一种含有人体细胞的珍珠及其生产方法
【专利摘要】本发明公开了一种储存有人体细胞的有核珍珠及其制备方法，属于人工养殖珍珠的生产领域。将取自人体的离体细胞经过防腐处理使其细胞结构和DNA得以保存，再将细胞储存于合适的介质中使细胞及其中的DNA得以长期保存。将这样处理过后的细胞置入到培养有核珍珠用的珠核中，按照有核珍珠的培育方法培育出来的珍珠就成为含有人体细胞及其基因信息的珍珠。通过将一个标识物与细胞同步置入珠核中达到辨识的目的，标识物以RFID标签为最佳选择。这样的珍珠融合了拥有者对细胞提供者的特定情感和珍珠自身的宝石特征，大大提高了珍珠的价值。
【专利说明】一种含有人体细胞的珍珠及其生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种有核珍珠及其生产方法，具体涉及一种带有人体细胞材料的人工养殖珍珠及其生产方法，属于人工养殖珍珠的生产领域。
【背景技术】
[0002]珍珠自古以来就是各国人民都喜爱的有机宝石。中西方各个王国的王冠上通常都嵌有珍珠。珍珠的价值通常由珍珠的光泽、皮质、形状、大小、珍珠层厚度、颜色来决定，但珍珠的价值还与文化和审美相关，个人情感取向对珍珠的价值判断有很大影响。特别是珍珠与钻石等其他无机宝石不同之处在于，珍珠是一种有机宝石，珍珠是由生命孕育的宝石，它的形成过程具有很大的不确定性，因此它还常常带有一种神秘性。
[0003]天然珍珠数量极少，目前大部分珍珠都是人工养殖的珍珠，人工养殖珍珠分为有核珍珠和无核珍珠。有核珍珠是模仿天然珍珠生成的原理，从育珠蛘外套膜剪下活的上皮细胞小片，与人工珠核一起植入育珠蛘的外套膜结缔组织中。植入的细胞小片，依靠结缔组织提供的营养，围绕人工核迅速增殖，形成珍珠囊，分泌珍珠质，从而生成人工有核珍珠。人工无核珍珠，是对外套膜施术时，仅植入细胞小片，经细胞增殖形成珍珠囊，并向囊内分泌珍珠质生成的珍珠。目前较为名贵的海水养殖珍珠都是有核珍珠。
[0004]据文献记载，中国自宋代开始就有人工养殖珍珠的记载。几百年来，珍珠养殖人不断致力于提高养殖珍珠的品质和产量。也有人尝试培养新型珍珠来提高珍珠的价值，人们试图发明的新型产品有造型附壳珍珠、彩色珍珠、夜光珍珠、磁性珍珠等，但这些创造都是基于珍珠的传统审美标准。本发明提出了一种开拓性的新思路，即通过在珠核中包裹进对特定个人或人群具有特定情感意义的物品来提升珍珠的价值，具体在本项发明中，是在珠核中包裹进特定个体或人群的人体细胞材料，从而使包裹该珠核生长出来的珍珠带有该个体或群体的全部基因信息。这样的珍珠融合了人们对相关人物的特定情感和珍珠自身的宝石特征，既具有普通珍珠的宝石价值，又具有纪念物的特殊意义，它的价值就会远远超过珍珠作为一般宝石的价值。由于珍珠生长时间漫长和最后成珠的不确定性以及个人基因信息的唯一性，这种带有个人细胞的珍珠就会显得尤为珍贵和神秘，具有特殊的情感价值，成为爱人之间、朋友之间、信徒、Fans或家族传承的无价之宝。
[0005]世界上没有完全一样的人，这种唯一性是由其基因决定的。含有个人完整基因信息的物品具有个体的唯一性，其纪念意义是一般的纪念性物品所不能比拟的。特别是将来科学技术的发展，个体以DNA形式保存的基因信息有可能在新的细胞中重新表达，这意味着该个体将来存在复活的可能性。将自己的生命永远地保存下来是人类梦寐以求的愿望，将自己的基因信息以DNA的形式完整保存下来就有可能实现这个愿望。
[0006]基因信息储存于DNA中，人的DNA存在于细胞的细胞核和线粒体当中，任何一个正常的细胞中都储存了该个体的全部基因信息。从基因信息的角度说，来自个体身体中的正常细胞可以代表该个体。因此要保存个体的完整基因信息，必须保存完整的细胞，但组织细胞脱离机体后或机体死亡后会细胞会很快发生自溶，使其中的DNA降解。[0007]生物医学研究发现，如果将离体组织细胞迅速放入福尔马林等生物固定剂中，可使蛋白质发生变性而避免细胞的自溶，使细胞的结构、成分稳定地保存下来。但有的固定剂会与DNA发生反应而造成DNA的破坏，因此要选择合适的固定剂使细胞中的DNA基本不受损伤。溶液或空气中的氧在长期保存过程中也会对DNA造成损伤，如果能选择合适的保存方法使得固定的细胞隔绝空气，就可以避免长期保存过程中氧对DNA结构的损伤，从而使细胞中的DNA完整保存下来。
