专利名称：一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法
技术领域：
本发明涉及提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法，属植物的人工繁殖技术领域。
背景技术：
彩色马蹄莲(Zantedesehia hybrida)属天南星科(Araceae)马蹄莲属(Zantedeschia Spreng)植物,原产自非洲东南部，其佛焰荀有橘红、玫红、紫红、鲜黄等颜色，与传统的白色马蹄莲相比，具有花色品种多、花色艳丽、观赏性强等优点，既可作为切花，又可作为盆花。多数彩色马蹄莲叶片带月白色斑点或条纹，是具有较高观赏价值的配叶材料。由于彩色马蹄莲花、叶俱佳，其市场潜力较大，近年来在国内外花卉市场占有越来越重要的地位。彩色马蹄莲多采用组织培养的方法进行快速繁殖，既可以加快种苗繁育进程，又可以起到提纯复壮的作用，是实现产业化生产和栽培的有效途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率的方法，以满足对彩色马蹄莲规模化生产以 及育种为基础的其他方面的研究工作的需要。本发明的技术方案如下，该种提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的主要特点是:A外植体消毒:选取直径约2cm的健康的彩色马蹄莲小种球，用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理的湿润的细沙基质中，在光照30001x、12h/d、(25 ± I) °C的条件下进行预培养，令种球萌发；7 IOd后，选取芽长约Icm的种球，经表面消毒后接种。具体消毒方法为:用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，削去块茎表皮，在安利洗涤剂溶液中振荡洗涤20min，再用2g/L多菌灵溶液浸泡lh，自来水冲洗40min，转入超净台，切除块茎表层，保留直径约1.5cm的带芽块茎，75%酒精浸泡15s，无菌水冲洗I次，再用0.2%的升萊进行15 20min的消毒,无菌水冲洗6 8次,无菌吸水纸吸干水分。B芽诱导培养:将消毒好的彩色马蹄莲种球切成直径约Icm的带芽小块，接种至下列培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，生长激素0.1 0.2mg/L,细胞分裂素0.4
0.5mg/L，pH5.8 ;在培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为12 16h下进行光照培养20 30天至分化出芽。C 60Co Y射线辐射处理:将分化出芽的组培苗分切继代后，连瓶于6tlCo Y射线下进行40Gy，0.5h辐射照射，然后接种到以下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1 0.2mg/L，细胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001X，光照时间为12 16h，进行光照培养25 30天。D丛生芽的培养:将生长至6 8cm左右的丛生芽分切，在以下培养基中进行继代培养:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1 0.2mg/L,细胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培养温度25土 1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为12 16h，进行光照
培养20 30天。
E生根培养:选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素1.0 2.0mg/L，细胞分裂素0.15 0.2mg/L，pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为10 16h，进行光照培养20 30天至成苗。F炼苗移栽:将组培瓶从培养室取出，在缓冲间将瓶盖打开，进行有菌条件驯化3 5d ;后用镊子将组培苗从瓶中取出，用500 800倍多菌灵浸泡20m左右，洗净后移栽到基质(泥炭土:珍珠岩:沙=2: 2:1)中进行栽培。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤A中的消毒试剂和时间、步骤B中的培养基和培养条件、步骤C中的辐射条件以及步骤B、C、D、E中彩色马蹄莲快速繁殖所述的培养基中涉及的植物生长激素和细胞分裂素，包括6-卞基腺嘌呤出-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)其中的一种或几种。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤A中的种球消毒用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理的湿润的细沙基质中，在光照30001x、12h/d、(25± I) °C的条件下进行预培养，令种球萌发，然后采用0.1%的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤20min、2g/L多菌灵溶液浸泡Ih和0.2%升汞灭菌10 20min。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤B中所涉及到的植物生长激素包括萘乙酸(NAA)0.1 0.2mg/L,吲哚丁酸(IBA)0.1 0.2mg/L，6_卞基腺嘌呤(6-BA) 0.4 0.5mg/L。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤C中所涉及到的6°Co y射线下进行40Gy，0.5h辐射照射。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤D中所涉及到的植物生长激素包括萘乙酸(NAA) 1.0 2.0mg/L,吲哚丁酸(IBA) 1.0 2.0mg/L, 6-卞基腺嘌呤(6-BA) 0.15 0 .2mg/L。所述的提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率方法的延伸技术方案包括:步骤F中所涉及到的进行有菌条件驯化3 5d ;用500 800倍多菌灵浸泡20min左右；基质配比(泥炭土:珍珠岩:沙=2:2:1)。采用辐射诱变的方法提高彩色马蹄莲丛生芽的增殖率，较之传统组培的丛生芽诱导率(每籽球5 6个丛生芽，经辐射诱变后籽球丛生芽达到10 14个左右)提高了将近1.5倍。组培苗移栽后的观测结果表明，40Gy 0.5h60Co y射线辐射几乎没有导致彩色马蹄莲外部形态形状产生变异，并一定程度上提高了其对高温高湿的抗性，这一点对于易感染软腐病的长江中下游地区来说，非常重要；而且此方法周期短，效率高。这种方法为提高植物组培繁殖系数提供了全新的思路。
图1是取材用的健康彩色马蹄莲种球图；图2是彩色马蹄莲不定芽图；图3是辐射诱变与正常对比图(左边为正常，右边为辐射诱变)；图4是辐射诱变后彩色马蹄莲的生根情况图；图5是完整的植株图；图6是经炼苗驯化的移栽组培苗图
具体实施方式
