一种试管珍珠的培育方法
【专利摘要】本发明公开了一种试管珍珠的培育方法，该方法是：首先用撕膜法取下外套膜边缘膜的外表皮，然后，将外表皮消化制成上皮细胞液，其次，配制培养基，再次，进行细胞培养，使细胞贴核形成完整的育珠囊，最后，将育珠囊移植到育珠蚌体内培育珍珠。本发明通过在试管内培育外套膜细胞，使细胞均匀贴附在珠核上，形成完整的育珠囊，再移植到育珠蚌体内培育珍珠，降低了现有技术中外套膜小片由于手术误差等原因无法均匀生长形成完整的育珠囊，造成育珠囊分泌珍珠质不均匀，产生污珠、尾巴珠、焦头珠等劣质珍珠产生的概率，有效提高了养殖珍珠的质量。
【专利说明】一种试管珍珠的培育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及淡水珍珠养殖领域，具体为一种试管珍珠的培育方法。
【背景技术】
[0002]目前，我国人工养殖淡水珍珠的产量已居世界首位，从2000年产珠1000多吨(占世界珍珠总产量的95份(重量份))发展到2005年产珠1200多吨(约占世界总产量的90份(重量份))，2008年其产量达到了高峰，约1500t，目前维持在1200-1500t。珍珠产量虽然上去了，珍珠质量并没有大的提高。我国生产的淡水珍珠，优质高档珠不足二成。大量劣质珍珠充斥市场，导致珠价下跌，珍珠市场持续低糜，珍珠养殖出现总量增加，总值下降的现象，严重影响珍珠产业的经济效益。据统计，我国每年淡水珠产量占世界珍珠总产量的90份(重量份)以上，销售额却仅占世界珍珠销售总额的20份(重量份)左右，这说明我国珍珠产量与价值存在明显的偏差，出现严重的产销不平衡的问题。其根本原因是养殖珍珠的质量普遍不高，优质珍珠的比例太低。虽然我国每年有1200-1500吨的珍珠产量，但是高附加值的优质珍珠，即可以加工首饰珠宝的原珠产量并不高，每年有将近900吨左右的低附加值的劣质珍珠，由于受加工技术的限制，应用及产业化程度偏低，附加值也无法得到提升，严重制约了国内珍珠产业的可持续健康发展。因此，探索研究新的育珠技术，提高珍珠品质，培育优质高档珍珠是现阶段及今后发展珍珠产业的重要课题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是通过在试管内培育外套膜细胞，使细胞均匀贴附在珠核上，形成完整的育珠囊，再移植到育珠蛘体内培育珍珠，达到减少手术误差，提高养殖珍珠质量的目的，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0004]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种试管珍珠的培育方法，包括以下步骤:
(1)选取I龄池蝶蛘幼蛘，剪下其外套膜的边缘膜，用撕膜法剥离边缘膜的外表皮，并剪成0.5-1.5mm的细胞小块；
(2)将剪成的细胞小块放入浓度为0.3份(重量份)的胰蛋白酶消化液中，于25。C恒温情况下消化15_25min，用絹网过滤除去多余的组织块，再加入少量经过灭活消毒处理的池蝶蛘体液，制成上皮细胞液；
(3)用RPMI1640基本培养基加入池蝶蛘体液和小牛血清以及青霉素和链霉素配制成培养基溶液，其中，加入的RPMI1640基本培养基、蝶蛘体液和小牛血清重量份比为:45-55:30-50:15-25 ；
(4)将步骤(2)中制得的上皮细胞液和珠核一起放入盛有培养基溶液的试管中，于25。C恒温培养箱中培养至试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊；
(5)待试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊后，进行移植手术，将包有完整育珠囊的珠核移植到I龄以上池蝶蛘的外套膜或内脏团中，经3-5年的精心培育，可收获优质珍珠。
[0005]作为本发明的进一步方案，步骤(2)中，所述胰蛋白酶消化液的PH值为7.2。
[0006]作为本发明的进一步方案，步骤(3)中，所述青霉素和链霉素的浓度均为100IU/ml ο
[0007]作为本发明的进一步方案，步骤(2)中，所述RPMI1640基本培养基、蝶蛘体液和小牛血清重量份比为50:40:20。
[0008]本发明与以往技术相比，具有以下优点:
本发明通过在试管内培育外套膜细胞，使细胞均匀贴附在珠核上，形成完整的育珠囊，再移植到育珠蛘体内培育珍珠，降低了现有技术中外套膜小片由于手术误差等原因无法均匀生长形成完整的育珠囊，造成育珠囊分泌珍珠质不均匀，产生污珠、尾巴珠、焦头珠等劣质珍珠产生的概率，有效提高了养殖珍珠的质量。
[0009]说明书附图
图1为本发明的工艺流图。
【具体实施方式】
[0010]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0011]实施例1