[0008]采用低温冷冻干燥的办法可以使细胞迅速脱水，从而使细胞中的酶失去活性，使细胞中的DNA得以保存。与固定剂相比，低温冷冻干燥保存细胞避免了化学固定剂对DNA的损伤，能使DNA得到更好的保护。当然其保存方法更为复杂，也需要更为昂贵的设备。将冷冻干燥后的细胞保存于石蜡中、或真空保存、或保存于充有惰性气体的容器中，可以隔绝氧，从而避免长期保存过程中氧对DNA结构的损伤,从而使细胞中的DNA完整保存下来。
[0009]利用液氮对细胞进行深低温冻存是目前保存活细胞的常用方法，将细胞保存于液氮中进行深低温保存，不但可以保存细胞中的DNA使不致损伤，还可以长期保存细胞的生命活性。
[0010]采取合适的方法，对细胞进行固定、冷冻干燥或液氮冻存处理，再放入合适的保存介质中，然后置入珠核中的合适位置，再按有核珍珠的常规培育方法进行培育，就可以生产出含有细胞提供者完全部DNA基因信息的珍珠。
[0011]由于置于珠核中的细胞肉眼无法鉴别，从而导致这种含有特定个体细胞的珍珠存在普通人难以区分鉴别的问题。消费者可能会存在珍珠里面是不是有细胞，或者里面的细胞是不是委托人提供的细胞等疑惑，因此本发明设计了在珠核制作时与细胞材料同步加入一个标识物到珠核中来解决这个问题。这个标识物可以是一个特定形状的金属件(将来可通过X光鉴别)，也可以是一个能发出特定颜色或形状荧光的构件，或者是利用RFID (RadioFrequency Identification)射频识别技术来达到识别的效果。RFID(Radio FrequencyIdentification)射频识别技术是一项利用射频信号通过空间耦合实现无接触信息传递并通过所传递的信息达到识别目的的技术。应用RFID技术可将细胞提供者的个人信息以及细胞采集、防腐处理过程等信息以不可擦除的方式预先储存在RFID标签上，并将RFID标签和天线封固于环氧树脂中后包裹于含人体细胞的珠核中，以此珠核培育出的珍珠不但具备了可鉴别的特点，而且今后还可以进一步在其中写入记载相关信息，进一步增加了该珍珠的情感价值。
【发明内容】
[0012]本发明的目的之一在于提供一种具有特定情感价值的珍珠，这种珍珠是通过将经过防腐处理的特定个体的人体细胞嵌入到珍珠核中，再按照有核珍珠的生产方法，将珍珠核插入到育珠蛘中培育而得到的一种含有人体细胞的珍珠。这样的珍珠中含有以DNA的形式保存的细胞提供者的全部基因信息，融合了拥有者对细胞提供者的特定情感和珍珠自身的宝石特征，既具有普通珍珠的宝石价值，又具有纪念物的特定情感价值，使普通珍珠成为了对特定人群具有特定情感价值的纪念物。
[0013]本发明的另一个目的在于提供一种生产含有人体细胞和人体基因信息珍珠的方法。将人体细胞经过防腐处理，使细胞结构和其中的DNA得到了保存，也就是个体的生命基因信息得到保存。本发明中说的防腐处理，是指将离体的细胞经过处理后使细胞中的酶失活，从而避免细胞自溶，达到使细胞中的DNA和细胞结构保存下来的目的。通常采用固定剂(例如中性缓冲福尔马林溶液、酒精、丙酮等)将离体的细胞迅速固定、或将离体的细胞迅速脱水、或将活细胞保存在液氮中都可达此目的。把经过防腐处理的人体细胞放入合适介质中(例如石蜡、树脂、液氮、真空或惰性气体等，目的是隔绝空气中的氧，从而避免保存过程中细胞中的DNA受到损伤)置入人工养殖珍珠的珠核中，再经过常规的有核珍珠的培养过程，就得到了本发明所说的含有人体细胞(并因此含有细胞提供者的全部基因信息)的珍珠。通过在珠核中置入一个可以鉴别的标识物达到可识别的目的，这样的标识物目前以RFID标签为最佳选择，其中写入的除了鉴别信息外，也可写入其他各种信息，进一步增强珍珠的情感价值。
[0014]为实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案:
