和栽培种(三)悬浮液菌种的制备，(四)液体菌种的制备；(五)蛹虫草菌种的人工栽培。本发明的效果是通过本发明的蛹虫草的生产与深加工新技术，能够增加冬虫夏草的产量，从根本上降低冬虫夏草的价格，为广大患者减轻疾病的痛苦发挥作用，为我国传统医药宝库中又增加另一朵奇葩。
文档编号A01G1/04GK102257922SQ20111011255
公开日2011年11月30日 申请日期2011年5月3日 优先权日2011年5月3日
发明者门玉森 申请人:门玉森