专利名称：哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞玻璃化冷冻技术领域，特别涉及ー种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体。
背景技术：
哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻是人类和动物生殖生物学的重要组成部分。特别是玻璃化冷冻的发明，可以使冷冻不需要借助常规的冷冻仪器，将冷冻材料放入冷冻液后直接投入液氮，大大简化了程序。玻璃化冷冻技术是利用体积微小的冷冻载体，在极快的降温(>2000V /min)过程中，使高浓度的冷冻保护液变为黏度很强的类似玻璃样的固态，避免细胞内冰晶的形成，达到冷冻保护的目的，从而显著提高细胞、组织冷冻后的存活力和发育能力。常用的玻璃化冷冻方法有尼龙环玻璃化法(Cryoloop)、开放式拉管法(0PS，Open Pulled Straw)、微细玻璃管法(GMP)、微滴法(Microdrops)、铜网法、Cryoloop、Cryotop 等。在玻璃化冷冻过程中冷冻载体的选择非常重要，直接影响着冷冻效率。冷冻载体的功能在于承载标本的同时尽量減少负载的冷冻液，达到冷冻过程中使标本直接接触液氮，快速降温达到玻璃化状态，同时解冻过程中又能迅速脱除冷冻液的目的。开放式拉管法由于重量轻冷冻时易漂浮于液氮表面，而且细管管壁较薄，在液氮中极易断裂在成样品丢失。微细玻璃管法在冷冻过程中易断裂，易造成样品丢失；GMP的直径和体积很小，限制了一次冷冻的样品数量，而且该法虹 吸效果显著，増加了操作难度。微滴法在贮存过程中无法进行标识，不利于样品的长期贮存。铜网法、Cryoloop和Cryotop在冷冻解冻过程中都存在样品丢失现象。
发明内容
针对目前现有技术中细胞冷冻存在的问题和缺陷，本发明提供ー种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体。技术方案ー种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，包括冷冻细管和锥形吸头，两者匹配对扣安装，其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体，该金属配重体与冷冻细管的存放内腔之间设置有密封隔层。所述冷冻细管的前端与锥形吸头连接处设置有至少一条纵向的剪切ロ。所述金属配重体完全密封于冷冻细管的后端，或者，在金属配重体接触的冷冻细管侧壁上设置有孔。所述金属配重体的前端设置有叉状筋，所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中，并贴合固定在冷冻细管的内侧壁上。所述金属配重体外露于冷冻细管之外，金属配重体仅有部分与冷冻细管套装固定，金属配重体的前端设置有叉状筋，所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中，并贴合固定在冷冻细管的内侧壁上。所述锥形吸头的尖端切ロ处的口径范围为ΙΟΟμ 200μπ 。有益效果1.本发明成本低，制作材料可以常用的耗材，操作简单。2.能够精确控制冷冻液的量，而且一次可以冷冻多枚卵母细胞或者胚胎。3.采用金属配重体，样品不会漂于液氮表面，不会丢失样品。4.采用金属配重体具有较好的导热性能，使冷冻速度快、效率高，減少了样品的冷冻损伤。尤其是采用了延伸到存放内腔中的叉状筋，不仅起到支撑冷冻管从而保护冷冻细胞的作用，而且与金属 配重体连接具有加快降温的作用，降温效果显著。5.载体可重复利用，不会断裂丢失样品，节约成本。在细管上可以做标记，便于长期保存。
图I是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之ー；
图2是与图I中冷冻细管配合安装的锥形吸头结构示意 图3是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之ニ；
图4是图3的A部放大结构示意 图5是图3的B-B剖面结构示意 图6是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之三。图中标号I为冷冻细管，11为冷冻细管的存放内腔，2为金属配重体,21为叉状筋，3为隔层，4为封ロ，5为剪切ロ，6为孔，7为锥形吸头，71为切ロ，72为安装ロ。