[0015]一、实施步骤:采集人体细胞一细胞防腐处理一将细胞保存在合适的介质中一将相关信息写入RFID标签芯片中一制备含有细胞(和标识物)的珠核一插核处理一在蛘壳上标记相关信息一育珠蛘养殖一米蛘取珠一后期加工。
[0016]二、具体技术方案:
[0017]1.采集细胞。细胞可以采集自人体的任何部位，只要细胞是正常含有完整基因信息的细胞。一般是自血液组织、胎盘组织、脐带组织、脐带血、阑尾组织、毛囊细胞或口腔上皮采集的原代细胞或将采集的原代细胞经体外继续培养增殖所得。如果采集的是外周血细胞，可使用淋巴细胞分离液离心分离出单个核细胞使用，也可直接使用，或继续培养增殖后使用。细胞也可以是其他生物的细胞
[0018]2.细胞的防腐处理。目的在于使得细胞中的DNA保存完整不被降解，从而保存细胞提供者的全部基因信息，根据情况不同，可以采用以下三种方法之一对细胞进行防腐处理。(I)采用固定剂(例如中性缓冲福尔马林溶液、戊二醛溶液、乙醇溶液或丙酮溶液)固定处理细胞，可以达到保存细胞中的DNA的目的，而且方法简单，直接将离体的细胞放入固定液中即可，费用低廉。(2)采用对细胞进行低温冷冻干燥处理。采用冻干机先将细胞冷冻，然后真空干燥，快速去除细胞中的水分，同样可以达到使细胞中的DNA保存完整不被降解的效果。(3)将细胞冻存于液氮中。将细胞保存于含二甲亚砜等抗冻剂的培养液中，然后逐步降温，最后冻存于液氮中，不但可以保持细胞中的DNA不被降解，而且细胞保持了其生命活性，将来可以通过复苏成为正常的活细胞。
[0019]3.在细胞的长期保存过程中，空气中的氧可能会损伤其中的DNA。因此经过防腐处理的细胞需要保存在合适的介质中，以避免DNA的损伤，将经过防腐处理的细胞保存于石蜡、树脂、液氮、真空或惰性气体中都可以达到避免DNA被空气中的氧损伤的目的。将活细胞冻存在液氮中可以保持细胞的生命活性。
[0020]4.将RFID标签和天线包封于环氧树脂中作为标识物，按委托人的意愿将相关信息写入RFID标签中，标签设置不可擦除程序，从而保持珍珠相关信息的真实性。
[0021]5.将细胞和RFID标签置入珍珠核中。目前珍珠养殖中常用的珠核都是用贝壳制备的天然珠核，常用的有淡水产的丽蛘壳和海水产的砗磲壳，但由于贝壳资源的逐渐枯竭，人们也在研究人工合成珠核。本发明中人体细胞的载体珠核既可以采用天然珠核，也可采用合成珠核。植入同一珠核的细胞可以来自I人，也可以来自多人。采用不同珠核，细胞的置入方法不同，具体如下:
[0022](I)采用天然贝壳珠核:将加工好的珠核钻一小孔，将用石蜡或树脂包埋好的细胞(和标识物)塞入小孔中，封闭小孔，将珠核表面打磨光滑。如果该珍珠将来需要钻孔，小孔深度不超过珠核半径的3/4。
[0023](2)采用人工合成珠核:可以采用与天然珠核一样的方法，在加工好的人工合成珠核上钻一小孔，将用石蜡或树脂包埋好的细胞(和标识物)塞入小孔中，封闭小孔，将珠核表面打磨光滑。如果该珍珠将来需要钻孔，小孔深度不超过珠核半径的3/4。也可以采用将细胞与珠核一起成型的技术方案，即将包埋在石蜡或树脂中的细胞(和标识物)与人工合成珠核原料一起混合，凝固成型，或将储存有细胞的容器置于珠核模具的中央，在其周围浇注人工合成珠核原料，待珠核凝固成型后储存细胞的容器位于珠核中央，标识物可先置于容器中，也可在珠核成型时放入，位于珠核原料层中。将珠核表面打磨光滑。本发明所述的人工合成珠核是指混有10?40%贝壳粉的树脂珠核。其中所述的贝壳粉指将贝壳去污清洗后磨成的40?800目的细粉，树脂指本领域技术人员公知的环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯树脂或不饱和聚酯树脂。
[0024]6.将上述制备的珠核与外套膜细胞小片一起插入到育珠蛘的外套膜结缔组织等插核部位中，伤口进行灭菌消毒处理。
[0025]7.育珠蛘养殖:在蛘壳上刻上相关标记,按常规的育珠蛘养殖方法养殖,按与委托人约定的时间采蛘取珠，后期加工。
