一种北虫草的栽培方法
【专利摘要】本发明属于真菌栽培的【技术领域】，为了使北虫草中虫草素含量提高并稳定在1.7%-2.5%，提供了一种北虫草的栽培方法。通过北虫草菌种的制备、液体北虫草菌种的制备、北虫草的栽培等步骤，将北虫草栽培于用小麦、燕麦、稻谷为培养基主料，以蛋白胨、蚕蛹粉、蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾为辅料配成溶液制备而成的栽培基中，经过一定的培养条件培养，得到北虫草子实体。采用本发明所述方法收获的北虫草子实体虫草素含量较高，达1.7%-2.5%，并且稳定在2%左右；本发明所述方法对北虫草菌种的选择具有随意性，可以选择任意北虫草菌种的1-2代母种，无论是自己分离获得或异地购买所得，或者是保藏菌种，均可投入使用。
【专利说明】一种北虫草的栽培方法
【技术领域】
[0001]本发明属于真菌栽培的【技术领域】，具体涉及一种北虫草的栽培方法。
【背景技术】
[0002]北虫草是北冬虫草的简称，也叫蛹虫草或蛹草，俗名不老草，是虫、菌结合的药用真菌，现代珍稀中草药，北冬虫夏草属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。它主要生长在我国的北方地区。北虫草不仅含有丰富的蛋白质和氨基酸，而且含有30多种人体所需的微量元素，是上等的滋补佳品。
[0003]北虫草中所含有的虫草素是重要的活性成份，对白血病具有特殊的医疗效果，世界医学界对其高度重视，从蛹虫草中提取虫草素是研究的重要课题。但如何提高蛹虫草中虫草素的含量，国内外诸多专家正在探索，目前蛹虫草栽培技术虽已成熟，但虫草素含量均为0.013%~0.05%，最高含量为0.1%~1.7%，尚未发现有更高的突破，即使有突破虫草素含量也很不稳定，不能投入产业化栽培，天然北虫草含虫草素为0.2%，但产量极其有限。能把虫草素含量稳定在1.7%~2.5%的栽培方法未见报导。
【发明内容】
[0004]本发明为了使北虫草中虫草素含量提高并稳定在1.7%-2.5%，提供了一种北虫草的栽培方法。
[0005]本发明是由如下技术方案实现的:一种北虫草的栽培方法，包含以下步骤: (O固体北虫草菌种的制备:A、加富固体培养基配方:去皮马铃薯150-200g、蔗糖15-20g、蛋白胨 l-5g、鸡蛋7-10g、琼脂 18-20g、维生素B10.2-0.3g、硫酸镁0.2g、水 1000ml ；B、制备方法:根据需要配制的数量按比例分别称取上述配方原料，去皮马铃薯切块后煮沸25-35min，过滤，上清液中加入维生素B、蔗糖、硫酸镁、鸡蛋全液、蛋白胨和琼脂，加水定容至IL分装后121°C灭菌20-25min ； C、接种:将北虫草的母种接种于加富固体培养基的平板或斜面上，20°C ± 1°C，避光培养7-10天，待菌丝长满平板或斜面并且浓白微黄时取出备用；
(2)液体北虫草菌种的制备:A、液体培养基的配方:去皮马铃薯150-200g、蔗糖15-20g、鸡蛋3g-5g、维生素B10.2-0.3g、洋葱10_15g、胡萝卜5_10g、蛋白胨l_5g、鲜北虫草子实体10-12g、水1000ml ;B、制备方法:鲜北虫草子实体粉碎，去皮马铃薯、洋葱、胡萝卜切块，处理好的四种原料同时煮沸25-35min，过滤，滤液中加入蔗糖、蛋白胨、维生素B和鸡蛋全液煮沸，加水定容至1L，分装后121°C灭菌20-25min ;C、接种将备用的固体北虫草菌种接入液体培养基表面，20°C ± I°C静置避光培养48h，100-120rpm, 18-20°C，湿度为60%_65%的摇床培养5-7，当液体培养基中布满菌丝后取出置于4°C冰箱中备用；