下面结合提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率的实例说明本发明的具体实施方式
。实施例1彩色马蹄莲初代培养及丛生芽诱导1、选取直径约2cm的健康的彩色马蹄莲小种球，用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理的湿润的细沙基质中，在光照30001x、12h/d、(25±1)°C的条件下进行预培养，令种球萌发；7 IOd后，选取芽长约Icm的种球，经表面消毒后接种。具体消毒方法为:用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，削去块茎表皮，在安利洗涤剂溶液中振荡20min，再用2g/L多菌灵溶液浸泡lh，自来水冲洗40min，转入超净台，切除块茎表层，保留直径约1.5cm的带芽块茎，75%酒精浸泡15s，无菌水冲洗I次，而后以0.2%的升汞进行15 20min的消毒。处理完毕后，无菌水冲洗6 8次，无菌吸水纸吸干水分。2、将消毒好的彩色马蹄莲种球切成直径约Icm的带芽小块，接种到无激素MS培养基(含30g/L蔗糖，6.0g/L琼脂，pH值为5.8)上，每瓶接I个芽块。在培养温度为25± 1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为12 16h，进行光照培养15 20天，至长出丛生芽。3、将培养20天左右丛生芽，接种至下列培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1 0.2mg/L，细胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;在培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为12 16h下进行光照培养20 30天至分化出芽。实施例2丛生芽的辐射诱变及壮苗生根1、将分化出芽的组培苗分切继代后，连瓶于6tlCo Y射线下进行40Gy，0.5h辐射照射，2、将辐射诱变后的彩色马蹄莲接种到以下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1 0.2mg/L，细胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照 时间为12 16h，进行光照培养25 30天。3、选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素1.0 2.0mg/L,细胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为10 16h，进行光照培养20 30天至生根成苗。实施例3炼苗移栽1、将组培瓶从培养室取出，在缓冲间将瓶盖打开，进行有菌条件驯化3 5d ;2、用镊子将组培苗从瓶中取出，用500 800倍多菌灵浸泡20m左右，洗净后移栽到基质(泥炭土:珍珠岩:沙=2: 2:1)中进行栽培。以上6tlCo Y射线辐射诱变提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率的实例见附图。
权利要求
1.一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法，其特征在于: A外植体消毒:选取直径约2cm的健康的彩色马蹄莲小种球，用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理的湿润的细沙基质中，在光照30001X、12h/d、(25 ± I) °C的条件下进行预培养，令种球萌发；7 IOd后，选取芽长约Icm的种球，经表面消毒后接种。具体消毒方法为:用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，削去块茎表皮，在安利洗涤剂溶液中振荡20min，再用2g/L多菌灵溶液浸泡lh，自来水冲洗40min，转入超净台，切除块茎表层，保留直径约1.5cm的带芽块茎，75 %酒精浸泡15s，无菌水冲洗I次，而后以0.2%的升汞消毒15 20min。处理完毕后，无菌水冲洗6 8次，无菌吸水纸吸干水分； B芽诱导培养:将消毒好的彩色马蹄莲种球切成直径约Icm的带芽小块，接种至下列培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，生长激素0.1 0.2mg/L,细胞分裂素0.4 0.5mg/L,pH5.8 ;在培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为12 16h下进行光照培养20 30天至分化出芽； C 6qCoy射线辐射处理:将继代生长20d的丛生芽(连瓶)于6ciCoy射线下进行40Gy，0.5h辐射照射，生长恢复IOd后接种到以下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1 0.2mg/L，细胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为2000 30001x，光照时间为12 16h，进行光照培养25 30天。30d后继续继代培养，使丛生芽增殖； D生根培养:选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中:MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素1.0 2.0mg/L，细胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培养温度25±1°C，光照强度为1000 30001x，光照时间为10 16h，进行光照培养20 30天至成苗； E炼苗移栽:将组培瓶从培养室取出，在缓冲间将瓶盖打开，进行有菌条件驯化3 5d ；后用镊子将组培苗从瓶中取出，用500 800倍多菌灵浸泡20min左右，洗净后移栽到基质(泥炭土:珍珠岩:沙=2: 2:1)中进行栽培。
2.根据权利要求1所述的提高彩色马蹄莲增殖率的方法，其特征在于步骤C中所涉及到的6°Co y射线下进行40Gy，0.5h辐射照射。
全文摘要
本发明提供一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法，对彩色马蹄莲的规模化生产和繁殖以满足市场需要具有一定的技术指导作用，提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率的培养步骤包括A.外植体消毒；B丛生芽诱导；C.60Co γ射线辐射处理；D.丛生芽培养；E.生根培养；F.炼苗移栽。采用植物组织培养的方法结合辐射处理繁殖彩色马蹄莲，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，降低生产成本，而且可以在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为彩色马蹄莲产业提供大量的植物材料。
文档编号A01G31/00GK103229717SQ20121052807
公开日2013年8月7日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者郑玉红, 陆波, 束晓春, 王 忠, 彭峰 申请人:江苏省中国科学院植物研究所