专利名称：一种海萝的组织培养方法
技术领域：
本发明涉及一种海萝的繁育方法，特别地涉及一种海萝的组织培养方法。
背景技术：
海萝属于海萝科，海萝属，是一种海生藻类。一般生于中潮带和高潮带下部的岩石上。藻体紫红色，黄褐色至褐色，软革质，干后韧，高4-10cm，可达15cm，丛生，主枝短，圆柱形或亚圆柱形，宽约4_，不规则二叉分枝，于分枝处常缢缩。内部组织疏松或中空，故藻体有时扁塌，细胞壁外层为海萝胶，内层为纤维素。四分孢子囊散在皮层中，十字形分裂，成熟的囊果圆球形或半球形，很小，突生体表，密布于藻体上。固着器盘状。海萝可以入药，按照中药学的记载，
海萝归经肺；脾；大肠经功效清热；消食；祛风除湿；软坚化痰主治劳热；骨蒸；泄泻；痢疾；风湿痹痛；咳嗽；瘿瘤；痔疾功效分类清热药；消食药；祛风除湿药；软坚化痰药因此海萝具有药用价值，但是目前均是直接采收野生状态的海萝，一年仅能采收I次，而且野生海萝产量低，采收困难。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种海萝的组织培养方法，该方法包括以下步骤( I)原材料的准备及消毒选择生长点完整、色泽正常的健康海萝作种菜，将其洗净，并将切成I 3mm见方的小块，随后将切好的小块浸泡于1%的碘化钾溶液中5分钟，再将海萝小块用灭菌海水冲洗4 5次，置于无菌的干净培养皿中备用；(2)愈伤培养基的配制及接种愈伤组织培养基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，EDTA_Fe20 25mg/L,甘油磷酸钾 80 90mg/L, H3B0320 30mg/L, ZnCl2IO 12mg/L, CoCl2. 6Η200· 4
O.6mg/L,三醋酸腈 I 1. 5mg/L,烟酸 O.1 O. 2mg/L,维生素 B1O.1 O. 15mg/L,琼脂 IOg/L ；将步骤(I)中所获得的海萝小块接种至愈伤组织培养基上，每个培养皿中接种4 5快海萝小块；(3)愈伤组织的培养将接种完成的愈伤组织培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在20摄氏度，光照强度为2000 25001x，每天光照时间为14小时；培养5 7天后愈伤组织形成；(4)扩大培养培养基的配制与接种扩大培养培养基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，K2S04800 lOOOmg/L, CaCl2. 2H20300 400mg/L，K2HP04600 700mg/L，H3BO3IO 12mg/L，MnSO4. 4H2030 35mg/L, ZnSO4. 7H200. 4 0. 5mg/L, CoCl2. 6H200. 05 0. lmg/L ；烟酸0. 2 0. 3mg/L，维生素 B6O.1 0. 2mg/L，维生素 B1O.1 O. 2mg/L，NNAO. 05 O. 08mg/L ；将步骤(3)中生成的愈伤组织接种到扩大培养培养基中，接种的数量为每IOOml培养基中接种愈伤组织I块；(5)扩大培养将接种完成的扩大培养培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在25摄氏度，光照强度为2500 30001x，每天光照时间为14小时，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气I次；培养20 25天后愈伤组织生长成为3 5厘米的海萝个体。 其中，步骤(I)中所述的将藻体洗净，优选地采用超声波清洗仪对藻体进行清洗。其中，优选地，在步骤(I)中增加使用抗生素灭菌的程序，确保藻体的无菌状态，该抗生素灭菌的程序是指将经过碘化钾溶液浸泡的藻体浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量为400 μ g/ml的青霉素G, 150 μ g/ml的硫酸链霉素,40 μ g/ml的新霉素B。浸泡时间为30分钟。本发明所述的海萝的组培方法可以摆脱野生海萝一年只能采收一次的情况，可以在室内大量连续地生产。
具体实施例方式实施例1按下列步骤对海萝进行组织培养( I)原材料的准备及消毒选择生长点完整、色泽正常的健康海萝作种菜，将其洗净，并将切成2mm见方的小块，随后将切好的小块浸泡于1%的碘化钾溶液中5分钟，再将海萝小块用灭菌海水冲洗4次，置于无菌的干净培养皿中备用；(2)愈伤培养基的配制及接种愈伤组织培养基的配方如下NaC120g/L，MgSO4.7H206g/L，EDTA_Fe20mg/L，甘油磷酸钾 80mg/L，H3B0320mg/L, ZnCl210mg/L, CoCl2. 6H200. 4mg/L，三醋酸腈 lmg/L，烟酸 0. lmg/L,维生素 B1O. lmg/L,琼脂 10g/L ；将步骤(I)中所获得的海萝小块接种至愈伤组织培养基上，每个培养皿中接种4块海萝小块；(3)愈伤组织的培养将接种完成的愈伤组织培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在20摄氏度，光照强度为22001x，每天光照时间为14小时；(4)扩大培养培养基的配制与接种扩大培养培养基的配方如下NaC120g/L,MgSO4. 7H206g/L, K2S04800mg/L,CaCl2. 2H20300mg/L, K2HP04600mg/L, H3B0310mg/L, MnSO4. 4H2030mg/L, ZnSO4. 7H200. 4mg/L,CoCl2. 6H200. 05mg/L ；烟酸0. 2mg/L，维生素 B6O. lmg/L,维生素 B1O. lmg/L, NNAO. 05mg/L ；
