一种促进牡丹种苗生长的方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种促进牡丹种苗生长的方法及其应用。具体地，本发明提供了一种牡丹种苗处理液，所述处理液包括：牡丹种苗生长活性剂(赤霉素和/或6-苄基腺嘌呤)以及表面活性剂，还可以包括农学上可接受的可溶性钙盐。所述的生长活性剂能够打破牡丹种子上胚轴的休眠，提高牡丹种子发芽率/发芽势，加快牡丹种子生长进程，促进牡丹种子苗/组培苗成苗或成花；所述的表面活性剂能够使得活性物质充分进入细胞内；所述的可溶性钙盐与细胞的多种生理功能紧密相关。
【专利说明】一种促进牡丹种苗生长的方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物生物学领域，具体地，本发明涉及一种促进牡丹种苗生长的方法 及其应用。
【背景技术】
[0002] 牡丹（Paeonia suffruticosa)，另lj名富贵花、百两金、木巧药、鼠姑、鹿亜，洛阳花， 为芍药科芍药属木本植物，落叶灌木，素有"国色天香"、"花中之王"的美誉，为我国国花之 首选。牡丹不仅有较高的观赏价值，还具备很好的药用价值。早在汉代，药用植物典籍《神 农本草经》就有牡丹被驯化入药的记载。随着牡丹在园林绿化、药材储备中市场价值的增 大，催生了牡丹的经济市场。扩大繁殖系数，提高扩繁效率，开展牡丹种苗规模化生产，为市 场快速高效提供各级优质牡丹苗木，成为当今牡丹生产与研究的主要关注点。
[0003] 牡丹种子在自然条件下具有休眠特性，具体表现在胚根（下胚轴）和胚芽（上胚 轴）的休眠，尤以上胚轴休眠较为深沉。通常情况下，牡丹种子因越冬低温打破休眠而自然 萌发需两年时间，成苗开花需10年左右，时间跨度过长，生产效率过低，生产成本过高，严 重制约牡丹经济的发展。因此，快速高效破除上胚轴休眠特性，有效提高种子的发芽率及发 芽势，缩短牡丹种子成苗成花时间跨度，对日益升温的牡丹经济来说，意义重大。
[0004] 然而目前本领域尚缺乏有效的破除牡丹种子上胚轴休眠，促进牡丹种苗生长的有 效方法，因此迫切需要开发相应的技术方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是提供一种破除牡丹种子上胚轴休眠，促进牡丹种苗生长的方 法。
[0006] 本发明的另一目的就是提供一种破除牡丹种子上胚轴休眠，促进牡丹种苗生长的 处理液。
[0007] 本发明的第一方面，提供一种牡丹种苗处理液，包括：
[0008] 有效量的牡丹种苗生长活性剂和表面活性剂；并且所述的活性剂为赤霉素（GA3)， 和/或6-苄基腺嘌呤（6-BA)。
[0009] 在另一优选例中，所述的处理液还包括：农学上可接受的可溶性钙盐。
[0010] 在另一优选例中，在所述处理液中，赤霉素（GA3)的含量为5-10000mg/L。
[0011] 在另一优选例中，在所述处理液中，赤霉素（GA3)的含量为10-10000mg/L，较佳地， 在所述处理液中，赤霉素（GA 3)的含量为100-1000mg/L。
[0012] 在另一优选例中，所述的在所述处理液中，赤霉素（GA3)的含量为5-1000mg/L。
[0013] 在另一优选例中，在所述处理液中，6-苄基腺嘌呤（6-BA)的含量为0. l-100mg/L。
[0014] 在另一优选例中，在所述处理液中，6-苄基腺嘌呤（6-BA)的含量为0. 2-10mg/L， 较佳的，为〇· 2-5mg/L，更佳地，为0· 5-2mg/L。
[0015] 在另一优选例中，在所述处理液中，6-苄基腺嘌呤（6-BA)的含量为0. 5-10mg/L。
[0016] 在另一优选例中，所述的表面活性剂任选自下组或其组合：
[0017] 阴离子表面活性剂(优选硬脂酸或十二烷基苯磺酸钠）；
[0018] 阳离子表面活性剂(优选季铵化物）；
[0019] 两性离子表面活性剂(优选卵磷脂、氨基酸型、或甜菜碱）；
[0020] 非离子表面活性剂(优选脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐温）；
[0021] 在另一优选例中，所述的表面活性剂为吐温-20或吐温-80。
[0022] 在另一优选例中，在所述处理液中，表面活性剂含量为1-1000 μ 1/L，较佳地，为 1-500 μ 1/L，更佳地，为 1-150 μ 1/L。