[0026]8.本发明所涉及的含有人体细胞的珍珠，可以是游离形粒型珍珠，也可以是附壳造型珍珠。
[0027]本发明的有益效果:
[0028]1.本发明大大提高了珍珠产品的附加值。通过在珠核中置入经过防腐处理的人体细胞，从而生产出以DNA形式储存了细胞提供者完整基因信息的珍珠，这样的珍珠就成为一种极具情感价值的个性化珍珠。能够承载人类情感元素的产品往往能够获取高的附加值，各种奢侈品的高价格就是很好的例子。来自个体身体的物质具有个体的唯一性，因而具备特定的情感意义。例如，欧洲国家人们有保存爱人、先入或崇拜对象的头发来寄托情感的习惯，古代中国、印度等东方国家有保存供奉高僧舍利子的习惯，非洲人有保存供奉先人头骨的习惯，等等。而且这些物品是一些“死”物质，其中并没有能代表个体生命特征的基因信息。本发明得到的珍珠含有能代表个体生命特征的细胞提供者的基因信息，这样制造的珍珠融合了拥有者对细胞提供者的特定情感和珍珠自身的宝石特征，使普通珍珠成为了含有特定情感价值的纪念珍珠，它的价值远远超过珍珠作为一般宝石的价值。由于珍珠需要经过长时间的培养才能获得，在这个过程中珍珠的生长又充满不确定性，整个培养过程会使人倾注大量感情，因此这样培养出来的个性化珍珠显得尤为珍贵。特别是如果其中置入的细胞是来自于高僧、国家领导人等杰出人物，再经过对珍珠的优化培养提高珍珠自身的品质，得到的珍珠就可能成为国宝。
[0029]2.本发明创造了一种新的珍珠生产经营模式。传统的珍珠生产经营模式是珍珠生产经营者将珍珠生产出来之后再卖给消费者，是先生产后销售的模式，生产经营风险全部由生产经营者承担。而本发明所述珍珠的生产经营模式则可将销售提前到珍珠的具体生产阶段之前，采用先销售后生产的模式，生产经营者在珍珠进入具体生产之前就可取得销售收入，珍珠生产经营者的角色可转变为替消费者代养的角色，每年还可再取得相对稳定的代养收入，增加了收入的稳定性，大大降低了生产经营者的风险和资金成本。
[0030]3.本发明有利于培育高品质的珍珠。通常来说，珍珠培养的时间越长，则珍珠的品质越高，但传统珍珠生产经营者出于资金成本的考虑，目前珍珠生产通常的培养时间是0.5?2年，时间过短，难以获得高品质的珍珠，影响了国产珍珠的形象。而采用本发明的方式生产珍珠，消费者通常都会愿意通过延长培育时间来获得高品质的珍珠，而养殖时间越长，生产经营者得到的代养收入越多，也愿意延长珍珠的养殖时间，无论是生产者还是消费者都有动力通过延长珍珠的培育时间来培育高质量的珍珠，促进了高品质珍珠的生产。
[0031]4.在本发明的基础上可以创造出新的珍珠文化。由于珍珠生长的不确定性，同样条件下培育的珍珠最后成珠的品质差异很大，而珍珠又是由生命孕育的宝石，因此珍珠的生长具有某种神秘性。这样可以通过在珍珠生产各个阶段举行一些吸引消费者参加的特别的祈祷祝福仪式，例如可在插核前举行祈祷仪式，祈祷珍珠生长顺利:在收获珍珠时举行开光仪式等活动，从而形成一些新的珍珠文化活动，进一步带动珍珠经济的发展。由于珍珠的生产时间较长，这样还可以通过举办珍珠节等方式吸引委托者定期来了解珍珠的生长状况，既满足了珍珠寄养者的情感需求，也可带动当地旅游业的发展，延伸了珍珠生产的产业链。
【专利附图】
【附图说明】
[0032]图1是本发明实施例1所述珍珠的截面图，图中I是珍珠层，2是珠核层，3是石蜡层，4是RFID标签芯片，5是天线，6是树脂层，7是细胞。
【具体实施方式】
[0033]以下结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明，但并不因此而限制本发明的范围。
[0034]实施例1
