专利名称：一种牛肝菌母种培养基及其制备方法
技术领域：
本发明属于真菌培养基领域，尤其涉及一种牛肝菌母种培养基及其制备方法。
背景技术：
牛肝菌类是牛肝菌科和松塔牛肝菌科等真菌的统称，其中除少数品种有毒或味苦而不能食用外，大部分品种均可食用。有些牛肝菌味道鲜美，营养丰富，如美味牛肝菌、黄褐牛肝菌和灰褐牛肝菌等。食用牛肝菌普遍菌体较大，肉肥厚，柄粗壮，食味香甜可口，营养丰富，是一类世界性著名食用菌。
牛肝菌富含蛋白质、碳水化合物、维生素及钙、磷、铁等矿物质。牛肝菌是珍贵菌类，有些牛肝菌品种香味独特、营养丰富，有些牛肝菌品种有防病治病、强身健体的功能，特别对糖尿病有很好的疗效。此外，有些品种的牛肝菌其水提物对小白鼠肉瘤S-180的生长有阻抑作用，对肉瘤S-180的抑制率为100%，对艾氏腹水癌的抑制率为90%，同时还有抗流感病毒、防治感冒的作用，是我国远销欧美的著名食用菌。据分析，100克牛肝菌干品中可含蛋白质20. 2克，碳水化合物64. 2克，热量338千卡，灰分4. O克，Ca23毫克，P500毫克，Fe50毫克，核黄素3. 68毫克.牛肝菌具有清热解烦、养血和中、追风散寒、舒筋和血、补虚提神等功效，是中成药“舒筋丸”的原料之一；又是妇科良药，可治妇女白带症及不孕症。另外，还有抗流感病毒、防治感冒的作用。可见牛肝菌确是众多菌类中功能齐全、食药兼用的珍品。经常食用牛肝菌可明显增强机体免疫力、改善机体微循环。但，牛肝菌的人工培养很困难，培养过程中，菌丝生产慢，在菌丝生长阶段容易形成原基，影响菌丝体对营养的积累，导致不能正常形成子实体。母种培养基各组份种类比较多，选择合适生长的原料困难；且配方成份用量的微量变化会导致牛肝菌生长过程的不同。传统母种培养基培养的牛肝菌菌丝体虽可以在栽培料中获得子实体，但其母种菌丝体很难长满试管斜面，在生长的第4-7天就会形成原基，而影响牛肝菌以后的正常生长，且培养料产出的子实体产量低。所以，合适的牛肝菌生长的牛肝菌母种培养基是目前所需。
发明内容
针对所述问题，本发明的目的是提供一种牛肝菌母种培养基及制备方法。这种牛肝菌菌丝生长快，在菌丝生长期间不会形成原基，同时为子实体的人工栽培提供了产量高的优良母种。实现本发明目的技术方案是
一种牛肝菌母种培养基，按重量份数计量包括有下述组份
葡萄糖 18-24份酵母粉 5-8份
黄豆粉 2-4份
KH2PO4 O. 2-0. 6 份
MgSO4 · H2O O. 25-0. 65 份
腐殖土15-23份
干松针40-55份 琼脂14-26份
水800-1500 份
作为优选方案，本发明中各组份的优选用量为
葡萄糖19-22份
酵母粉6-7. 5份
黄豆粉2. 5-3. 5份
KH2PO4O. 3-0. 53 份
MgSO4 · H2O O. 4-0. 6 份腐殖土18-21份
干松针48-52份
琼脂16-24份
水900-1300 份
本发明中各组份的最佳用量为
葡萄糖 20份 酵母粉 6. 5份 黄豆粉 3份 KH2PO4 O. 5 份 MgSO4 · H2O O. 45 份 腐殖土 20份 干松针 50份 琼脂20份
水1000份
制备本发明牛肝菌母种培养基的方法，按以下步骤操作
步骤一、原料称量，清洁容器设备；
步骤二、将称好的18-24份葡萄糖，5-8份酵母粉，2-4份黄豆粉、O. 2-0. 6份 KH2PO4,0. 25-0. 65份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置备用；
步骤三、将称好的15-23份腐殖土放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提20分钟，过滤，滤液加到容器中；
步骤四、将40-55份干松针放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提15分钟，取浸提液加入到同一容器中；
步骤五、将上述容器中的混合液加热1-3分钟，使温度达到90-100°C ;再加入14-26份琼脂，加热2-3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
步骤六、将试管中的物料在温度120°C、压力101. 33 KPa下，用20-30分钟灭菌，即得牛肝菌母种培养基。所述葡萄糖为医药用葡萄糖。葡萄糖提供牛肝菌生长所需碳源。酵母粉使微生物吸收利用各种营养的速度和效率更高。黄豆粉提供牛肝菌丝生长所需氮源，KH2PO4与MgSO4 · H2O提供牛肝菌丝生长所需要的磷钾和镁等矿物质；腐殖土增加牛肝菌原生长地的营养成份，使牛肝菌的菌丝体能适应人工培养基，加快其生长速度。腐殖土的生物循环过程中积累了大量矿物质，以钙、钾为主，还有硫、磷等。牛肝菌是与松树共生的外生菌根真菌，在培养基中添加干松针成份，主要是弥补人工培养基所缺乏的牛肝菌需要的松树中的元素。松针富含糖类、粗蛋白、粗脂肪、多种氨基酸和多种微量矿元素、多种维生素、生物黄酮类物质、精油、叶绿素、不饱和脂肪酸、酶与辅酶等活性物质。 琼脂溶解冷却呈凝固液体，使培养基成为固体状态，便于操作，便于转接传代，也方便保存。本发明中的母种培养基，培养牛肝菌的菌丝体生长速度快，生长初期不形成原基；菌丝14-16天可长满5-8厘米的试管斜面，不在试管中形成原基，牛肝菌产量比传统的母种培养基增长20-30%。
具体实施例以下干松针和腐殖土采自于野生牛肝菌生长地，其它地方的干松针和腐殖土也适用。实施例1
将称好的18-24份葡萄糖，5-8份酵母粉，2-4份黄豆粉，O. 2-0. 6份 KH2PO4,0. 25-0. 65份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置备用；