(3)北虫草的栽培:A、栽培基的配方:主料为小麦、燕麦、稻谷各1/3混合,辅料为:蛋白胨55-60g，蚕蛹粉7-10g，蔗糖8-10g，硫酸镁0.4g，磷酸二氢钾0.4g，水1000ml ;B、制备方法:主料的各原料混合，用水洗净，晾干水分，分装于500ml容积的培养瓶中，每瓶30g;辅料溶液的制备:取蛋白胨、蚕蛹粉、蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾加入水煮沸使其溶解，过滤后滤液加水定容至IL备用；每个装有主料的培养瓶中加入辅料溶液42ml混匀后聚丙烯薄膜封口，121°C灭菌1-1.5h，冷却后，置于无菌室中备用；C、接种、培养:将4°C冰箱中保存的液体菌种置于无菌室恢复4-5h,每个培养瓶中接种5-8ml恢复的液体菌种,封口后放入温度为18-20°C、湿度为60-65%的培养室中避光培养30-35天，当菌丝长透培养基后再延长12h进入催芽阶段；D、催芽:培养室的控制条件为:23-24°C、2001x白光光照12h，15_16°C、暗室12h，光照与暗室温差为8-9°C，湿度为80%-95% ;以白光光照12h暗室12h为一天如此交替，每天白光光照前和暗室培养前分别通风I次，每次30min ;当子实体长出0.5-lcm完成催芽进入催草阶段；E、催草:先在封口的塑料膜上扎3-5个1.5mm的孔作为透气孔；催草阶段培养室的控制条件为:光照温度23-24°C，暗培养温度为18-20°C，湿度为85%_95%，每天白光光照前和暗室培养前分别通风I次，每次30min，光照为白光光照:5001x照射5h，15001x照射3h，35001x照射2h，50001x照射lh，60001x照射lh，依次交替进行培养10-15天，当子实体顶端长出毛刺，形成子囊孢子时催草培养完成；F、紫外线照射:催草培养完成后去掉培养瓶上的塑料膜，用垂直距离为30-40cm的30W紫外光灯照射90s，然后以2001x的白光每日照射12h，培养1-3天；G、收获:紫外光照射培养1-3天后，观察到子实体上长出毛刺，收割子实体，60°C烘干。
[0006]所述北虫草菌种为北虫草I~2代母种。
[0007]采用本发明所述方法收获的北虫草子实体虫草素含量较高，达1.7%-2.5%，并且稳定在2%左右；本发明所述方法对北虫草菌种的选择具有随意性，可以选择任意北虫草菌种的1-2代母种，无论是自己分离获得或异地购买所得，或者是保藏菌种，均可投入使用。 【具体实施方式】
[0008]下面结合实施例对本发明做进一步阐明，仅用来说明本发明而不限制本发明的范围。
[0009]实施例1:一种北虫草的栽培方法，所用菌种为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC N05577的一代母种。
[0010]包含以下步骤:
(O固体北虫草菌种的制备:A、加富固体培养基配方:去皮马铃薯150_200g、蔗糖15-20g、蛋白胨 l-5g、鸡蛋7-10g、琼脂 18-20g、维生素B10.2-0.3g、硫酸镁0.2g、水 1000ml ；B、制备方法:根据需要配制的数量按比例分别称取上述配方原料，去皮马铃薯切块后煮沸25-35min，过滤，上清液中加入维生素B、蔗糖、蛋白胨、硫酸镁、鸡蛋全液和琼脂，加水定容至IL分装后121°C灭菌20-25min ； C、接种:将北虫草母种接种于加富固体培养基的平板或斜面上，20°C 土TC，避光培养7-10天，待菌丝长满平板或斜面并且浓白微黄时取出备用；