[0035]1.将RFID标签芯片4和天线5包封在环氧树脂6中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0036]2.石蜡包埋细胞:抽取人静脉血20mL于肝素处理过的离心管中，2000rpm离心5min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀df20mL预冷的100%酒精加入到细胞沉淀中固定细胞lOmin，期间轻轻振荡使沉淀分散；固定完成后离心沉淀细胞，倒去上清液，再加入100%酒精脱水10min，2500rpm离心5min使细胞沉淀下来，倾去上清液；然后加入二甲苯进行透明处理5min,2500rpm离心5min使细胞沉淀,倾去上清液；先将石腊反复煮沸去除空气，再将去除空气的石蜡置于60°C熔化后加入到细胞沉淀中，保持50?60°C透蜡IOmin使石蜡渗入到细胞中，然后置于室温中冷却凝固，期间轻轻震荡使细胞均匀分布于石蜡中包埋，将含有细胞的石蜡块切成小块。
[0037]3.制备珠核:在已打磨好的砗磲壳珠核2上钻一直径约2mm左右的小孔，深度为珠核半径的3/4左右，将含细胞7的石蜡小块3和RFID标签塞入小孔中，用环氧树脂(混有贝壳粉)封闭小孔，将表面打磨光滑即可。[0038]4.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0039]实施例2
[0040]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0041]2.石蜡包埋细胞:抽取人静脉血20mL于肝素处理过的离心管中，2000rpm离心5min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀，将IOmL预冷中性缓冲福尔马林固定液(4°C )加入到细胞沉淀中固定细胞lOmin，期间轻轻振荡使沉淀分散；固定完成后离心沉淀细胞，倒去上清液，加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为80% — 95%— 100%— 100%，每次脱水5min，2500rpm离心5min使细胞沉淀下来；然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯,每次处理5min,然后2500rpm离心5min使细胞沉淀:透蜡的程序为:1/2 二甲苯+石蜡一石蜡一石蜡，每次10min，50?60°C下进行，每次用胶头吸管从离心管底部吸取细胞进入下一道程序；包埋:先将经反复煮沸去除空气的石蜡置于60°C熔化，倒入模具中置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，吸取透蜡好的血细胞滴入，呈半凝固状态时再次加入60°C熔化的石蜡使充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程，将含有细胞的石蜡块切成小块。
[0042]3.其后步骤同实施例1
[0043]实施例3
[0044]1.石蜡包埋细胞:抽取人静脉血20mL于肝素处理过的离心管中，2000rpm离心5min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀df20mL预冷的100%酒精加入到细胞沉淀中固定细胞lOmin，期间轻轻振荡使沉淀分散；固定完成后离心沉淀细胞，倒去上清液，再加入100%酒精脱水lOmin, 2500rpm离心5min使细胞沉淀下来,倾去上消液；然后加入二甲苯进行透明处理5min,2500rpm离心5min使细胞沉淀,倾去上清液；先将石腊反复煮沸去除空气，再将去除空气的石蜡置于60°C熔化后加入到细胞沉淀中，保持50?60°C透蜡IOmin使石蜡渗入到细胞中，然后置于室温中冷却凝固，期间轻轻震荡使细胞均匀分布于石蜡中包埋，将含有细胞的石蜡块切成小块。
[0045]2.制备珠核:在已打磨好的砗磲壳珠核上钻一直径约2mm左右的小孔，深度为珠核半径的3/4左右，将含细胞的石蜡小块塞入小孔中，用环氧树脂(混有贝壳粉)封闭小孔，将表面打磨光滑即可。
[0046]3.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0047]实施例4