[0023] 在另一优选例中，在所述处理液中，表面活性剂为吐温-20,且其含量为 1-1000 μ 1/L。
[0024] 在另一优选例中，表面活性剂吐温-20的含量为1-100 μ 1/L，较佳地为 10-100 μ1/L。
[0025] 在另一优选例中，所述的农学上可接受的可溶性钙盐选自下组：Ca (N03)2、Ca (Cl) 2、Ca (H2P04) 2。
[0026] 在另一优选例中，在所述处理液中，所述的农学上可接受的可溶性钙盐的含量为 0· 5_50mg/L (优选 l_5mg/L)。
[0027] 在另一优选例中，所述的处理液为任选自（a) - (c)的处理液：
[0028] (a) 1000mg/L 赤霉素（GA3)，100 μ 1/L 吐温-20 ;
[0029] (b) 100mg/L 赤霉素（GA3)，lmg/L6-苄基腺嘌呤（6-BA)，5mg/L Ca(N03)2,10 μ 1/L 吐温-20 ;
[0030] (c)10mg/L 赤霉素（GA3)，0.5mg/L6-苄基腺嘌呤（6-BA)，lmg/L Ca(N03)2、2y 1/L 吐温-20。
[0031] 本发明的第二方面，提供第一方面所述处理液的用途，所述的处理液具有任选自 下组的用途或其组合：
[0032] (1)打破牡丹种子上胚轴的休眠；
[0033] (2)提高牡丹种子发芽率/发芽势；
[0034] (3)加快牡丹种子生长进程；
[0035] (4)促进牡丹种子苗/组培苗成苗；或
[0036] (5)促进牡丹种子苗/组培苗成花。
[0037] 本发明的第三方面，提供一种促进牡丹种苗生长的方法，包括步骤：用第一方面所 述的处理液处理牡丹种子或牡丹种苗。
[0038] 在另一优选例中，所述方法包括采用第一方面所述的处理液处理牡丹种子培养 物，所述培养物为河沙、菜园土、WPM基本培养基。
[0039] 在另一优选例中，所述方法包括步骤：
[0040] (1)用处理液处理牡丹种子，并且所述的处理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐温-20 ;
[0041] (2)将步骤（1)处理获得的种子埋于沙中，并且所述的沙经包括100mg/L的赤霉素 (GA 3)、lmg/L 的 6-苄基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L 的 Ca (N03) 2、和 10 μ 1/L 的吐温-20 的处理 液处理，使种子萌发，获得萌发的叶片；和
[0042] (3)用包括 lOmg/L 赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-苄基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (N03) 2、和2 μ 1/L吐温-20的处理液处理步骤（2)获得的萌发的叶片，从而获得具有主茎的牡丹 植株。
[0043] 在另一优选例中，所述方法包括步骤：
[0044] (a)用处理液处理牡丹种子，并且所述的处理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐温-20 ;
[0045] (b)去除步骤（a)获得的种子的种壳，并且用包括100mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L 的6-苄基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca (N03) 2、和10 μ 1/L的吐温-20的处理液处理，获得 处理后的带胚乳的种子；
[0046] (c)从步骤（b)的带胚乳的种子中获得种胚，接种于培养基中，获得具有主茎的牡 丹植株。
[0047] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0048] 下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的 本发明范围。
[0049] 图1显示加速牡丹种子苗生产进程结果；图1A (对照）：自然萌发25月的牡丹种 苗，仅具叶柄和叶片，上胚轴仍处于休眠状态；图1B :处理后萌发6月的牡丹种苗，具叶柄、 叶片和明显的主茎，上胚轴休眠被打破。
