专利名称：一种抑制根结线虫的微生物制剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于农作物虫害生物防治领域，涉及一种抑制根结线虫的微生物制剂及其制备方法与应用。
背景技术：
自从1932年首次报道我国南方番茄发生根结线虫病以来，全国十余个省区都有根结线虫病的发生和危害。近年来，我国保护地蔬菜发展迅速，温室连年种植同种蔬菜作物，致使许多老龄温室根结线虫病害日趋严重，已造成了蔬菜的大幅度减产，给菜农们带来了巨大地经济损失。一般每年造成20% — 25%的经济损失，严重的损失50% — 60%，甚至绝产。因此，对根结线虫的危害治理已成为一项非常重要的农业生产任务。目前市场上杀线虫的主要方法为化学杀线剂，如利用溴甲烷、有机磷化合物及抗生素等进行土壤消毒。传统的化学杀线剂不仅使用成本高，而且环境相容性差，破坏了土壤的结构。随着绿色消费观念的形成和迅速普及，迫切需要开发出安全、高效、低毒的新型生物合理杀线剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种抑制根结线虫的微生物制剂。本发明的目的还在于提供该抑制根结线虫的微生物制剂的制备方法。本发明的目的还在于提供该抑制根结线虫的微生物制剂在蔬菜、瓜果及烟草等农业种植方面的抑制根结线虫的应用效果。本发明的目的还在于使用该抑制根结线虫的微生物制剂能够提高化肥利用率，减少重茬病害和农药用量，提高农作物产品的安全性。本发明提供了一种抑制根结线虫的微生物制剂，由除虫链霉菌、淡紫拟青霉、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液混合甘油而成，四株菌互不拮抗，保存时间长。其中，所述各菌菌液的分量按体积百分比优选为除虫链霉菌菌液30—40%，淡紫拟青霉菌液10 — 20%，厚垣轮枝菌20— 30%，球形芽孢杆菌10 — 30%，甘油20% ;各菌液混合后的有效总活菌数大于25亿/毫升。本发明还提供了所述抑制根结线虫的微生物制剂的制备方法。该制备方法包括下述步骤
(I)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌、球形芽孢杆菌的原始菌种活化待
摇瓶培养。(2)分别将除虫链霉菌、 淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活化菌种摇瓶培养，获得摇瓶种子。(3)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子分别在发酵罐二级放大培养成待混合的菌液。(4)将灭菌后的甘油及发酵后待混合的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液按比例混合即得。
所述步骤(I)中除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌的活化都在培养皿中进行，培养温度分别为32摄氏度，35摄氏度和32摄氏度，培养基按照标准的真菌培养基配料，培养时间为I天；球形芽孢杆菌的活化在试管斜面上进行，培养温度为35摄氏度，培养基成分为标准的细菌培养基，培养时间为I天。所述步骤(2)中各菌种的摇瓶种子的培养参数和步骤(I)中的培养参数相同，只是将培养基改为液体培养基，置于在500mL的摇瓶中200转/分钟的转速培养，培养时间为2天。所述步骤(3)中除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子在发酵罐二级放大培养，指将摇瓶中的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子分别接种在500L的发酵罐中培养，四株菌的培养基成分都为含10%的土豆泥、3%的豆柏粉的水溶液。培养温度为步骤(I)所述各菌种的培养温度，发酵罐转速为150转/分钟，通气量系数都为0. 5，培养时间为27小时。本发明还提供了抑制根结线虫的微生物制剂在蔬菜、瓜果及烟草等农业种植方面的抑制根结线虫的应用方法，其特征在于种植蔬菜、瓜果及烟草前耕地时均匀泼洒，每次使用量5L/亩。本发明还提供了抑制根结线虫的微生物制剂在抑制蔬菜、瓜果及烟草根结线虫的应用效果。其特征在于所述抑制根结线虫微生物制剂含有大于25亿/毫升数量的包括除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活菌，施入土壤后通过活菌的不断生长繁殖活动，分泌适量的阿维菌素、除虫素、胞外酶及根系促生因子。通过微生物细胞分泌并通过底物抑制机制维持 适量浓度的阿维菌素和除虫素能够杀死土壤及根系中的线虫卵，使根结线虫的发病率降低85%以上，避免使用其他农药的过量使用；通过微生物细胞分泌的胞外酶和根系促生因子能够改善土壤的团粒结构，提高土壤的保水保肥能力同时促进根系的发达从而提高作物的肥料营养吸收提高作物的抗性，可以促进增产增收30%以上。
图1 :没用发明产品的芹菜根系与使用过发明产品的芹菜根系对比，使用过发明产品的根系发达，毛细根多，明显没有根结线虫导致的根结。
具体实施例方式抑制根结线虫的微生物制剂各微生物菌剂的组分和体积比为除虫链霉菌菌液30—40%,淡紫拟青霉菌液10 — 20%，厚垣轮枝菌20— 30%，球形芽孢杆菌10 — 30%，甘油20% ；
所述抑制根结线虫的微生物制剂按照下列工艺步骤生产