[0048]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0049]2.石蜡包埋细胞:抽取人静脉血IOmL于肝素处理过的离心管中，静置待其分层后吸去部分上层血浆，然后将沉淀于下层的血细胞吸附于棉花上，将其浸入到5mL预冷中性缓冲福尔马林固定液(4°C )中固定IOmin ;固定完成后倒去固定液，依次加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为85%—95%— 100%- 100%，每次脱水IOmin ;然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯，每次5min ;透明完成后进行透蜡处理，程序为:1/2 二甲苯+石蜡一石蜡一石蜡，每次10min，50?60°C下进行；先将反复煮沸去除空气的石蜡置于60°C熔化，例入模具中置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，将吸附有血细胞的棉花放入，呈半凝固状态时再次加入60°C熔化的石蜡时充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程，将含有细胞的石蜡块切成小块。
[0050]3.制备珠核:在已打磨好的砗磲壳珠核上钻一直径约2mm的小孔，深度为珠核半径的3/4左右，将含细胞的石腊小块和RFID标签塞入小孔中，用环氧树脂(混有贝壳粉)封闭小孔，将表面打磨光滑即可。
[0051]4.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0052]实施例5
[0053]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0054]2.细胞冻干和包埋:抽取人静脉血50mL于肝素处理过的离心管中，静置待其分层后吸去上层血浆，加入PH7.4的等渗PBS洗涤血细胞，离心去除PBS，重复3次。按1:4的体积比加入冻干保护液(终浓度为15%的PVP40(聚乙烯吡咯烷酮40))、150mmol/L海藻糖和5%膜保护剂BSA(牛血清白蛋白)溶于PBS缓冲液重悬细胞。将细胞悬液分装于冻干瓶，每瓶250 μ L，厚度约2mm。将液氮倾倒于冻干瓶上30s，然后迅速将冻干瓶置于已预冷至-70°C的冻干机搁板上。约30min后开始抽真空,保持_70°C和真空压150mbar左右干燥15h,然后设定隔板温度15°C、真空压150mbar左右,干燥IOh,得冻干血细胞。向冻干瓶中加入环氧树脂胶液，振荡使细胞均匀分布于胶液中，将胶液倒入模具固化。
[0055]3.制备珠核:在已打磨好的砗磲壳珠核上钻一直径约2mm的小孔，深度为珠核半径的3/4左右,将含细胞的树脂小块和RFID标签塞入小孔中，用环氧树脂(混有贝壳粉)封闭小孔，将表面打磨光滑即可。
[0056]4.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0057]实施例6
[0058]1.根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，然后将RFID标签和天线包封在环氧树脂中，此为下文所述RFID标签。
[0059]2.细胞冻干和包埋:抽取人静脉血50mL于肝素处理过的离心管中，静置待其分层后吸去上层血浆，加入PH7.4的等渗PBS洗涤血细胞，离心去除PBS，重复3次。按1:4的体积比加入冻干保护液(终浓度为15%的PVP40 (聚乙烯吡咯烷酮40)、150mmol/L海藻糖和5%膜保护剂BSA(牛血清白蛋白)溶于PBS缓冲液重悬细胞。在冻干瓶中放入干燥灭菌过的棉花，将细胞悬液分装于冻干瓶，每瓶250 μ L，厚度约2mm。将液氮倾倒于冻干瓶上30s，然后迅速将冻干瓶置于已预冷至-70°C的冻干机搁板上。约30min后开始抽真空，保持-70°C和真空压150mbar左右干燥15h，然后设定隔板温度15°C、真空压150mbar左右，干燥10h，得冻干血细胞。取出冻干瓶平衡至室温后向冻干瓶中加入熔化的石蜡，振荡使细胞均匀包埋在石蜡中，将石蜡切成小块。