将称好的15-23份腐殖土放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提15-22分钟，过滤，滤液加到容器中；将40-55份干松针放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提15-20分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热1-3分钟，温度90-100°C ;再加入14-22份琼脂，加热2_3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例2
将称好的19-22份葡萄糖，6-7. 5份酵母粉，2. 5-3. 5份黄豆粉、O. 3-0. 53份KH2PO4,0. 4-0. 6份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置备用；将称好的18-21份腐殖土放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提15-22分钟，过滤，滤液加到容器中；将48-52份干松针放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提15-20分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热1-3分钟，温度90-100°C ;再加入16-21份琼脂，加热2_3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间25分钟即得牛肝菌母种培养基。
实施例3
将称好的20份葡萄糖，6. 5份酵母粉，3份黄豆粉、O. 5份KH2PO4,0. 45份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入300份水，放置备用；将称好的20份腐殖土放入烧杯中加入200份水煮沸浸提15-22分钟，过滤，滤液加到容器中；将50份干松针放入烧杯中加入200份水煮沸浸提15-20分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热1-3分钟，温度90-100°C ;再加入20份琼脂，加热2-3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例4
将称好的药用葡萄糖20克，酵母粉6. 5克，黄豆粉3克KH2PO4O. 5克，MgSO4 · H2O O. 5 克，放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置备用；将称好的腐殖土放入烧杯中加入200毫升水煮沸浸提20分钟，过滤，滤液加到1000毫升量盅中；将干松针加入200毫升水煮沸浸提15分钟，取浸提液倒入1000毫升量盅；
以上材料一起煮沸1-2分钟，待所有药品溶解后，加入20克琼脂，加热至琼脂完全溶解后，加水定容至1000毫升，分装到试管中，常规高温高压灭菌，温度120°C，压力101.33KPa, 30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例5
将称好的18份葡萄糖，5份酵母粉，2份黄豆粉、O. 2份KH2PO4,0. 25份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入220份水，放置备用；将称好的15份腐殖土放入烧杯中加入240份水煮沸浸提20分钟，过滤，滤液加到容器中；将40份干松针放入烧杯中加入250份水煮沸浸提15分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热3分钟，温度100°C ;再加入14份琼脂，加热3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例6
将称好的24份葡萄糖，8份酵母粉，4份黄豆粉、O. 6份KH2PO4,0. 65份MgSO4 -H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置备用；将称好的23份腐殖土放入烧杯中加入200-250份水煮沸浸提20分钟，过滤，滤液加到容器中；将55份干松针放入烧杯中加入50份水煮沸浸提20分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热3分钟，温度100°C ;再加入22份琼脂，加热3分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间40分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例7
将称好的19份葡萄糖，6份酵母粉，2. 5份黄豆粉、O. 3份KH2PO4,0. 4份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200份水，放置备用；将称好的18份腐殖土放入烧杯中加入250份水煮沸浸提15分钟，过滤，滤液加到容器中；将48份干松针放入烧杯中加入200份水煮沸浸提15分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热2分钟，温度100°C ;再加入16份琼脂，加热2分钟至琼脂完全溶解后，加水定容，分装到试管中；灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间20分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例8