[0050] 图2显示加速牡丹组培苗生产进程结果；图2A (对照）：离体培养20周的牡丹种 胚，仅具真叶，上胚轴仍处于休眠状态；图2B :半量处理后离体培养6周的牡丹芽苗，具真 叶、叶柄、叶片和明显的主茎，上胚轴休眠被打破。图2C :全量处理后离体培养6周的牡丹 芽苗，具真叶、叶柄、叶片和明显的主茎，上胚轴休眠被打破。
【具体实施方式】
[0051] 本发明人经过广泛而深入的研究，首次获得一种破除牡丹种子上胚轴休眠，促进 牡丹种苗生长的处理液，以及促进牡丹种苗生长的方法。具体地，本发明的所述处理液包 括：牡丹种苗生长活性剂(赤霉素和/或6-苄基腺嘌呤）以及表面活性剂，还可以包括农学 上可接受的可溶性钙盐。所述的生长活性剂能够打破牡丹种子上胚轴的休眠，提高牡丹种 子发芽率/发芽势，加快牡丹种子生长进程，促进牡丹种子苗/组培苗成苗或成花；所述的 表面活性剂能够使得活性物质充分进入细胞内；所述的可溶性钙盐与细胞的多种生理功能 紧密相关。在此基础上完成了本发明。
[0052] 术语
[0053] 牡丹
[0054] 如本文所用，术语"牡丹"是指一种属于芍药科（Paeoniaceae)，芍药属 (Paeonia)，牡丹种（P. suffruticosa)的植物。
[0055] 本发明所述的牡丹包括(但不限于）：芍药。
[0056] 牡丹种苗
[0057] 如本文所用，术语"牡丹种苗"包括：牡丹种子、牡丹苗、牡丹种胚、出苗后含明显主 茎的幼苗。
[0058] 如本文所用，术语"牡丹种子"包括(但不限于）:牡丹新鲜种子，经低温储存的牡丹 陈种子，包括种壳或去除种壳的牡丹种子。
[0059] 如本文所用，术语"牡丹苗"包括(但不限于）：具有叶柄和叶片的牡丹苗。
[0060] 牡丹种苗处理液
[0061] 本发明提供了一种牡丹种苗处理液，主要包括：（1)有效量的牡丹种苗生长活性 齐U，并且所述的活性剂为赤霉素（GA3)，和/或6-苄基腺嘌呤（6-BA);以及（2)有效量的表 面活性剂；优选地，所述的处理液还可以包括：农学上可接受的可溶性钙盐。
[0062] 如本文所用，术语"有效量"或"有效剂量"是指可对牡丹种苗产生功能或活性的 且可被牡丹种苗所接受的量。
[0063] 本发明的所述处理液可以用于：（1)打破牡丹种子上胚轴的休眠；（2)提高牡丹种 子发芽率/发芽势；（3)加快牡丹种子生长进程；(4)促进牡丹种子苗/组培苗成苗；或（5) 促进牡丹种子苗/组培苗成花。
[0064] 赤霉素
[0065] 如本文所用，术语"赤霉素"可以与"GA"互换使用。
[0066] 赤霉素是一类广泛存在的植物激素，化学结构比较复杂，属于二萜类酸，由四环骨 架衍生而得。赤霉素都含有赤霉素烷骨架。在高等植物中赤霉素的最近前体一般认为是贝 壳杉烯。赤霉素的基本结构是赤霉素烷，有4个环。在赤霉素烷上，由于双键、羟基数目和 位置不同，形成了各种赤霉素，已知的赤霉素类至少有38种。不同的赤霉素生物活性不同， 赤霉酸（GA3)的活性最高。活性高的化合物必须有一个赤霉环系统(环AB⑶)，在C-7上有 羧基，在A环上有一个内酯环。
[0067] 赤霉素目前广泛应用于农业生产，如提高葡萄产量，或在杂交水稻制种中调节花 期以使父母本花期相遇等；对水稻、棉花、蔬菜、瓜果、绿肥等有显著的增产效果。
[0068] 本领域的普通技术人员可以使用常规方法获得各种赤霉素，如市场购买或用常规 方法制取。一种常规制取赤霉素的方法为用甲醇提取。不同的赤霉素可以用各种色谱分析 技术分开。
[0069] 在本发明的处理液中，赤霉素（GA3)的含量为10-10000mg/L，优选100-1000mg/L。
[0070] 6-苄基腺嘌呤
[0071] 如本文所用，术语"6-苄基腺嘌呤"、"6-苄腺嘌呤"、"6-苯甲基腺嘌呤"、"6-BA" 等均可以与互换使用。
[0072] 6-苄基腺嘌呤是一种广谱性植物生长调节剂，可促进植物细胞生长，抑制植物叶 绿素、核酸、蛋白质的分解，提高氨基酸的含量，延缓叶片衰老，将氨基酸、生长素、无机盐等 向处理部位调运等多种效能，广泛用在农业、果树和园艺作物的从发芽到收获的各个阶段。
[0073] 本领域的普通技术人员可以使用常规方法获得6-苄基腺嘌呤，如市场购买或用 常规方法制取。