[0060]3.制备珠核:在已打磨好的砗磲壳珠核上钻一直径约2mm的小孔,深度为珠核半径的3/4左右，将含细胞的石腊小块和RFID标签塞入小孔中，用环氧树脂(混有贝壳粉)封闭小孔，将表面打磨光滑即可。
[0061]4.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0062]实施例7
[0063]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0064]2.石蜡包埋:抽取人静脉血IOmL于肝素处理过的离心管中，静置待其分层后吸去上层血浆，将沉淀于下层的血细胞吸附于棉花上，然后将其浸入到5mL预冷中性缓冲福尔马林固定液(4°C )中固定；固定完成后倒去固定液，依次加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为85%—95%— 100%- 100%，每次脱水IOmin ;然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯，每次5min;透蜡的程序为:1/2 二甲苯+石蜡一石蜡一石蜡，每次lOmin，50?60°C下进行；先将反复煮沸去除空气的石蜡置于60°C熔化，倒入模具中置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，将吸附有血细胞的棉花放入，呈半凝固状态时再次加入60°C熔化的石蜡时充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程,将含有细胞的石蜡块切成小块。
[0065]3.制备珠核:将贝壳粉(100目)、黄绿色荧光粉GL-3A按90:10的比例混匀，加入到环氧树脂溶液中，加入固化剂搅匀，待颗粒成分下沉稳定后将上层透明成分倒去，余下部分倒入模具中成型，将石蜡块和RFID标签放置到模具中，600C固化4h，脱模，将表面打磨光滑，得到含有人体细胞材料的珠核。
[0066]4.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0067]实施例8
[0068]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0069]2.用对细胞无毒害的塑料制造一个球形中空的装载细胞的容器作为珠核的内核。该容器内部有隔层将内部空间氛围2层，里层容纳细胞，外层容纳液氮。
[0070]3.细胞获取和保存:抽取人静脉血IOmL于肝素处理过的离心管中，采用淋巴细胞分离液离心分离出血液中的单个核细胞，采用常规动物细胞培养方法扩增细胞数量，待细胞扩增到需要数量后离心分离出细胞，PBS洗涤后加入少量含抗冻剂的培养液重悬细胞，然后将细胞分装到珠核的内核里层中，封闭内层注入孔，置_20°C条件下放置6?24h后，外层注入液氮，先用石蜡封闭注入孔，再用环氧树脂进一步封闭注入孔。制成含有冻存细胞的珠核内核。
[0071]4.将珠核内核放置珠核模具中央位置，再将RFID标签放置到模具中，将贝壳粉(100目)、黄绿色荧光粉GL-3A按90:10的比例混匀，加入到环氧树脂溶液中，加入固化剂搅匀，待颗粒成分下沉稳定后将上层透明成分倒去，余下部分倒入模具中成型，60°C固化4h，脱模，将表面打磨光滑，得到含有人体细胞材料的珠核。
[0072]5.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
[0073]实施例9
[0074]1.将RFID标签芯片和天线包封在环氧树脂中，然后根据客户要求，将需要储存在RFID标签内的信息写入到芯片中，信息设置为不可删除状态，此为下文所述RFID标签。
[0075]2.用对细胞无毒害的塑料制造一个球形中空的装载细胞的容器作为珠核的内核。该容器内部有隔层将内部空间氛围2层，里层容纳细胞，外层容纳液氮。
