专利名称：薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法
技术领域：
本发明涉及一种以薄壳山核桃组培的不定芽嫁接至薄壳山核桃一年生实生苗新枝的微型嫁接方法。
背景技术：
薄壳山核桃[Carya illinoinensis (ffangehn. )K. Koch.]又名美国山核桃、长山核桃，为胡桃科山核桃属落叶乔木，原产美 国南部和墨西哥北部，是世界上著名的油料干果树种之一，同时也是果、木兼用的优良经济树种，能适应较大范围的土壤酸碱度，在自然环境下，薄壳山核桃靠种子繁殖。薄壳山核桃干果可加工成各种特色风味食品、保健品，其种仁含油率高达70% 72%，富含不饱和脂肪酸，含粗蛋白7. 8% 9. 6%和含K、Ca、Mg、Na等人体所必须的矿质元素。薄壳山核桃木质坚硬、纹理美、抗腐蚀，在军工、船舶和建筑业用途广泛，是我国一种十分优良的经济树种。我国引种栽培薄壳山核桃已有上百年历史，浙江省于19世纪60年代开始引种。薄壳山核桃作为重要的南方特色干果，是经济效益最好、最受山区农民欢迎的树种之一，更是适合石灰岩山地栽培的优良生态经济树种，已经成为浙江、安徽、云南、福建、湖南、江西等我国南方亚热带地区适宜推广省份重要的山地经济树种。目前，薄壳山核桃已成为我国南方山区造林的首选经济树种之一。然而，由于早期大都通过种子引进，现有投产林大都为实生树，且栽培零星分散，品种良莠不齐，随着南方干果产业结构调整和经济林的蓬勃发展，目前薄壳山核桃品种退化分离明显、结果迟，产量低，品质差，加上树体高大，采摘不方便，作为果品生产，推广困难。虽然近年来云南、江苏、浙江、湖南、广西、四川、江西、甘肃、河南、贵州、河北等地区较大面积推广种植，但薄壳山核桃在栽培中由于优质苗木数量极少，以致造林成活率低、造林不成林、生长缓慢、投产周期长、单位面积产量低、低产低效林面积大、优良接穗来源少、苗木繁殖系数低及优质壮苗培育技术缺乏等问题日益突出，严重制约了薄壳山核桃产业的快速健康发展。林学界，众多学者对薄壳山核桃的繁殖作了许多新的探索和尝试，如李俊南等先生的薄壳山核桃单芽腹接技术、常君等的薄壳山核桃根段育苗技术，杨国荣等的薄壳山核桃以苗繁苗快速扩繁技术等，各对社会作出了有益的贡献。经检索，至今未发现通过薄壳山核桃优株一年生枝条经试管培育不定芽经微型嫁接，繁殖生根育成植株的方法的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种以薄壳山核桃一年生枝条为外植体，诱导形成不定芽、不定芽伸长培养，并将伸长的不定芽嫁接至薄壳山核桃一年生实生苗新技的微型嫁接方法。本发明的技术问题通过如下技术方案解决本薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法按如下步骤进行
一、接穗组培芽诱导与增殖(I)外植体采集与消毒选取健壮的薄壳山核桃优株I年生健壮新枝，依次进行自来水冲洗2h，超净工作台上用75%乙醇灭菌3min，无菌水冲洗3 4次，浓度为0. 525%的NaClO灭菌20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干表面水分，切下带顶芽和腋芽长度为I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽诱导培养基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、琼脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤0. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0.1 0. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽诱导将初代培养后胚根发育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽诱导培养基中，经过21d的诱导，获得不定芽；用微电脑时控开关控制培养室每日光照时间，每日光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40 50iimol hTY1，培养温度为25±2°C ；
(4)不定芽增殖培养基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、琼脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1. 0 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0. 05 0. lmg/L, pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培养将获得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，21天继代I次，共继代3次，增殖系数为5 8 ;光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40 50iimol m—Y1，培养温度为25±2°C ；二、薄壳山核桃砧木培育选择当年充分成熟的薄壳山核桃作站木种子，在大棚(6m 30m)中设置苗床,苗床长度与宽度分别为Im和10m，苗床底部按每平方米IOOW的标准布地热线，温度由控温议控制；用1000mg/L浓度的赤霉素浸泡种子2 3天，捞出后直接将种子摆放在苗床上，薄壳山核桃缝合线与土表垂直，一般每平方米摆放700 800粒，于薄壳山核桃上覆沙土 8 10cm，浇透水再覆地膜，控制温度在25±2°C ；三、组培芽嫁接于大棚中从苗床取出18 20cm高的种子苗做砧木，在子叶着生处以上2 3cm处剪断砧苗，沿髓心稍偏纵切，深Icm ;剪下3. 0 3. 5cm长的健壮组培芽，插入砧木的纵切口，用微膜(0. 5cm * 10cm)包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保温保湿；一周后，逐渐剪开透明塑料袋的袋角，直至全部剪开并去除套袋；四、管理微型嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚温度控制在25±2°C，湿度控制在85%±2%，避免阳光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。本发明的有益效果是应用薄壳山核桃组培不定芽诱导并进行组培芽嫁接，能使新生植株保持母本的优良性状，有效地提高薄壳山核桃优株的繁殖系数，为薄壳山核桃良种快繁打下良好的基础。与播种繁殖相比，优株不定芽诱导能保持母本优良的生物学特性，优株不定芽嫁接能有效避免不定芽瓶内不易生根的难题，育苗周期短。与扦插繁殖或常规嫁接繁殖相比，在一个为期6个月的生长周期内组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖或常规嫁接繁殖的50 60倍。
具体实施例方式本发明下面结合实施例作进一步详述本薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法的接穗不定芽诱导与增殖培养基中，选用基本培养基是WPM培养基(其成分是公知公用的)，不细述，这是经过用MS、1/2MS、WPM、DKff四种基本培养基各自均附加蔗糖20 30g/L、琼脂A