(I)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌、球形芽孢杆菌的原始菌种在微生物实验室活化待摇瓶培养。其中除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌的活化都在培养皿中进行，培养温度分别为32摄氏度，35摄氏度和32摄氏度，培养基按照标准的真菌培养基配料，培养时间为I天；球形芽孢杆菌的活化在试管斜面上进行，培养温度为35摄氏度，培养基成分为标准的细菌培养基，培养时间为I天。(2)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活化菌种摇瓶培养，获得摇瓶种子。 各菌种的摇瓶种子的培养参数和步骤(I)中的培养参数相同，只是将培养基改为液体培养基，放在500mL的摇瓶中200转/分钟的转速培养，培养时间为2天。(3)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子分别在发酵罐二级放大培养成待混合的菌液。将摇瓶中的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子分别接种在500L的发酵罐中培养，四株菌的培养基成分都为含10%的土豆泥、3%的豆柏粉的水溶液。培养温度为步骤(I)所述各菌种的培养温度，发酵罐转速为150转/分钟，通气量系数都为0. 5，培养时间为27小时。(4)将灭菌后的甘油及发酵后待混合的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液按比例混合即得。实施例
将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌和厚垣轮枝菌的原始菌种利用真菌培养基平板，球形芽孢杆菌的原始菌种利用细菌培养基斜面在实验室活化培养I天，将活化后各菌种分别在与各自的活化培养基成分相同的液体培养基中摇瓶培养2天，然后将摇瓶培养好的菌种分别在500L的发酵罐中以相同都是10%浓度土豆泥和3%豆柏粉的培养基培养27小时，最后将500L发酵罐培养好的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌和厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌以及灭菌好的甘油按30%、15%、25%、10%和20%的比例混合即的。实验例2012年3月中旬在湖北省通城县大坪乡和湖南省怀化市安江镇分别进行了该抑制根结线虫的微生物制剂的试验工作。示范面积130亩，示范过程中土壤条件、水肥及各项管理水平一致。示范田地均为多年种植芹菜大棚，根结线虫病害严重。该地块每年都被精心耕种、精心管护、投入大量资金购买化肥、农药用于增加土地肥力和灭治病虫害，但随着种植时间的 增长根结线虫越来越厉害，近几年出现大面积减产40%以上。在今年用此发明后，菜地发生了惊人的变化相对没用发明产品的地块根结线虫明显抑制，芹菜毛细根发达，产量在原来基础上提高了 50%以上。(如图1左边为没用该产品的芹菜根系长满根结线虫，毛细根少；右边为使用该发明的芹菜根系，基本没有线虫，根系发达，毛细根多。)
权利要求
1.一种抑制根结线虫的微生物制剂，其特征在于，由除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液和甘油按比例混合而成，四株菌在甘油的配合下互不拮抗，而且保存时间可超过2年。
2.根据权利要求1所述的抑制根结线虫的微生物制剂，其特征在于所述除虫链霉菌菌液30— 40%，淡紫拟青霉菌液10 — 20%，厚垣轮枝菌20— 30%，球形芽孢杆菌10 — 30%，甘油 20% ;各菌液混合后的有效总活菌数大于25亿/毫升。
3.—种权利要求所述抑制根结线虫的微生物制剂的生产方法，该方法包括下述步骤(1)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌、球形芽孢杆菌的原始菌种活化待摇瓶培养；(2)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活化菌种摇瓶培养，获得摇瓶种子；(3)分别将除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的摇瓶种子分别在发酵罐二级放大培养成待混合的菌液；(4)将灭菌后的甘油及发酵后待混合的除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液按比例混合即得。
4.权利要求1一3任一所述的抑制根结线虫的微生物制剂在蔬菜、瓜果及烟草的根结线虫抑制效果，其特征在于所述抑制根结线虫微生物制剂含有大于25亿/毫升数量的包括除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活菌，施入土壤后通过活菌的不断生长繁殖活动，分泌适量的阿维菌素、除虫素、胞外酶及根系促生因子；通过微生物细胞分泌并通过底物抑制机制维持的适量浓度的阿维菌素和除虫素能够杀死土壤及根系中的线虫卵，使根结线虫的发病率降低85%以上，避免使用其他农药的过量使用；通过微生物细胞分泌的胞外酶和根系促生因子能够改善土壤的团粒结构，提高土壤的保水保肥能力同时促进根系的发达从而提高作物的肥料营养吸收和提高作物的抗性，可以促进增产增收30% 以上。
全文摘要
本发明属于农作物虫害生物防治领域，提供了一种抑制根结线虫的微生物制剂，该制剂由除虫链霉菌、淡紫拟青霉、厚垣轮枝菌和球形芽孢杆菌菌液混合甘油而成，本发明还提供了该抑制根结线虫的微生物制剂的生产方法和应用效果，该微生物制剂含有大于25亿/毫升数量的包括除虫链霉菌、淡紫拟青霉菌、厚垣轮枝菌及球形芽孢杆菌的活菌，施入土壤后通过活菌不断生长繁殖活动产生的代谢物杀死根结线虫卵，改善土壤团粒结构、提高肥料利用率达到增产增收的作用。
文档编号A01N63/02GK103039534SQ20121058101
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月28日 优先权日2012年12月28日
发明者李峰 申请人:李峰