如图1所示，一种试管珍珠的培育方法:首先，精选I龄池蝶蛘幼蛘，剪下其外套膜的边缘膜，用撕膜法剥离边缘膜的外表皮，洗净消毒，剪成0.5mm大小的细胞小块；然后，将细胞小块放入培养瓶中，加入浓度为0.3份(重量份)、PH值为7.2的胰蛋白酶消化液，在温度为25° C的恒温培养箱中消化15min，用200目絹网过滤除去多余的组织块，加入少量已灭活消毒处理的池蝶蛘体液，制成上皮细胞液；其次，用总体积45份(重量份)的RPMI1640基本培养基、总体积30份(重量份)的池蝶蛘体液、总体积15份(重量份)的小牛血清和适量的青霉素、链霉素配制成完全培养基，使青霉素和链霉素的浓度均为100IU/ml ;再次,将配制好的完全培养基装入试管(培养瓶)中，分别加入上皮细胞液和珠核，置于25° C恒温培养箱中培养至试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊之后，将包有育珠囊的珠核移植到I龄以上池蝶蛘的内脏团或者外套膜中培育珍珠；最后，经3-5年的精心培育，可育出优质正圆珍珠。
[0012]实施例2
一种试管珍珠的培育方法:首先，精选I龄池蝶蛘幼蛘，剪下其外套膜的边缘膜，用撕膜法剥离边缘膜的外表皮，洗净消毒，剪成Imm大小的细胞小块；然后，将细胞小块放入培养瓶中，加入浓度为0.3份(重量份)、PH值为7.2的胰蛋白酶消化液，在温度为25。C的恒温培养箱中消化20min，用200目絹网过滤除去多余的组织块，加入少量已灭活消毒处理的池蝶蛘体液，制成上皮细胞液；其次，用50份(重量份)的RPMI1640基本培养基、40份(重量份)的池蝶蛘体液、20份(重量份)的小牛血清和适量的青霉素、链霉素配制成完全培养基，使青霉素和链霉素的浓度均为100IU/ml ;再次，将配制好的完全培养基装入试管(培养瓶)中，分别加入上皮细胞液和珠核，置于25。C恒温培养箱中培养至试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊之后，将包有育珠囊的珠核移植到I龄以上池蝶蛘的内脏团或者外套膜中培育珍珠；最后，经3-5年的精心培育，可育出优质正圆珍珠。 [0013]实施例3
一种试管珍珠的培育方法:首先，精选I龄池蝶蛘幼蛘，剪下其外套膜的边缘膜，用撕膜法剥离边缘膜的外表皮，洗净消毒，剪成0.5mm大小的细胞小块；然后，将细胞小块放入培养瓶中，加入浓度为0.3份(重量份)、PH值为7.2的胰蛋白酶消化液，在温度为25° C的恒温培养箱中消化15min，用200目絹网过滤除去多余的组织块，加入少量已灭活消毒处理的池蝶蛘体液，制成上皮细胞液；其次，用55份(重量份)的RPMI1640基本培养基、50份(重量份)的池蝶蛘体液、25份(重量份)的小牛血清和适量的青霉素、链霉素配制成完全培养基，使青霉素和链霉素的浓度均为100IU/ml ;再次，将配制好的完全培养基装入试管(培养瓶)中，分别加入上皮细胞液和珠核，置于25。C恒温培养箱中培养至试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊之后，将包有育珠囊的珠核移植到I龄以上池蝶蛘的内脏团或者外套膜中培育珍珠；最后，经3-5年的精心培育，可育出优质正圆珍珠。
[0014]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
【权利要求】
1.一种试管珍珠的培育方法，其特征是，包括以下步骤: (1)选取1龄池蝶蛘幼蛘，剪下其外套膜的边缘膜，用撕膜法剥离边缘膜的外表皮，并剪成0.5-1.5mm的细胞小块； (2)将剪成的细胞小块放入浓度为0.3份(重量份)的胰蛋白酶消化液中，于25。C恒温情况下消化15-25min，用絹网过滤除去多余的组织块，再加入经过灭活消毒处理的池蝶蛘体液，制成上皮细胞液； (3)用RPMI1640基本培养基加入池蝶蛘体液和小牛血清以及青霉素和链霉素配制成培养基溶液，其中，加入的RPMI1640基本培养基、蝶蛘体液和小牛血清重量份比为:45-55:30-50:15-25 ； (4)将步骤(2)中制得的上皮细胞液和珠核一起放入盛有培养基溶液的试管中，于25。C恒温培养箱中培养至试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊； (5)待试管中的上皮细胞聚集在珠核表面形成完整的育珠囊后，进行移植手术，将包有完整育珠囊的珠核移植到I龄以上池蝶蛘的外套膜或内脏团中，经3-5年的培育，可收获优质珍珠。
2.根据权利要求1所述的一种试管珍珠的培育方法，其特征是，步骤(2)中，所述胰蛋白酶消化液的PH值为7.2。
3.根据权利要求1所述的一种试管珍珠的培育方法，其特征是，步骤(3)中，所述青霉素和链霉素的浓度均为100IU/ml。
4.根据权利要求1所述的一种试管珍珠的培育方法，其特征是，所述RPMI1640基本培养基、蝶蛘体液和小牛血清重量份比为50:40:20o
【文档编号】A01K61/00GK103931523SQ201410130268
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年5月6日 优先权日:2014年5月6日
【发明者】丁文军, 曹士广, 齐玉平, 陈莉, 钟瑞, 王美红 申请人:江西万年县凤珠实业有限公司