一种老山芹愈伤组织诱导方法
【专利摘要】本发明涉及一种老山芹愈伤组织诱导方法，选取老山芹培养材料，在70％酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1％HgCl2溶液消毒3-7分钟，无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分；将上述步骤处理好的老山芹培养材料分割，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤；该诱导愈伤组织培养基包括MS基本培养基中加入下述的原料制成：蔗糖，琼脂粉，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)，6-(苄胺基)嘌呤(6-BA)；调节培养基pH；将配制好的培养基分装在培养瓶中，将培养瓶置于温度为24-26℃、暗培养2天，然后在光照强度为2000-30001x下，每天光照12-16小时，培养15-20天。本发明生产方法简单，成本低；愈伤组织诱导率高，愈伤组织质量高。
【专利说明】一种老山芹愈伤组织诱导方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及野生植物资源开发领域，尤其涉及一种老山芹愈伤组织诱导方法。
【背景技术】
[0002]随着社会生活水平的整体提高，“回归自然”、“呼唤绿色”已成为现代人生活的主题。山野菜因其独特的生长环境、纯天然、无污染、营养丰富、风味独特和兼具保健功能，其日益成为人们的消费取向。目前山野菜已成为风行世界的五类健康食品之一。在日本、西欧和东南亚等国山野菜被称为“天然野味”和“健康食品”。近年来国内外对山野菜的需求快速增长，出口量达到50万吨，并以每年20%的速度递增，因此山野菜的开发必将成为21世纪最具生命力的朝阳产业和绿色环保产业之一。
[0003]老山疗，即东北牛防风(Heracleum moellendorffii),属伞形科，多年生草本植物，基生嫩叶可食用，是色、香、味俱佳的珍贵山野菜。它含有多种丰富的维生素A、B族维生素、维生素C、维生素E和钙、铁、锌等微量元素，此外它还含有苏氨酸、胱氨酸、精氨酸等16种氨基酸，人体必需氨基酸含量达到每100克新鲜老山芹中含968mg。老山芹不仅是天赐的野生家蔬，而且是一味可治疗多种疾病的良药，具有显著的降压、降血糖作用，有祛风除湿，止痛的功能，对癌症化疗后的康复具有显著的食疗效果，被为称山野菜中的“绿色黄金”。虽然老山芹具有很高的经济价值，但由于其野生自然繁殖率低，加之掠夺式过度采集而导致资源日趋枯竭；另外，老山芹种子休眠期较长，种子萌发率低，繁殖率低，人工育苗困难，技术要求高，很难被农民所掌握，因而，老山芹人工栽培产业发展缓慢，难以满足国内外市场对老山芹产品的需求。
[0004]鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种老山芹愈伤组织诱导方法，用以克服上述技术缺陷。
[0006]为实现上述目的，本发明提供一种老山芹愈伤组织诱导方法，该具体过程为:
[0007]步骤a，老山芹外植体制备和消毒:选取老山芹培养材料，在70 %酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1 % HgCl2溶液消毒3_7分钟，无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分；
[0008]步骤b，老山芹愈伤组织诱导:将上述步骤a中处理好的老山芹培养材料分割，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤；
[0009]该诱导愈伤组织培养基为在I升MS基本培养基中加入下述的原料制成:蔗糖20-40g，琼脂粉 5.5-8.5g， 2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.25-2.0mg，6-(苄胺基)嘌呤(6-BA) 0.25-2.0mg ;调节培养基 pH ；
[0010]将配制好的培养基分装在培养瓶中，每瓶30毫升，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于温度为24_26°C、暗培养2天，然后在光照强度为2000-30001x下，每天光照12-16小时，培养15-20天。[0011]进一步，在上述步骤a中，所述老山芹培养材料包括叶片或叶柄，将叶片或叶柄作为外植体；在上述步骤b中，叶片切成0.5X0.5-1.0cm2的材料块，老山芹叶柄切成
0.5-1.0cm长的切段。
[0012]进一步，在上述步骤b中，调节培养基pH为5.21-5.81。
[0013]与现有技术相比较本发明的有益效果在于:本发明生产方法简单，成本低；愈伤组织诱导率高，愈伤组织质量高；为今后开展老山芹组培工厂化高效繁育技术研究奠定重要的基础，同时也可为老山芹的细胞诱变育种和原生质体融合育种技术的建立奠定重要的理论和技术基础。
【具体实施方式】
[0014]以下，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。
[0015]本发明老山芹愈伤组织诱导方法，包括下述步骤:
[0016]步骤a，老山芹外植体制备和消毒:老山芹叶片或叶柄作为外植体，在70%酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1% HgCl2溶液消毒3_7分钟，无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分。
[0017]步骤b，老山芹愈伤组织诱导:将上述步骤a中处理好的老山芹叶片切成
.0.5X0.5-1.0cm2的材料块，老山芹叶柄切成0.5-1.0cm长的切段，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤。
[0018]该诱导愈伤组织培养基为在I升MS基本培养基中加入下述的原料制成:蔗糖20-40g，琼脂粉 5.5-8.5g，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.25-2.0mg，6-(苄胺基)嘌呤(6-BA) 0.25-2.0mg0 调节培养基 pH 为 5.21-5.81。
[0019]配制好的培养基分装在培养瓶中，每瓶30毫升，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于温度为24-26 °C、暗培养2天，然后在光照强度为2000-30001x下，每天光照12-16小时，培养15-20天。
[0020]下面列举实施例，对上述方法进行详细说明。
[0021]实施例一:
[0022]将叶片和叶柄接种在2，4_D和6-BA培养基上，结果发现两种外植体在不同生长素的培养基上虽均可形成愈伤组织，但两种外植体的诱导愈伤组织能力存在一定的差异。在6-BA浓度0.25-2.0mg/L下，叶柄愈伤诱导率变化范围为36.6-67.5%，叶片愈伤诱导率变化范围为30.0-56.7%。在2，4-D浓度0.25-2.0mg/L下，叶柄愈伤诱导率变化范围为
28.3-70.8%，叶片愈伤诱导率变化范围为20.8-60.8%。
[0023]实施例二:
[0024]将叶片和叶柄接种诱导愈伤培养基上，在黑暗和交替光照条件培养，结果表明，不同光照条件对老山芹愈伤组织诱导有较大的影响。在完全黑暗条件下，叶片和叶柄愈伤组织诱导率分别为29.2%和33.3%。采用先黑暗，然后进行每天10-16小时光照培养，叶片愈伤组织诱导率变化范围为54.2-79.4%，叶柄愈伤组织诱导率变化范围为50.0-87.5%。光照强度对老山芹愈伤组织诱导也有较大影响。光照强度在2000-3000LUX范围内，叶片愈伤组织诱导率变化范围为54.2-75.0%，叶柄愈伤组织诱导率变化范围为54.2-87.5%。
[0025]实施例三:[0026]将叶片和叶柄接种诱导愈伤培养基上，培养基pH范围为4.81-6.52。结果表明，pH对老山芹愈伤组织诱导有较大的影响。培养pH在4.81-6.52范围内，不同pH下的愈伤诱导有较大差异。叶片愈伤组织诱导率变化范围为25.0-79.2%，叶柄愈伤组织诱导率变化范围为 37.5-83.3%。
[0027]实施例四:[0028]培养基中琼脂粉和蔗糖含量对老山芹愈伤组织诱导也有一定影响。每升培养基中琼脂粉含量在5.5-8.5g范围内，叶片愈伤组织诱导率变化范围为58.3-79.2%，叶柄愈伤组织诱导率变化范围为54.2-79.2%。
[0029]以上所述仅为本发明的较佳实施例，对发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。
【权利要求】
1.一种老山芹愈伤组织诱导方法，其特征在于，该具体过程为: 步骤a，老山芹外植体制备和消毒:选取老山芹培养材料，在70%酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1 % HgCl2溶液消毒3-7分钟，无菌水冲洗3_5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分； 步骤b，老山芹愈伤组织诱导:将上述步骤a中处理好的老山芹培养材料分割，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤； 该诱导愈伤组织培养基为在I升MS基本培养基中加入下述的原料制成:蔗糖20-40g，琼脂粉 5.5-8.5g，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.25-2.0mg，6-(苄胺基)嘌呤(6-BA) 0.25-2.0mg ;调节培养基 pH ； 将配制好的培养基分装在培养瓶中，每瓶30毫升，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于温度为24-26°C、暗培养2天，然后在光照强度为2000_30001χ下，每天光照12-16小时，培养15-20天。
2.根据权利要求1所述的老山芹愈伤组织诱导方法，其特征在于，在上述步骤a中，所述老山芹培养材料包括叶片或叶柄，将叶片或叶柄作为外植体；在上述步骤b中，叶片切成0.5X0.5-1.0cm2的材料块，老山芹叶柄切成0.5-1.0cm长的切段。
3.根据权利要求1或2所述的老山芹愈伤组织诱导方法，其特征在于，在上述步骤b中，调节培养基pH为5.21-5.81。
【文档编号】A01H4/00GK103907532SQ201410113542
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年3月21日 优先权日:2014年3月21日
【发明者】姜述君, 范文艳, 刘朝, 戴凌燕, 孙聪 申请人:黑龙江八一农垦大学