6.5 8. 5g/L、6_BA 即 6-氛基腺嘿呤 0. 5 3. Omg/L, IBA 即H引噪丁酸 0. 05 0. 5mg/L, pH值5. 7，进行试验，每组重复3次，每种基本培养基有20个外植体的对比试验得出的、因WPM培养基中处理21天后，不定芽发育最好，诱导的不定芽数量最多，质量最好。培育站木用1000mg/L浓度的赤霉素浸泡种子2-3天,薄壳山核桃缝合线与土表垂直，一般每平方米摆放700 800粒，于薄壳山核桃上覆沙土 8 10cm，浇透水再覆地膜，控制温度在25±2°C ;从苗床取出适合种子苗做砧木，在子叶柄以上2 3cm处剪断砧苗，沿髓心稍偏纵切，深约Icm ;经处理的组培芽削成楔形，插入砧木的纵切口，用微膜包扎，栽植于育苗容器，外罩透明塑料袋保湿，适时剪角去袋，最后做好接穗和砧木愈合期的大棚管理工作。总之，本发明所公开的培养基各原料的配比值也可分别采用本发明最 佳方案定值的接近值取代。下面给出的是本发明的最佳实施例。本薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法，包括不同诱导时期的两种培养基，两种培养基的原料及其附加量分别是(I)不定芽诱导培养基WPM附加蔗糖25g/L、琼脂A7. 5g/L、6_BA即6_氨基腺嘌呤 2. Omg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. 3mg/L，pH 值 5. 7 ;(2)不定芽增殖培养基WPM附加蔗糖25g/L、琼脂A7. 5g/L，6-BA即6_氨基腺嘌呤1. 0mg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. lmg/L, pH 值为 5. 7 ；用上述培养基进行薄壳山核桃不定芽诱导及增殖方法经过下列步骤首先是外植体采集与消毒选取健壮的薄壳山核桃优株I年生健壮新枝，依次进行自来水冲洗2h，超净工作台上用75 %乙醇灭菌3min，无菌水冲洗3 4次，浓度为0. 525%的NaClO灭菌20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干表面水分，切下带顶芽和腋芽的枝段(I 1. 5cm)待用；其次是不定芽诱导将步骤(I)无菌条件下取出的幼胚接入前述的初代培养基中，培养21d,光暗周期为光16h/暗8h的条件下培养,光照强度40 50iimol nT2s'培养温度为25±2°C ;最后是不定芽增殖将获得的不定芽长至0. 5cm左右闻时，从莖基部切下并接种到前述的不定芽增殖培养基中培养，21天继代I次，共继代3次，每次增殖系数为5 8。光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40 50iimol hTY1，培养温度25±2°C。
权利要求
1.一种薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法，其特征是按如下步骤进行一、接穗组培芽诱导与增殖；(1)外植体采集与消毒选取健壮的薄壳山核桃优株I年生健壮新枝，依次进行自来水冲洗2h，超净工作台上用75%乙醇灭菌3min，无菌水冲洗3 4次，浓度为O. 525%的NaClO 灭苗20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干表面水分，切下带顶芽和腋芽长度为I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽诱导培养基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、琼脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤O. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O.1 O. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽诱导将初代培养后胚根发育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽诱导培养基中，经过21d的诱导，获得不定芽；用微电脑时控开关控制培养室每日光照时间，每日光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40 50μπιΟ1 HT2s-1,培养温度为25±2°C ；(4)不定芽增殖培养基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、琼脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤1. O 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O. 05 O. lmg/L，pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培养将获得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，21天继代I次，共继代3次，增殖系数为5 8 ;光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40 50 μ mo I HT2s-1,培养温度为25±2°C ；二、薄壳山核桃砧木培育选择当年充分成熟的薄壳山核桃作砧木种子，在大棚中设置苗床，苗床长度与宽度分别为Im和10m，苗床底部按每平方米100W的标准布地热线，温度由控温仪控制；用IOOOmg/ L浓度的赤霉素浸泡种子2 3天，捞出后直接将种子摆放在苗床上，薄壳山核桃缝合线与土表垂直，每平方米摆放700 800粒、于薄壳山核桃上覆沙土 8 10cm，浇透水再覆地膜， 控制温度在25±2°C ;三、组培芽嫁接于大棚中从苗床取出18 20cm高的种子苗做砧木，在子叶着生处以上2 3cm处剪断砧苗，沿髓心稍偏纵切，深Icm ;剪下3. O 3. 5cm长的健壮组培芽，插入砧木的纵切口， 用0. 5cm * IOcm的微膜包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保湿；一周后，逐渐剪开透明塑料袋的袋角，直至全部剪开并去除套袋；四、管理嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚温度控制在25±2°C，湿度控制在85% ± 2 %，避免阳光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。
全文摘要
一种薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法，按如下四大步骤进行一是接穗组培芽的诱导与增殖，经外植体采集与消毒、不定芽诱导培养基的配制、不定芽诱导、不定芽增殖培养基的配制和不定芽增殖培养五个工作环节。二是薄壳山核桃砧木的培育，三是组培芽的嫁接，四是嫁接和愈合期的管理。用本方法培育薄壳山核桃，具有保持母本特性、结果早、抗逆性强、繁殖速率高等优点。
文档编号A01G1/00GK103004593SQ20121053755
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者张启香, 王正加, 刘力, 胡恒康, 施娟娟, 武丽萍 申请人:浙江农林大学