甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法，属农作物近缘野生种病害抗性鉴定方法。将待鉴定的甘薯野生种栽种于盛有消毒土壤的花盆中，每盆栽种1棵。用根部滴加法向每棵野生种苗接种200头茎线虫，后在25℃，80%湿度，光周期14/10（L/D）的条件下培养。每天适量浇水，将花盆中土壤湿度控制在18-25%范围内。培养40天后，挖取野生种地下茎部分，用解剖剪将茎杆纵向剖开，测量茎杆内茎线虫病受害面积，根据受害部分占茎杆的比例划分病情指数，确定野生种的抗性等级。该鉴定方法处理手段科学有效，操作过程简单，实验周期短，且能够避免试验材料对环境造成的污染。试验结果能够全面的体现甘薯近缘野生种对茎线虫病的抗性水平。
【专利说明】甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种农作物近缘野生种抗茎线虫病的抗性鉴定方法，具体的说是一种甘薯近缘野生种抗茎线虫病的抗性鉴定方法，属于农业植物保护领域。
【背景技术】
[0002]我国是世界第一大甘薯生产国，近年甘薯种植面积约为7000万亩，占世界甘薯种植面积的50.0%左右。甘薯茎线虫病是影响甘薯产量和品质最为严重的病害之一，经南京农业大学丁再福等鉴定，甘薯茎线虫病的病原为马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchusdestructor Thome),属线虫纲,垫刃目，莖线虫属。甘薯莖线虫病在我国主要分布在河北、河南、山东、山西、安徽、江苏等省。该病害在甘薯贮藏期可导致烂窖，育苗期可引起烂床。大田期甘薯受害后，薯块出现糠心，表皮龟裂等症状，一般年份可引起甘薯减产10-20%，严重年份可达50-60%，甚至绝收，现已成为我国北方薯区最为严重的病害之一。抗性育种是控制茎线虫病最为经济有效的方法，然而，在现有的甘薯品种中，可利用的抗性材料十分有限。自1949年以来，我国94%育成品种与南瑞苕和胜利百号有血缘关系，导致甘薯遗传背景狭窄，制约了甘薯品种改良的进度和质量。甘薯近缘野生资源十分丰富，其中很多野生种具有抗病虫害的优良基因，这为从根本上解决甘薯遗传基础狭窄，有效资源匮乏，品种遗传改良缓慢等问题提供了可能。因此开展甘薯近缘野生种有益性状鉴定工作能够有效的促进甘薯品种改良和对病虫害抗性的提高。与甘薯不同，并不是所有甘薯野生种都能形成块状根，所以打孔接种的抗线鉴定方法不适用于野生种，且目前尚未见标准的甘薯野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法。
【发明内容】
[0003]本发明提供一种甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法，操作过程简单，实验周期短，且能够避免试验材料对环境造成的污染。试验结果能够全面的体现甘薯近缘野生种对茎线虫病的抗性水平。是评价甘薯野生种抗茎线虫病抗性的有效方法。
[0004]本发明是以如下技术方案实现的:一种甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法，将待鉴定的甘薯野生种单棵栽种于花盆中，采用根部滴加法向每盆接种200头茎线虫，40天后挖取野生种地下茎部分，对茎线虫病的为害情况进行调查，评价甘薯野生种抗茎线虫病抗性；具体按如下步骤进行:
[0005](I)茎线虫培养:在田间采集茎线虫病发病薯块，带回实验室后用浅盘法分离茎线虫；镜检确定为甘薯茎线虫后，用1%硫酸链霉素消毒，灭菌水冲洗3次，采用打孔法将茎线虫接种于茎线虫高感品种栗子香薯块中，用石蜡封口，置于25°C培养箱中培养，备用；
[0006](2)待测材料准备:向直径为IOcm的圆形塑料花盆中装入Ikg灭菌后的土壤，将待测甘薯野生种栽种于花盆中，每盆栽种I棵。将甘薯野生种防治于植物生长间中，在250C，80%湿度，光周期14/10 (L/D)的条件下培养；每天；浇水，将花盆中土壤湿度大约控制在18-25%范围内；[0007](3)待甘薯野生种幼苗长出4片真叶时接入茎线虫。茎线虫接种时，先在幼苗根围打一深5cm的小孔，将5ml消毒的茎线虫悬浮液(含200头茎线虫)加入到小孔中，后用土将孔填平；每个鉴定的野生种栽种5盆，即5次重复，可以甘薯品种栗子香为感病对照；接种茎线虫40天后对茎线虫病的发病情况进行调查；
[0008](4)发病情况调查:将野生种苗挖出后用清水冲洗干净，用解剖剪将地下茎剖开，测量受害部宽度，根据受害部所占比例对病害进行分级；
[0009]分级标准:
[0010]O级:全株不发病；
[0011]I级:开始发病，尚不明显；
[0012]2级:受害部达全株1/3 ;
[0013]3级:受害部达全株1/2 ;
[0014]4级:受害部达全株2/3 ;
[0015]5级:全株发病。
[0016]对样品进行分级后，根据以下公式计算病情指数:
[0017]
【权利要求】
1.一种甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法，其特征是:将待鉴定的甘薯野生种单棵栽种于花盆中，采用根部滴加法向每盆接种200头茎线虫，40天后挖取野生种地下茎部分，对茎线虫病的为害情况进行调查，评价甘薯野生种抗茎线虫病抗性；具体按如下步骤进行: (1)茎线虫培养:在田间采集茎线虫病发病薯块，带回实验室后用浅盘法分离茎线虫；镜检确定为甘薯茎线虫后，用1%硫酸链霉素消毒，灭菌水冲洗3次，采用打孔法将茎线虫接种于茎线虫高感品种栗子香薯块中，用石蜡封口，置于25°C培养箱中培养，备用； (2)待测材料准备:向直径为IOcm的圆形塑料花盆中装入Ikg灭菌后的土壤，将待测甘薯野生种栽种于花盆中，每盆栽种I棵；将甘薯野生种防治于植物生长间中，在25°C，80%湿度，光周期14/10 (L/D)的条件下培养；每天浇水，将花盆中土壤湿度控制在18-25%范围内； (3)待甘薯野生种幼苗长出4片真叶时接入茎线虫；茎线虫接种时，先在幼苗根围打一深5cm的小孔，将5ml消毒的茎线虫悬浮液，含200头茎线虫)加入到小孔中，后用土将孔填平；每个鉴定的野生种栽种5盆，即5次重复，可以甘薯品种栗子香为感病对照；接种茎线虫40天后对茎线虫病的发病情况进行调查； (4)发病情况调查:将野生种苗挖出后用清水冲洗干净，用解剖剪将地下茎剖开，测量受害部宽度，根据受害部所占比例对病害进行分级； 分级标准: O级:全株不发病； I级:开始发病，尚不明显； 2级:受害部达全株1/3 ； 3级:受害部达全株1/2 ； 4级:受害部达全株2/3; 5级:全株发病； 对样品进行分级后，根据以下公式计算病情指数:病情撤=Σ(錄纖纖X雛纖)χ100%调査苗纖X 5 分级标准:高感:病指> 80% ;感病:80% >病指> 60% ;中抗:60% >病指> 40% ;抗病:40% >病指≥20% ;高抗:20% >病指。
【文档编号】A01K67/033GK103798044SQ201410058578
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年2月21日 优先权日:2014年2月21日
【发明者】徐振, 谢逸萍, 赵永强, 曹清河, 孙厚俊, 唐君, 杨冬静, 张成玲, 魏猛 申请人:江苏徐州甘薯研究中心