专利名称：用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法。
背景技术：
铁皮石斛又称黑节草，属兰科附生兰类，为多年生草本植物。铁皮石斛是石斛中的极品，因其表皮呈铁绿色而得名，是著名的观赏兼药用兰花；现有技术中，对铁皮石斛的培养阶段中，大多对外植体原球茎进行诱导培养、增殖、分化、生化培养，得到小苗，但是对后期的试管结实的研究比较少；铁皮石斛对生境条件要求苛刻，难结实，因此，对铁皮石斛结实的培养对提高植物结实机理研究具有非常重要的意义；而现有的铁皮石斛结实过程中，授粉后植株一般没有单独特殊的营养供应导致营养元素不充足，直接影响果实发育，造成果夹小，结实率低；
并且，通常情况下，培养基的制备过程中一般采用热灌装的方式，即白糖和琼脂粉均是经加热煮沸后倒入灌装机中灌装，该方法制备出的培养基营养元素流失严重，灌装不均匀，不便于结实的培养。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法，该培养基克服现有技术中铁皮石斛结实阶段营养不良导致结实率低、果夹小的问题，诱导铁皮石斛结实，提高铁皮石斛结实率。为了达到 上述发明目的，本发明采用的技术方案是:提供一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基，其特征在于:包括
改良 MS+ 白糖 25 40g/L+ 琼脂粉 5.5 10 g/L+NAA 0.2 0.5mg/L+ 土豆汁 30 50ml/L+红薯汁3(T50ml/L+活性炭粉0.5 0.8g/L ;其中，改良MS培养基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。本发明的用于提高铁皮石斛结实率的培养基，包括
改良 MS+ 白糖 25g/L+ 琼脂粉 5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 红薯汁 30ml/L+活性炭粉0.5g/L ;其中，改良MS培养基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中ΚΝ03、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。本发明的用于提高铁皮石斛结实率的培养基中，每升改良MS培养基中含有的组分及各组分的重量如下:NH4N03165mg、KNO3 5700mg、CaCl2.2H20 440mg、MgSO4.7H20370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8.6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6H20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2Η20 37.3mg、肌醇100 mg、烟酸0.5 mg、盐酸卩比P多醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg ;这种改良的MS培养基通过将NH4N03、KH2PO4和H3BO3的用量增加，使氮和磷的元素含量大大增加，更有利地促进果实的发育。
上述用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制方法包括以下步骤:
a、首先将白糖和琼脂粉进行预处理:将白糖和琼脂粉混合，再加入蒸馏水溶解，静置4飞小时；其中，混合后的白糖和琼脂粉与蒸馏水的重量比为1:10 ；
b、改良MS培养基母液的配制，包括母液A1、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中
母液Al的配制:称取255g KH2PO4置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A2的配制:称取2850g KNO3置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A3的配制:称取825g NH4N03、185g MgSO4.7H20置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液A4的配制:称取220mg CaCl2.2H20置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 B 的配制:分别称量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、0.25g Na2MoO4.2Η20、0.025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入烧杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液C的配制:分别称量100 g肌醇、0.5 g烟酸、0.5 g盐酸吡哆醇、0.1 g盐酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入烧杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 D 的配制:分别称量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分别加入 1500ml蒸馏水溶解，然后将两种溶液 混合，加热煮沸15分钟，并不断搅拌，充分螯合，再定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
C、分别称取土豆和红薯，洗净，削皮，切片，加入水煮沸20分钟，并不断搅拌，过滤取其汁液，分别得到土豆汁和红薯汁，冷却至40°C以下备用；
d、将预处理的白糖和琼脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5 ml母液B、C、D分别倒入灌装机中，再加入NAA、土豆汁、红薯汁及活性炭粉，加水定容，并搅拌，调节pH值至5.8，搅拌15min后灌装，在121°C、0.16MPa的条件下灭菌25分钟，冷凝后制得；其中，灌装时间为Ils,间歇时间为0.8s。本发明的用于提高铁皮石斛结实率的培养基通过采用特定含量的铁皮石斛改良MS培养基、NAA、土豆汁和红薯汁的共同协同作用，不仅为铁皮石斛的结实培养提供丰富的氮、磷等营养元素，成本低，并且显著激活铁皮石斛结实的关键因子，从而大大提高铁皮石斛的结实率；本发明提供的用于提高铁皮石斛结实率的培养基的制备方法通过将琼脂粉及白糖进行预处理及采用冷灌装方式，可大大减少微量元素、维生素及植物激素等营养元素的损失，并且制备的培养基硬度适中，颜色白中透亮，为铁皮石斛结实提供了关键的培养基条件；经该培养基培养后的铁皮石斛果夹直径可达0.8^1cm,结实率高达90%。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明进行详细的描述，但它们不是对本发明的进一步限制。实施例1
该用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配方为:改良MS+白糖25g/L+琼脂粉5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 红薯汁 30ml/L+ 活性炭粉 0.5g/L ；
其中，每升改良MS培养基中含有的组分及各组分的重量如下=NH4NO3 165mg、KN035700mg、CaCl2.2H20 440mg、MgSO4.7H20 370mg、KH2PO4 5IOmg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8.6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6Η20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2H20 37.3mg、肌醇 100 mg、烟酸 0.5mg、盐酸卩比卩多醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。上述用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制过程为:
(1)首先将白糖和琼脂粉进行预处理:将白糖和琼脂粉混合，再加入10倍重量的蒸馏水溶解，静置4小时；
(2)改良MS培养基母液的配制，包括母液Al、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中