[0074] 在本发明的处理液中，优选6-苄基腺嘌呤的含量为0. l-100mg/L ;优选0. 5-10mg/ L〇
[0075] 表面活性剂
[0076] 本发明的处理液还包括表面活性剂。表面活性剂是一类即使在很低浓度时也能显 著降低表(界）面张力的物质。目前一般认为只要在较低浓度下能显著改变表(界）面性质 或与此相关、由此派生的性质的物质，都可以划归表面活性剂范畴。无论何种表面活性剂， 其分子结构均由两部分构成：分子的一端为非极亲油的疏水基(亲油基）；分子的另一端为 极性亲水的亲水基(疏油基或亲水头)。两类结构与性能截然相反的分子碎片或基团分处于 同一分子的两端并以化学键相连接，形成了一种不对称的、极性的结构，因而赋予了该类特 殊分子既亲水、又亲油，便又不是整体亲水或亲油的特性。表面活性剂的这种特有结构通常 称之为"双亲结构"（amphiphilic structure),表面活性剂分子因而也常被称作"双亲分 子"。
[0077] 在本发明中，所述的表明活性剂可以任选自下组或其组合：
[0078] 阴离子表面活性剂(优选硬脂酸或十二烷基苯磺酸钠）；
[0079] 阳离子表面活性剂(优选季铵化物）；
[0080] 两性离子表面活性剂(优选卵磷脂、氨基酸型、或甜菜碱）；
[0081] 非离子表面活性剂(优选脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐温）；
[0082] 在另一优选例中，所述的表面活性剂为吐温-20或吐温-80 ;其含量为1-1000 μ 1/ L ;优选为 10-100 μ 1/L。
[0083] 可溶性钙盐
[0084] 在本发明的处理液中还包括农学上可接受的可溶性钙盐，所述的钙盐选自下组： Ca (N03)2、CaCl2、Ca(H2P0 4)2 等。
[0085] 所述的农学上可接受的可溶性钙盐的含量为0.5-50mg/L (优选l-5mg/L)。
[0086] 如本文所用，"农学上可接受的"的成分是适用于牡丹种苗而无过度不良副反应 的，即具有合理的效益/风险比的物质。
[0087] 应用
[0088] 本发明提供了一种促进牡丹种苗生长的方法，包括步骤：用本发明所述的处理液 处理牡丹种子或牡丹种苗。
[0089] 在本发明的一个优选例中，所述方法具体地点，包括步骤：（1)用处理液处理牡丹 种子，所述的处理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA 3)，和100 μ 1/L的吐温-20 ; (2)将步骤（1) 处理获得的种子埋于沙中，并且所述的沙经包括l〇〇mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的6-苄基 腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca(N0 3)2、和10μ 1/L的吐温-20的处理液处理，使种子萌发，获得 萌发的叶片；和⑶用包括l〇mg/L赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-苄基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (N03) 2、和2 μ 1/L吐温-20的处理液处理步骤⑵获得的萌发的叶片，从而获得具有主茎 的牡丹植株。
[0090] 在本发明的另一优选例中，所述的方法包括步骤：(a)用处理液处理牡丹种子，并 且所述的处理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA 3)，和100 μ 1/L的吐温-20 ; (b)去除步骤（a) 获得的种子的种壳，并且用包括l〇〇mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的6-苄基腺嘌呤（6-BA)、 5mg/L的Ca(N0 3)2、和10 μ 1/L的吐温-20的处理液处理，获得处理后的带胚乳的种子；（c) 从步骤（b)的带胚乳的种子中获得种胚，接种于培养基中，获得具有主茎的牡丹植株。
[0091] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示 的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。