将称好的22份葡萄糖，7. 5份酵母粉，3. 5份黄豆粉、O. 53份KH2PO4,0. 6份MgSO4 -H2O,放入容器中，加入300份水，放置备用；将称好的18-21份腐殖土放入烧杯中加入250份水煮沸浸提22分钟，过滤，滤液加到容器中；将48-52份干松针放入烧杯中加入200份水煮沸浸提20分钟，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加热3分钟，温度100°C ;再加入21份琼脂，加热3分钟至琼脂完全 溶解后，加水定容，分装到试管中；
灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa，时间30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例9 (对照组I)
以传统培养基MMN培养基为对照组I
把称好量的 O. 25 克(NH4)2HPO4,0. 5 克 KH2PO4,0. 15 克 MgSO4 · 7H20，10 克葡萄糖，3 克麦芽糖，55毫克CaCl2 · 2H20,0. 25毫克NaCl，20毫克FeCl3,100微克硫胺素，25微克生物素放入容器中，加500毫升水煮沸1-2分钟，加入20克琼脂至溶解，用水定容到1000毫升，高温高压灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa, 30分钟即得牛肝菌母种培养基。
实施例10 (对照组2)
将称好的马铃薯200克，葡萄糖20克，酵母浸出液2克，I克KH2PO4,40微克/毫升维生素&，放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置备用；以上材料一起煮沸30分钟，待所有材料溶解后，加入20克琼脂，加热至琼脂完全溶解后，用剩余的水定容至1000毫升，分装到试管中，常规高温高压灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa, 30分钟即得牛肝菌母种培养基。实施例11 (对照组3)
将称好的葡萄糖20克，酵母粉7克，黄豆粉3克，I克KH2PO4,0. 5克MgSO4 -H2O7O. 5克MnSO4 · H2O,放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置备用；以上材料一起煮沸1_2分钟，待所有药品溶解后，加入20克琼脂,加热至琼脂完全溶解后,用剩余的水定容至1000毫升，分装到试管中，常规高温高压灭菌，温度120°C，压力101. 33 KPa, 30分钟即得牛肝菌母种培养基。培养方法
将牛肝菌植入母种培养基中，25度培养箱中静态培养，如双色牛肝菌、美味牛肝菌或灰褐牛肝菌等。性能指标，如下表(实施例9-11为对照组)
权利要求
1.一种牛肝菌母种培养基，按重量份数计量包括有下述组份葡萄糖 18-24份酵母粉 5-8份黄豆粉 2-4份 KH2PO4 O. 2-0. 6 份 MgSO4 · H2O O. 25-0. 65 份腐殖土 15-23份干松针 40-55份琼脂14-22份水800-1500 份。
2.根据权利要求1所述的牛肝菌母种培养基，其特征在于其各组份的优选用量为 葡萄糖 19-22份酵母粉 6-7. 5份黄豆粉 2. 5-3. 5份 KH2PO4 O. 3-0. 53 份 MgSO4 · H2O O. 4-0. 6 份腐殖土18-21份干松针48-52份琼脂16-21份水900-1300 份。
3.根据权利要求2所述的牛肝菌母种培养基，其特征在于其各组份的最佳用量为 葡萄糖20份酵母粉6. 5份黄豆粉3份KH2PO4 O. 5 份 MgSO4 · H2O O. 45 份腐殖土 20份干松针 50份琼脂20份水1000份。
4.制备权利要求1-3之一所述的牛肝菌母种培养基的方法，按以下步骤操作 步骤一、原料称量，清洁容器设备；步骤二、将称量好的葡萄糖18-24份，酵母粉5-8份，黄豆粉2-4份、KH2PO4 O. 2-0. 6份，MgSO4 · H2O O. 25-0. 65份，放入容器中加入200-300份水，放置备用；步骤三、将称量好的腐殖土 15-23份放入烧杯中，加入200-250份水，煮沸浸提20分钟后过滤，将滤液加到容器中；步骤四、将干松针40-55份放入烧杯中，加入200-250份水，煮沸浸提15分钟，取浸提液加入到同一容器中；步骤五、将上述容器中的混合液加热1-3分钟，使温度达到90-100°C ;再加入14-22份琼脂，加热2-3分钟至琼脂完全溶解，加水定容，分装到试管中；步骤六、将试管中的物料在温度120°C、压力101. 33 KPa下，灭菌20-30分钟，即得牛肝菌母种培养基。
5.根据权利要求1-4之一所述的牛肝菌母种培养基及制备方法，其特征在于所用葡萄糖为医用葡萄糖。
全文摘要
本发明属于真菌培养基领域，尤其涉及一种牛肝菌母种培养基及其制备方法，按重量份数计量包括有下述组份葡萄糖18-24份，酵母粉5-8份，黄豆粉2-4份，KH2PO40.2-0.6份，MgSO4·H2O0.25-0.65份，腐殖土15-23份，干松针40-55份，琼脂14-26份，水800-1500份。本发明中牛肝菌菌丝生长速度快，在菌丝生长期间不会形成原基，同时为子实体的人工栽培提供了产量高的优良母种；菌丝14-16天可长满5-8厘米的试管斜面，牛肝菌产量比传统的母种培养基增长20-30%。
文档编号C05G1/00GK103011935SQ20121055766
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月20日 优先权日2012年12月20日
发明者张丹, 李付杰, 李伟 申请人:中国科学院、水利部成都山地灾害与环境研究所