[0076]3.细胞获取和保存:刮取口腔粘膜上皮细胞，采用常规动物细胞培养方法扩增细胞数量，待细胞扩增到一定数量后接种到珠核内核里层中继续培养，待细胞长满整个内核里层壁时弃去培养液，PBS洗涤后加入少量含抗冻剂的培养液，封闭内层注入孔，置-20°C条件下放置6?24h后，外层注入液氮，先用石蜡封闭注入孔，再用环氧树脂进一步封闭注入孔。制成含有冻存细胞的珠核内核。
[0077]4.将珠核内核放置珠核模具中央位置，再将RFID标签放置到模具中，将贝壳粉(100目)、黄绿色荧光粉GL-3A按90:10的比例混匀，加入到环氧树脂溶液中，加入固化剂搅匀，待颗粒成分下沉稳定后将上层透明成分倒去，余下部分倒入模具中成型，60°C固化4h，脱模，将表面打磨光滑，得到含有人体细胞材料的珠核。
[0078]5.按常规有核珍珠的培育方法将珠核和外套膜细胞小叶一起插入育珠蛘的外套膜结缔组织中，在蛘壳上刻上记号(委托者姓名，编号，日期等)按常规珍珠贝养殖方法养殖。按与委托者约定的日期采蛘取珠。
【权利要求】
1.一种有核珍珠，其特征在于所述珍珠的珠核中含有经过防腐处理的人体细胞。
2.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的防腐处理指的是采用以下三种方法中的任何一种:经过固定剂固定；经过冷冻干燥处理；液氮冻存。
3.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的经过防腐处理的人体细胞是以保存在石蜡或树脂或液氮或真空或惰性气体中的状态嵌入珠核中的。
4.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的人体细胞可以是单个人的细胞，也可以是多个人的细胞。
5.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其珠核中有一个可辨认的标识物。
6.根据权利要求5所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的标识物是RFID标签。
7.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的珠核是采用以下方法制备的:预先在珠核上钻一小孔，将经过防腐处理过的人体细胞包埋于石蜡或树脂中，将包埋有人体细胞的石蜡或树脂块与标识物一起嵌入预先钻好孔的珠核中，封闭小孔。
8.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其中所述的珠核是采用以下方法制备的:使用人工合成珠核作为细胞载体，先将冷冻干燥处理后或液氮冷冻后的细胞保存在合适的容器中，然后将该容器置于珠核模具的中央位置，接着将人工合成珠核的原料混合搅匀后浇注到该珠核模具中，标识物可置于容器中，也可位于容器外的珠核层中。将完成固化的粗制珠核从模具中取出，使用打磨机打磨成表面光滑的成品珠核。
9.根据权利要求1所述的一种有核珍珠，其特征在于其可以是游离型粒形珍珠，也可以是附壳造型珍珠。
10.一种内含人体细胞的有核珍珠培育方法，其特征在于它是采用以下方法生产的: (1)采集人体细胞，立即进行防腐处理； (2)将经过防腐处理的细胞保存在介质中； (3)按照委托者的意愿，将相关信息写入RFID标签芯片中，标签设置不可擦除程序； (4)制备含有人体细胞和RFID标签或其他标识物的珠核； (5)将含有人体细胞的珠核和从育珠蛘外套膜剪下的细胞小片一起植入受体蛘的插核部位； (6)在蛘壳上刻上记号,按常规珍珠贝养殖方法养殖。 (7)按与委托者约定的日期采蛘取珠。
【文档编号】A01K61/00GK103720143SQ201310652756
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年11月28日 优先权日:2013年11月28日
【发明者】肖义军, 肖宽诚 申请人:肖义军