(2)液体北虫草菌种的制备:A、液体培养基的配方:去皮马铃薯150-200g、蔗糖15-20g、鸡蛋3g-5g、维生素B10.2-0.3g、洋葱10_15g、胡萝卜5_10g、蛋白胨l_5g、鲜北虫草子实体10-12g、水1000ml ;B、制备方法:鲜北虫草子实体粉碎，去皮马铃薯、洋葱、胡萝卜切块,处理好的四种原料同时煮沸25-35min，过滤，滤液中加入蔗糖、蛋白胨、维生素B和鸡蛋全液煮沸，加水定容至1L，分装后121°C灭菌20-25min ;C、接种将备用的固体北虫草菌种接入液体培养基表面，20°C ± I °C静置避光培养48h，待菌种散发孢子时，100-120rpm,18-20°C，湿度为60%-65%的摇床培养5_7，当液体培养基中布满菌丝后取出置于4°C冰箱中备用;
(3)北虫草的栽培:A、栽培基的配方:主料为小麦、燕麦、稻谷各90g，共270g;辅料为:蛋白胨55-60g，蚕蛹粉7-10g，蔗糖8-10g，硫酸镁0.4g，磷酸二氢钾0.4g，水1000ml ；B、制备方法:主料各原料混合，用水洗净，晾干水分，分装于9个500ml容积的培养瓶中，每瓶30g，每3瓶一组，分为3组；辅料溶液的制备:取蛋白胨、蚕蛹粉、蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾加入水煮沸使其溶解，过滤后滤液加水定容至IL备用；每个培养瓶中加入辅料溶液42ml混勾后聚丙紐薄I旲封口，121 C灭囷1_1.5h,冷却后,直于无囷室中备用；C、接种、培养:将4°C冰箱中保存的液体菌种静置于无菌室恢复4-5h，每个培养瓶中接种5-8ml恢复的液体菌种，封口，3组培养瓶放入温度为18-20°C、湿度为60-65%的培养室的不同层架上避光培养30-35天，当菌丝长透培养基后再延长12h进入催芽阶段；D、催芽:培养室的控制条件为:23-24°C、2001x白光光照12h，15_16°C、暗室12h，光照与暗室温差为8_9°C，湿度为80%-95% ;以白光光照12h暗室12h为一天如此交替，每天白光光照前和暗室培养前分别通风I次，每次30min ;当子实体长出0.5-lcm完成催芽进入催草阶段；E、催草:先在封口的塑料膜上扎3-5个1.5mm的孔作为透气孔；催草阶段培养室的控制条件为:光照温度23-240C，暗培养温度为18-20°C，湿度为85%_95%，每天白光光照前和暗室培养前分别通风I次，每次30min，光照为白光光照:5001x照射5h，15001x照射3h，35001x照射2h，50001x照射lh，60001x照射lh，依次交替进行培养10-15天，当子实体长至顶端长出毛刺，形成子囊孢子时催草培养完成；F、紫外线照射:催草培养完成后去掉培养瓶上的塑料膜，用垂直距离为30-40cm的30W紫外光灯照射90s，然后以2001x的白光每日照射12h，培养1_3天；G、收获:紫外光照射培养1-3天后，观察到子实体上长出毛刺，这时孢子正在生长，但未散发，收割子实体，60°C烘干 。
[0011]以上三组培养瓶中所收取的干品共20g，检测结果见表1:
表1
【权利要求】