具体实施例方式 实施例一參见图I和图2，该哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体包括冷冻细管I和锥形吸头7，两者匹配对扣安装。图I中，冷冻细管I的前端与锥形吸头7连接处设置有至少一条纵向的剪切ロ 5，便于与锥形吸头匹配套装，并具有紧固性。图2中，锥形吸头7的尖端设置切ロ 71，另一端为安装ロ 72，切ロ 71处的口径范围为ΙΟΟμπι 200μπι。用Eppendorf 20μ1移液器安装锥形吸头7，将该载体装置一同放入液氮，用镊子将吸有冷冻样品的锥形吸头7从剪切ロ 5处插入冷冻细管I。等全部样品冷冻完成后，将所有冷冻细管I放入液氮罐中的提子里，放入液氮罐中即可长久保存。其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体2，该金属配重体2与冷冻细管的存放内腔之间设置有密封隔层3。所述金属配重体2完全密封于冷冻细管I的后端，便于冷冻细管能够下沉。另外，金属配重体2还能加速热传递的作用，提高冷冻效率，減少了样品的冷冻损伤。实施例ニ 參见图3、图4和图5,内容与实施例一基本相同，相同之处不重述，不同的是在金属配重体2接触的冷冻细管侧壁上设置有孔6。并且，所述金属配重体2的前端设置有叉状筋21，所述叉状筋21穿过隔层后伸入存放内腔11中，并贴合固定在冷冻细管I的内侧壁上，叉状筋21不仅对支撑冷冻细管具有加强和支持作用，而且与金属配重体连接具有加快降温的作用，降温效果显著。实施例三參见图6,内容与实施例ニ基本相同,相同之处不重述,不同的是所述金属配重体2外露于冷冻细管之外,金属配重体2仅有部分与冷冻细管I套装固定，金属配重体2的前端设置有叉状筋21，所述叉状筋21穿过隔层3后伸入存放内腔11中，并贴合固 定在冷冻细管I的内侧壁上。外漏的金属配重体2更利于导热作用。
权利要求
1.一种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是包括冷冻细管和锥形吸头，两者匹配对扣安装，其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体，该金属配重体与冷冻细管的存放内腔之间设置有密封隔层。
2.根据权利要求I所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是所述冷冻细管的前端与锥形吸头连接处设置有至少一条纵向的剪切口。
3.根据权利要求I所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是所述金属配重体完全密封于冷冻细管的后端，或者，在金属配重体接触的冷冻细管侧壁上设置有孔。
4.根据权利要求I所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是所述金属配重体的前端设置有叉状筋，所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中，并贴合固定在冷冻细管的内侧壁上。
5.根据权利要求I所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是所述金属配重体外露于冷冻细管之外，金属配重体仅有部分与冷冻细管套装固定，金属配重体的前端设置有叉状筋，所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中，并贴合固定在冷冻细管的内侧壁上。
6.根据权利要求1-5任一项所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，其特征是所述锥形吸头的尖端切口处的口径范围为100 ii m 200 ii m。
全文摘要
本发明公开了一种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体，包括冷冻细管和锥形吸头，两者匹配对扣安装，其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体，该金属配重体与冷冻细管的存放内腔之间设置有密封隔层。本发明成本低，制作材料是常用的耗材，操作简单；能够精确控制冷冻液的量，而且一次可以冷冻多枚卵母细胞或者胚胎；采用金属配重体，样品不会漂于液氮表面，不会丢失样品；使冷冻速度快、效率高，减少了样品的冷冻损伤；载体可重复利用，不会断裂丢失样品，节约成本。在细管上可以做标记，便于长期保存。
文档编号A01N1/02GK102669088SQ20121017295
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者岛田浩明, 张玉洋, 徐照学, 施巧婷, 水谷将也, 王二耀, 辛晓玲, 郎利敏, 陈俊峰, 魏成斌 申请人:河南省农业科学院