[0092] 本发明的主要优点如下：
[0093] (1)以牡丹种子为起始材料，经过本发明处理液的一系列处理，能快速高效打破牡 丹种子休眠，大大缩短牡丹种子苗和组培苗成苗成花进程；
[0094] (2)本发明处理所得牡丹植株与自然萌发植株的表型一致性高，遗传稳定性好，组 培苗生产进程加速使外源目的基因的有效性状导入牡丹这一珍贵物种成为可能；
[0095] (3)本发明方法重复三次试验，累计获得牡丹种子苗185株，组培苗35株，两种来 源的植株表型与同种亲本实生苗表型一致性高。
[0096] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件如 Sambrook 等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和 份数按重量计算。
[0097] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0098] 实施例1
[0099] 加速牡丹种子苗生产进程
[0100] 1.选取饱满的牡丹种子，用处理液I【l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA3)+100ul/L 土温 (T20)溶液】浸泡24h，弃液，留种子，温水洗3次，风干，置于4°C或_20°C冰箱以备用。
[0101] 2.取干净的河沙若干，121°C高温灭菌lh，冷却至常温，用处理液II【100mg/L GA 3+lmg/L6-BA+5mg/L Ca (N03) 2+10ul/L T20】浸透河沙，将步骤（1)的牡丹种子埋藏于上述 湿沙中，黑暗条件下4°C储藏2个月，现根，始萌发。
[0102] 3.将步骤（2)已发根的牡丹种子浅浅地播种于泥炭、菜园土和珍珠岩（3 : 6 : 1) 的基质中，在28±2°C、自然光照的大棚中生长1个月，始现叶柄和叶片。将步骤（1)的牡丹 种子埋藏于上述湿沙中，黑暗条件下4°C储藏2个月，现根，始萌发。
[0103] 4.用处理液III【10mg/L GA3+0. 5mg/L6-BA+lmg/L Ca(N03)2+2ul/L T20】喷洒步骤 (3)获得的小苗叶片，7天/次，3个月时，长成具明显主茎的牡丹小植株，见图1B，图1A为 对照。
[0104] 5.将下胚轴切成2-4毫米的切断以备用，已发根的牡丹种子浅浅地播种于泥炭、 菜园土和珍珠岩（3 : 6 : 1)的基质中，在28±2°C、自然光照的大棚中生长1个月，始现叶 柄和叶片。
[0105] 若仅使用6-BA处理，效果差，而本实施例结果表明上述配方具有活体打破牡丹种 子休眠的功效。结果表明自然状态下需2年才能成苗(见明显主茎）的牡丹种子，在本实施 例的人工萌发处理条件下短时间内即可成苗(见明显主茎)。相比，具有活体打破牡丹种子 休眠的功效。
[0106] 实施例2
[0107] 加速牡丹组培苗生产进程
[0108] 1.选取饱满的牡丹种子，用处理液I【1000mg/L的赤霉素（GA3)+100ul/L 土温 (T20)溶液】浸泡24h，弃液，留种子，温水洗3次，风干，置于4°C或_20°C冰箱以备用。
[0109] 2.剥除步骤（1)获得的牡丹种子的种壳，用处理液II【100mg/L GA3+lmg/ L6-BA+5mg/L Ca(N03)2+10ul/L T20】浸泡24h，弃液，收集带胚乳的种子，滤纸吸干表面水 分。
[0110] 3.将步骤（2)获得的带胚乳种子用自来水洗净，吸干表面水珠，在超净工作台上 用70%的乙醇消毒30-90秒,0. 1%的升萊浸泡5-8分钟，无菌水冲洗5-8次,无菌滤纸吸干 无菌材料表面水珠，剥出种胚，接种于WPM基本培养基(木本植物离体培养的通用培养基)添 加5mg/L GA3+0. 5mg/L BA+lmg/LCa(N03)2的培养基中，在光照、25±2°C的培养条件下，2星 期见心叶，4星期见明显主茎，见图2B和图2C，图2B为半量处理效果，图2C为全量处理效 果，图2A为对照，接种于WPM基本培养基。
[0111] 4.将步骤（3)获得的无菌芽苗转接至WPM基本培养基附件2mg/L脱落酸ABA+lmg/ L多效唑的培养基中，培养2星期，即可转入生根培养，见图2C。