1.一种北虫草的栽培方法，其特征在于:包含以下步骤: (1)固体北虫草菌种的制备:A、加富固体培养基配方:去皮马铃薯150-200g、蔗糖15-20g、蛋白胨 l-5g、鸡蛋7-10g、琼脂 18-20g、维生素B10.2-0.3g、硫酸镁0.2g、水 1000ml ；B、制备方法:根据需要配制的数量按比例分别称取上述配方原料，去皮马铃薯切块后煮沸25-35min，过滤，上清液中加入维生素B、蔗糖、硫酸镁、鸡蛋全液、蛋白胨和琼脂，加水定容至IL分装后121°C灭菌20-25min ； C、接种:将北虫草母种接种于加富固体培养基的平板或斜面上，20°C ± TC，避光培养7-10天，待菌丝长满平板或斜面并且浓白微黄时取出备用； (2)液体北虫草菌种的制备:A、液体培养基的配方:去皮马铃薯150-200g、蔗糖15-20g、鸡蛋3g-5g、维生素B10.2-0.3g、洋葱10_15g、胡萝卜5_10g、蛋白胨l_5g、鲜北虫草子实体10-12g、水1000ml ;B、制备方法:鲜北虫草子实体粉碎，去皮马铃薯、洋葱、胡萝卜切块，处理好的四种原料同时煮沸25-35min，过滤，滤液中加入蔗糖、蛋白胨、维生素B和鸡蛋全液煮沸，加水定容至1L，分装后121°C灭菌20-25min ;C、接种将备用的固体北虫草菌种接入液体培养基表面，20°C ± I°C静置避光培养48h，100-120rpm, 18-20°C，湿度为60%_65%的摇床培养5-7，当液体培养基中布满菌丝后取出置于4°C冰箱中备用； (3)北虫草的栽培:A、栽培基的配方:主料为小麦、燕麦、稻谷各1/3混合,辅料为:蛋白胨55-60g，蚕蛹粉7-10g，蔗糖8-10g，硫酸镁0.4g，磷酸二氢钾0.4g，水1000ml ;B、制备方法:主料的各原料混合，用水洗净，晾干水分，分装于500ml容积的培养瓶中，每瓶30g ;辅料溶液的制备:取蛋白胨、蚕蛹粉、蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾加入水煮沸使其溶解，过滤后滤液加水定容至IL备用；每个装有主料的培养瓶中加入辅料溶液42ml混匀后聚丙烯薄膜封口，121°C灭菌1-1.5h，冷却后，置于无菌室中备用；C、接种、培养:将4°C冰箱中保存的液体菌种置于无菌室恢复4-5h,每个培养瓶中接种5-8ml恢复的液体菌种,封口后放入温度为18-20°C、湿度为60-65%的培养室中避光培养30-35天，当菌丝长透培养基后再延长12h进入催芽阶段；D、催芽:培养室的控制条件为:23-24°C、2001x白光光照12h，15_16°C、暗室12h，光照与暗室温差为8-9°C，湿度为80%-95% ;以白光光照12h暗室12h为一天如此交替，每天白光光照前和暗室培 养前分别通风I次，每次30min ;当子实体长出0.5-lcm完成催芽进入催草阶段；E、催草:先在封口的塑料膜上扎3-5个1.5mm的孔作为透气孔；催草阶段培养室的控制条件为:光照温度23-24°C，暗培养温度为18-20°C，湿度为85%_95%，每天白光光照前和暗室培养前分别通风I次，每次30min，光照为白光光照:5001x照射5h，15001x照射3h，35001x照射2h，50001x照射lh，60001x照射lh，依次交替进行培养10-15天，当子实体顶端长出毛刺，形成子囊孢子时催草培养完成；F、紫外线照射:催草培养完成后去掉培养瓶上的塑料膜，用垂直距离为30-40cm的30W紫外光灯照射90s，然后以2001x的白光每日照射12h，培养1-3天；G、收获:紫外光照射培养1-3天后，观察到子实体上长出毛刺，收割子实体，60°C烘干。
2.根据权利要求1所述的一种北虫草的栽培方法，其特征在于:所述北虫草菌种为北虫草I~2代母种。
【文档编号】A01G1/04GK103650911SQ201310600084
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月25日 优先权日:2013年11月25日
【发明者】周翔, 杨洪利, 胡素花, 杨国华, 周文贵, 杨金花 申请人:杨洪利, 胡素花