将步骤(3)中生成的愈伤组织接种到扩大培养培养基中，接种的数量为每IOOml培养基中接种愈伤组织I块；(5)扩大培养将接种完成的扩大培养培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在25摄氏度，光照强度为30001x，每天光照时间为14小时，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气I次。培养的结果是，愈伤组织在培养的第7天形成，诱导出愈伤组织的比例达到75. 3%，当扩大培养至12天时可以看到愈伤组织长成成熟个体形态，至24天时，海萝平均长度为3. 8厘米。实施例2按下列步骤对海萝进行组织培养( I)原材料的准备及消毒选择生长点完整、色泽正常的健康海萝作种菜，将其洗净，并将切成1. 5mm见方的小块，随后将切好的小块浸泡于1%的碘化钾溶液中5分钟，再将海萝小块用灭菌海水冲洗4次，置于无菌的干净培养皿中备用；(2)愈伤培养基的配制及接种愈伤组织培养基的配方如下NaC124g/L，MgSO4.7H207g/L, EDTA_Fe25mg/L，甘油磷酸钾 90mg/L, H3B0330mg/L, ZnCl212mg/L, CoCl2. 6Η200· 6mg/L,三醋酸腈1. 5mg/L,烟酸
O.2mg/L,维生素 B1O. 15mg/L,琼脂 10g/L ；
将步骤(I)中所获得的海萝小块接种至愈伤组织培养基上，每个培养皿中接种4块海萝小块；( 3)愈伤组织的培养将接种完成的愈伤组织培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在20摄氏度，光照强度为22001x，每天光照时间为14小时；(4)扩大培养培养基的配制与接种扩大培养培养基的配方如下NaC124g/L，MgSO4.7H207g/L, K2S041000mg/L,CaCl2. 2H20400mg/L, K2HP04700mg/L, H3B0312mg/L, MnSO4. 4H2035mg/L, ZnSO4. 7H200. 5mg/L,CoCl2. 6H200. lmg/L ；烟酸0. 3mg/L，维生素 B6O. 2mg/L，维生素 B1O. 2mg/L，NNAO. 08mg/L ；将步骤(3)中生成的愈伤组织接种到扩大培养培养基中，接种的数量为每IOOml培养基中接种愈伤组织I块；(5)扩大培养将接种完成的扩大培养培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在25摄氏度，光照强度为30001x，每天光照时间为14小时，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气I次。培养的结果是，愈伤组织在培养的第5天形成，诱导出愈伤组织的比例达到78. 8%，当扩大培养至11天时可以看到愈伤组织长成成熟个体形态，至24天时，海萝平均长度为4. 2厘米。本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变 型均在本发明要求保护的权利范围内。
权利要求
1.一种海萝的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)原材料的准备及消毒选择生长点完整、色泽正常的健康海萝作种菜，将其洗净，并将切成I 3mm见方的小块，随后将切好的小块浸泡于1%的碘化钾溶液中5分钟，再将海萝小块用灭菌海水冲洗4 5次，置于无菌的干净培养皿中备用；(2)愈伤培养基的配置及接种愈伤组织培养基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，EDTA_Fe20 25mg/L,甘油磷酸钾 80 90mg/L, H3B0320 30mg/L, ZnCl2IO 12mg/L, CoCl2. 6Η200· 4 .O.6mg/L,三醋酸腈 I 1. 5mg/L,烟酸 O.1 O. 2mg/L,维生素 B1O.1 O. 15mg/L,琼脂 IOg/L ；将步骤(I)中所获得的海萝小块接种至愈伤组织培养基上，每个培养皿中接种4 5快海萝小块；(3)愈伤组织的培养将接种完成的愈伤组织培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在20摄氏度，光照强度为2000 25001x，每天光照时间为14小时；培养5 7天后愈伤组织形成；(4)扩大培养培养基的配制与接种扩大培养培养基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，K2S048 00 1000mg/L, CaCl2. 2H20300 400mg/L，K2HP04600 700mg/L，H3BO3IO 12mg/L，MnSO4. 4H2030 35mg/L, ZnSO4. 7H200. 4 0. 5mg/L, CoCl2. 6H200. 05 0. lmg/L ；烟酸 0. 2 0. 3mg/L,维生素 B6O.1 0. 2mg/L,维生素 B1O.1 O. 2mg/L, NNAO. 05 .O.08mg/L ；将步骤(3)中生成的愈伤组织接种到扩大培养培养基中，接种的数量为每IOOml培养基中接种愈伤组织I块；(5)扩大培养将接种完成的扩大培养培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在25摄氏度,光照强度为2500 30001x，每天光照时间为14小时，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气I次；培养20 25天后愈伤组织生长成为3 5厘米的海萝个体。
2.权利要求1中所述的海萝的组织培养方法，其中步骤(I)中所述的将藻体洗净，优选地采用超声波清洗仪对藻体进行清洗。
3.权利要求1中所述的海萝的组织培养方法，其特征在于在步骤(I)中增加使用抗生素灭菌的程序，确保藻体的无菌状态，该抗生素灭菌的程序是指将经过碘化钾溶液浸泡的藻体浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量为400μ g/ml的青霉素G，150y g/ml的硫酸链霉素，40 μ g/ml的新霉素B。浸泡时间为30分钟。
全文摘要
本发明提供了一种海萝的组织培养方法。该方法主要包括原材料的选取准备及消毒，愈伤组织的培育，扩大培养。并且公开了愈伤组织培养基和扩大培养培养基的具体配方，以及愈伤组织的培育和扩大培养的培养条件。
文档编号A01H4/00GK102986530SQ201210484740
公开日2013年3月27日 申请日期2012年11月25日 优先权日2012年11月25日
发明者彭江晨, 芮旭婷 申请人:溧阳市天目湖保健品有限公司