[0112] 结果表明：上述配方具有离体打破牡丹种子休眠的功效。自然状态下需2年才能 成苗(见明显主茎）的牡丹种子，在本实施例的离体培养及处理条件下仅需1个月即可成芽 苗(见明显主茎)，经生根诱导，可在3个月内获得具明显主茎的土壤移栽苗。
[0113] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
【权利要求】
1. 一种牡丹种苗处理液，其特征在于，所述的处理液包括： 有效量的牡丹种苗生长活性剂和表面活性剂；并且所述的活性剂为赤霉素（ga3)，和/ 或6-苄基腺嘌呤（6-BA)。
2. 如权利要求1所述的处理液，其特征在于，所述的处理液还包括：农学上可接受的可 溶性钙盐。
3. 如权利要求1-2任一所述的处理液，其特征在于，在所述处理液中，赤霉素（GA3)的 含量为 5-10000mg/L。
4. 如权利要求1-2任一所述的处理液，其特征在于，在所述处理液中，6-苄基腺嘌呤 (6-BA)的含量为 0· l-100mg/L。
5. 如权利要求1-2任一所述的处理液，其特征在于，所述的表面活性剂任选自下组或 其组合： 阴离子表面活性剂(优选硬脂酸或十二烷基苯磺酸钠）； 阳离子表面活性剂(优选季铵化物）； 两性离子表面活性剂(优选卵磷脂、氨基酸型、或甜菜碱）； 非离子表面活性剂(优选脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐温)。
6. 如权利要求2所述的处理液，其特征在于，所述的农学上可接受的可溶性钙盐选自 下组：Ca (N03)2、Ca (Cl)2、Ca(H2P04)2。
7. 权利要求1所述处理液的用途，其特征在于，所述的处理液具有任选自下组的用途 或其组合： (1) 打破牡丹种子上胚轴的休眠； (2) 提高牡丹种子发芽率/发芽势； (3) 加快牡丹种子生长进程； (4) 促进牡丹种子苗/组培苗成苗；或 (5) 促进牡丹种子苗/组培苗成花。
8. -种促进牡丹种苗生长的方法，其特征在于，包括步骤：用权利要求1所述的处理液 处理牡丹种子或牡丹种苗。
9. 如权利要求8所述的方法，其特征在于，包括步骤： (1) 用处理液处理牡丹种子，并且所述的处理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐温-20 ; (2) 将步骤（1)处理获得的种子埋于沙中，并且所述的沙经包括100mg/L的赤霉素 (GA3)、lmg/L 的 6-苄基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L 的 Ca (N03) 2、和 10 μ 1/L 的吐温-20 的处理 液处理，使种子萌发，获得萌发的叶片；和 ⑶用包括 l〇mg/L 赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-苄基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (Ν03)2、和 2μ 1/L吐温-20的处理液处理步骤（2)获得的萌发的叶片，从而获得具有主茎的牡丹植株。
10. 如权利要求8所述的方法，其特征在于，包括步骤： (a) 用处理液处理牡丹种子，并且所述的处理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐温-20 ; (b) 去除步骤（a)获得的种子的种壳，并且用包括100mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的 6_苄基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca (N03)2、和10 μ 1/L的吐温-20的处理液处理，获得处理 后的带胚乳的种子； (C)从步骤（b)的带胚乳的种子中获得种胚，接种于培养基中，获得具有主茎的牡丹植 株。
【文档编号】A01P21/00GK104206417SQ201310221153
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年6月4日 优先权日:2013年6月4日
【发明者】朱木兰, 奉树成, 胡永红, 秦俊 申请人:中国科学院上海生命科学研究院