母液Al的配制:称取255g KH2PO4置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A2的配制:称取2850g KNO3置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A3的配制:称取825g NH4NO3^ 185mg MgSO4.7H20置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液A4的配制:称取220mg CaCl2.2H20置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 B 的配制:分别称量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、0.25g Na2MoO4.2Η20、0. 025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入烧杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液C的配制:分别称量100 g肌醇、0.5 g烟酸、0.5 g盐酸吡哆醇、0.1 g盐酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入烧杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 D 的配制:分别称量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分别加入 1500ml蒸馏水中溶解，然后将两种溶液混合，加热煮沸15分钟，并不断搅拌，充分螯合，再定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
(3)分别称取土豆和红薯，洗净，削皮，切片，加入水煮沸20分钟，并不断搅拌，过滤取其汁液，分别得到土豆汁和红薯汁，冷却至40°C以下备用；
(4)将预处理的白糖和琼脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5ml母液B、C、D分别倒入灌装机中，再加入NAA、土豆汁、红薯汁及活性炭粉，加水定容，并搅拌，调节pH值至5.8，搅拌15min后进行冷灌装，在121°C、0.16MPa的条件下灭菌25分钟，冷凝后制得该培养基；其中，灌装时间为11s，间歇时间为0.8s。采用本发明的方法制备的培养基与白糖琼脂粉未预处理制备的培养基及采用热灌装的方式制备的培养基的性能对比如表1:
权利要求
1.一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基，其特征在于:包括改良 MS+ 白糖 25 40g/L+ 琼脂粉 5.5 10 g/L+NAA 0.2 0.5mg/L+ 土豆汁 30 50ml/L+红薯汁3(T50ml/L+活性炭粉0.5 0.8g/L ;其中，改良MS培养基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。
2.根据权利要求1所述的用于提高铁皮石斛结实率的培养基，其特征在于:包括 改良 MS+ 白糖 25g/L+ 琼脂粉 5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 红薯汁 30ml/L+活性炭粉0.5g/L ;其中，改良MS培养基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中ΚΝ03、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。
3.根据权利要求1或2所述的用于提高铁皮石斛结实率的培养基，其特征在于:每升改良MS培养基中含有的组分及各组分的重量如下=NH4NO3 165mg、KN03 5 7 00mg、CaCl2.2Η20440mg、MgSO4.7H20 370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8 .6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6H20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2H20 37.3mg、肌醇 100 mg、烟酸 0.5 mg、盐酸吡哆醇 0.5mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。
4.一种权利要求1所述的用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制方法，其特征在于，包括: a、首先将白糖和琼脂粉进行预处理:将白糖和琼脂粉混合，再加入蒸馏水溶解，静置4飞小时；其中，混合后的白糖和琼脂粉与蒸馏水的重量比为1:10 ； b、改良MS培养基母液的配制，包括母液A1、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中 母液Al的配制:称取255g KH2PO4置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中； 母液A2的配制:称取2850gKN03置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中； 母液A3的配制:称取825g NH4N03、185g MgSO4.7H20置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液A4的配制:称取220mg CaCl2.2H20置于烧杯中，加入蒸懼水搅拌溶解,定容至·5·000ml，保存到棕色磨合瓶中；母液 B 的配制:分别称量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、·0.25g Na2MoO4.2Η20、0.025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入烧杯中溶解，定容至·5000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液C的配制:分别称量100 g肌醇、0.5 g烟酸、0.5 g盐酸吡哆醇、0.1 g盐酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入烧杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；母液 D 的配制:分别称量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分别加入 1500ml蒸馏水溶解，然后将两种溶液混合，加热煮沸15分钟，并不断搅拌，充分螯合，再定容至·5000ml，保存到棕色磨合瓶中； C、分别称取土豆和红薯，洗净，削皮，切片，加水煮沸20分钟，并不断搅拌，过滤取其汁液，分别得到土豆汁和红薯汁，冷却至40°C以下备用； d、将预处理的白糖和琼脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5ml母液B、C、D分别倒入灌装机中，再加入NAA、土豆汁、红薯汁及活性炭粉，加水定容，并搅拌，调节pH值至5.8，搅拌15min后灌装，在121°C、0.16MPa的条件下灭菌25分钟，冷凝后制得；其中，灌装时间为Ils,间歇时间 为0.8s。
全文摘要
本发明公开了一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基，其特征在于包括改良MS+白糖25~40g/L+琼脂粉5.5~10g/L+NAA0.2~0.5mg/L+土豆汁30~50ml/L+红薯汁30~50ml/L+活性炭粉0.5~0.8g/L；其中，改良MS培养基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。该培养基通过采用特定含量的铁皮石斛改良MS培养基、NAA、土豆汁和红薯汁的共同协同作用，不仅为铁皮石斛的结实培养提供丰富的氮、磷等营养元素，成本低，并且显著激活铁皮石斛结实的关键因子，从而大大提高铁皮石斛的结实率。
文档编号A01H4/00GK103120123SQ20131004181
公开日2013年5月29日 申请日期2013年2月4日 优先权日2013年2月4日
发明者林忠全 申请人:四川深达生物科技有限公司